李貞，楊保偉，夏效東，王新，席美麗

（西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西楊凌712100）

0 引言

食品安全作為一個重大的世界性公共衛(wèi)生問題，其核心目標(biāo)在于控制食源性疾病，而微生物污染則是引發(fā)食品安全問題的重要因素之一。阪崎克羅諾桿菌（Cronobacter sakazakii）作為一種新近發(fā)現(xiàn)的食源性病原菌，特別容易導(dǎo)致嬰幼兒，尤其是出生時體重較輕的新生兒感染[1]。新生兒感染該菌可導(dǎo)致腦膜炎、壞死性小腸結(jié)腸炎和菌血癥，并可引起嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥甚至死亡，且死亡率高達(dá)50%以上[2]。雖然目前還不能明確定位其宿主和傳播途徑，但多起新生兒阪崎克羅諾桿菌感染事件基本證實嬰幼兒配方粉是該菌主要的感染源[3]。本文從分類、流行狀況、檢測和分型方法、藥敏性以及毒理研究等方面綜述了阪崎克羅諾桿菌的研究進(jìn)展，以期為該菌相關(guān)研究提供參考。

1 阪崎克羅諾桿菌分類

阪崎克羅諾桿菌（Cronobacter sakazakii,C.sakazakii）為腸桿菌科、腸桿菌屬的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。最初C.sakazakii被認(rèn)為是腸桿菌的生物變型菌，并被命名為“黃色陰溝腸桿菌（Enterobacter cloacae）”。直到1980年，F(xiàn)armer[1]與其合作者基于DNA雜交、生化反應(yīng)、黃色菌落產(chǎn)物及藥敏性等研究結(jié)果，建議將該菌更名為E.sakazakii。2008年，Iversen等[2]根據(jù)擴(kuò)增片段長度多態(tài)性（Amplified fragment length polymorphismas，AFLP）、16S rRNA全序列、DNA-DNA雜交遺傳特征和Biotype100、Biologe細(xì)菌鑒定系統(tǒng)的表型特征等綜合分析，提議將阪崎克羅諾桿菌生物群劃分為一個新屬，即：克羅諾桿菌屬（Cronobacter spp.），該屬包括7個種 Cronobacter sakazakii、Cronobacter malonaticus、Cronobacter dublinensis、Cronobacter muyyjensii、Cronobacter turicensis、C.universalis和 C.condimenti[3-4].

2 嬰幼兒配方乳粉中阪崎克羅諾桿菌的污染狀況

2.1 國外產(chǎn)品阪崎克羅諾桿菌帶染狀況

1961年，英國首次報道2例由阪崎克羅諾桿菌引起的腦膜炎病例[5]。隨后，在捷克斯洛伐克、美國、法國和加拿大等30多個國家的市售嬰幼兒配方粉中均檢測到了阪崎克羅諾桿菌[6-10]。1990年，Clark等[8]調(diào)查了2起新生兒阪崎克羅諾桿菌感染事件后，發(fā)現(xiàn)從病人和配方粉中分離到的阪崎克羅諾桿菌具有共同特征。2001年4月，在美國田納西州，發(fā)現(xiàn)10例感染阪崎克羅諾桿菌的嬰兒體內(nèi)分離到的阪崎克羅諾桿菌與從嬰兒食用的已開罐和未開罐配方奶粉中分離到的菌株脈沖場凝膠電泳（Pulse field gel electrophore-sis,PFGE）指紋圖譜一致，從而導(dǎo)嬰兒配方粉被大范圍召回[11]。此后，美國分別于2002年3月和9月，2003年1月多次大規(guī)模召回阪崎克羅諾桿菌污染的嬰幼兒配方奶粉。在法國，2004年12月，由于可能與阪崎克羅諾桿菌腦膜炎致死病例有關(guān)，受污染的嬰幼兒配方奶粉（PregestimilTM）引發(fā)了全世界范圍的大規(guī)模召回[12]。在巴西、阿根廷和盧森堡，也有受阪崎克羅諾桿菌污染的嬰幼兒配方奶粉被召回的案例[13]。隨著一系列因感染阪崎克羅諾桿菌導(dǎo)致疾病和嬰幼兒配方粉被大量召回，嬰幼兒配方粉中阪崎克羅諾桿菌的污染問題已經(jīng)在國外引起廣泛關(guān)注。盡管國外對食源性致病的安全控制體系已經(jīng)比較完善，然而，不斷出現(xiàn)的食品安全事件仍需引起廣大消費(fèi)者的重視。

2.2 我國產(chǎn)品阪崎克羅諾桿菌帶染狀況

在我國，劉秀梅等[14]2004年首次報導(dǎo)從87份安徽阜陽劣質(zhì)嬰兒配方奶粉中檢出阪崎克羅諾桿菌，檢出率為12.6%。隨后，黎明等[15]、張欣強(qiáng)等[16]、權(quán)玉玲等[17]分別從我國成都市、廣州市、甘肅省采集的嬰幼兒配方粉中檢出阪崎克羅諾桿菌，檢出率從4.41%～6.31%不等。戴嵐等[18]還從含乳冷飲中檢出了阪崎克羅諾桿菌，且陽性率達(dá)40%。乳粉是含乳冷飲的重要原料，因此冷飲受阪崎克羅諾桿菌污染與生產(chǎn)原料必定有關(guān)。裴曉燕和劉秀梅[19]對我國市售的81個品牌212份嬰幼兒配方粉中分離到的阪崎腸桿菌研究表明，不同品牌產(chǎn)品中阪崎克羅諾桿菌的檢出率存在顯著差異。她們的研究結(jié)果與世界糧農(nóng)組織（Food and Agriculture Organization of the United Nations，F(xiàn)AO）和世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）的報道一致[20]。目前，國內(nèi)研究多數(shù)集中在嬰幼兒配方粉中阪崎克羅諾桿菌污染的調(diào)查，至今未發(fā)現(xiàn)因食用乳粉引起的阪崎克羅諾桿菌致病的報道。2004年2月，F(xiàn)AO/WHO[20]在日內(nèi)瓦召開的嬰兒配方粉中阪崎克羅諾桿菌研討會上，與會專家提出嬰兒配方粉中微量的阪崎克羅諾桿菌污染也能導(dǎo)致感染發(fā)生，因此應(yīng)對嬰兒配方粉的加工、制作和滅菌過程以及貯藏和食用等關(guān)鍵控制點(diǎn)進(jìn)行嚴(yán)格管理，減少阪崎克羅諾桿菌污染機(jī)會。

3 阪崎克羅諾桿菌的檢測

3.1 生理生化法

阪崎克羅諾桿菌的主要檢測方法為定量檢驗法，即：Most Probable Number（MPN）法和 DFI（Druggan-Forsythe-Iversen）法。MPN法主要依據(jù)美國食品藥品管理局（U.S.Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）推薦的“嬰兒配方乳粉中阪崎腸桿菌的分離與計數(shù)”檢測程序進(jìn)行。檢測時，在無菌條件下稱取樣品100 g、10 g和1 g各3份，分別稀釋成1∶10的溶液，取10 mL溶液到90 mL腸桿菌增殖肉湯中培養(yǎng)或直接取適量增菌液在結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂（VRBGA）培養(yǎng)基上劃線，36℃培養(yǎng)過夜后挑取疑似菌落劃線于大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）平板，25℃培養(yǎng)48～72 h。挑取黃色菌落用API 20E生化鑒定試劑條鑒定，同時進(jìn)行氧化酶實驗[21]。該方法自2002年公布以來，一直被國際上認(rèn)為是阪崎克羅諾桿菌檢測的經(jīng)典方法[22]，但該檢測需要持續(xù)7天左右的時間且靈敏度不高。DFI法[23]在MPN法的基礎(chǔ)上改進(jìn)而得。檢測時，在阪崎腸桿菌顯色平板上涂布0.1 mL腸道菌增菌肉湯（EE）增菌液，于36℃培養(yǎng)24 h，藍(lán)綠色菌落為阪崎克羅諾桿菌疑似菌落。該改良法已被廣泛應(yīng)用，相對經(jīng)典方法能縮短2 d左右時間，且提高了檢測的特異性。

3.2 API 20E生化鑒定法

API 20E（bioMe′rieux,法國）是革蘭氏陰性腸道菌鑒定的常用的商品化鑒定試劑條之一,可基于其用傳統(tǒng)細(xì)菌的生理生化表型特征分析方法獲取鑒定結(jié)果[24]。耗材種類少，反應(yīng)速度快。然而,使用該試劑條對細(xì)菌可能只能鑒定到屬的水平、結(jié)果判別時不同操作者因?qū)Ψ磻?yīng)顏色判斷存在差異而導(dǎo)致檢驗結(jié)果的不一致性等不足。Cetinkaya等[25]、Gicˇová等[26]、Turcovsky等[27]和Pan等[28]利用此法對阪崎克羅諾桿菌進(jìn)行了生化鑒定。

3.3 分子生物學(xué)檢測方法

分子生物學(xué)的不斷發(fā)展使一些靈敏度高、特異性強(qiáng)的檢測技術(shù)可以應(yīng)用到食品病原菌的檢測之中。阪崎克羅諾桿菌的傳統(tǒng)檢測方法耗時長，操作繁瑣，靈敏度不高。分子生物學(xué)檢測方法克服了傳統(tǒng)檢測法存在的問題，使得阪崎克羅諾桿菌快速檢測技術(shù)得以迅速發(fā)展。常用方法有PCR法、實時定量PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)（LAMP）、探針法等。

3.3.1 PCR法

2003年Keyser等[29]在評估3種上流式厭氧污泥床技術(shù)處理葡萄酒釀造廠廢水的能力時，首次報道了阪崎克羅諾桿菌的PCR快速檢測方法。2004年，Lehenr等[30]發(fā)現(xiàn)Keyser等[29]建立的PCR檢測系統(tǒng)在特異性上存在較大問題，不能檢測到阪崎克羅諾桿菌ATCC51329這一分支，于是根據(jù)多株阪崎克羅諾桿菌的16S rRNA測試結(jié)果建立了特異性PCR檢測系統(tǒng)，并證實了該系統(tǒng)具有良好的特異性和可靠性。

由于單重PCR檢測在特異性和靈敏度上均存在一定差別，為了確定最適的阪崎克羅諾桿菌PCR檢測方法，Cawthorn等[31]分別對基于16S rRNA、ITS序列和α-葡萄糖苷酶基因等不同片段的6種檢測方法進(jìn)行了比較和評價，發(fā)現(xiàn)基于16S RNA基因擴(kuò)增產(chǎn)物為929 bp的方法最適合阪崎克羅諾桿菌的檢測。同時，Ye等[32]比較了基于ompA基因、ITS序列和α-葡萄糖苷酶基因的3種檢測方法，結(jié)果顯示針對α-葡萄糖苷酶基因擴(kuò)增產(chǎn)物為673 bp的檢測方法有最高的特異性和較高的靈敏度。2013年Huang等[33]利用DNA促旋酶B亞基基因設(shè)計引物，建立了一種只能用于區(qū)別阪崎克羅諾桿菌和都柏林克羅諾桿菌的普通PCR檢測方法。

3.3.2 實時定量PCR

Malorny 等[34]和 Kang等[35]先后于2005年和2007年針對阪崎克羅諾桿菌16S rRNA基因的特異序列設(shè)計了引物和探針，建立了Taq Man探針檢測方法。

2005年Seo和Brackett[36]首次針對阪崎克羅諾桿菌部分大分子合成操縱子rpsU基因3'端和dnaG基因5'端設(shè)計探針，建立了實時定量（Real-time Polymerase Chain Reaction，PCR）PCR檢測方法。該方法能特異性鑒別阪崎克羅諾桿菌和其他腸桿菌及非腸桿菌科細(xì)菌，無需平板接種和生化鑒定，大大節(jié)省了時間，被認(rèn)為是嬰兒配方粉中低污染水平阪崎腸桿菌快速、高靈敏度的定性和定量檢測方法，并被FDA認(rèn)定為篩選和確認(rèn)嬰兒配方奶粉中阪崎克羅諾桿菌的官方方法之一。Liu等[37]2006年基于TaqMan和SYBRgreen技術(shù)針對16 S～23S rRNA間區(qū)序列設(shè)計引物，建立了2種實時PCR方法用于檢測經(jīng)多位點(diǎn)序列分型（MLST）和BHI培養(yǎng)后選擇性富集的阪崎克羅諾桿菌，結(jié)果顯示兩種方法的準(zhǔn)確率達(dá)100%。食源性致病菌PCR檢測時，假陰性結(jié)果會對人的健康構(gòu)成威脅，而內(nèi)參排除假陰性使結(jié)果真實可靠，一些學(xué)者在進(jìn)行定量PCR時都加入了內(nèi)參以監(jiān)測整個PCR體系，但內(nèi)參的加入會使檢測限稍有降低[38]。Cai等[39]利用外膜蛋白基因ompA基因建立了針對克羅諾桿菌屬菌株的熒光定量PCR方法，不但可以快速檢測克羅諾桿菌屬菌株，還能夠進(jìn)行基因分型。

3.3.3 環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)

環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）是Notomi等[40]于2000年開發(fā)的一種新的恒溫核酸擴(kuò)增方法，具有特異性高和等溫擴(kuò)增快速的特點(diǎn)。賀楠等[41]針對阪崎克羅諾桿菌16S rRNA設(shè)計LAMP引物，分別擴(kuò)增了阪崎克羅諾桿菌標(biāo)準(zhǔn)株（ATCC51329和ATCC29544），3株參考株及13種近源菌株，最低檢測限可達(dá)0.3 pg基因組DNA，靈敏度為普通PCR的1 000倍。胡連霞等[42]、張宏偉等[43]、馬寅眾等[44]分別以阪崎腸桿菌的ITS序列、16S rRNA及ompA為靶序列，設(shè)計特異性引物進(jìn)行LAMP檢測，結(jié)果準(zhǔn)確且靈敏度高。張霞等[45]以環(huán)介導(dǎo)等溫技術(shù)為基礎(chǔ)，建立了新型交叉引物恒溫擴(kuò)增法，既避免了普通LAMP使用肉眼觀察沉淀或顏色變化的主觀性，且不需要復(fù)雜儀器，對快速篩查、不發(fā)達(dá)地區(qū)順利開展檢測具有實際意義。2012年范宏英等[46]針對阪崎克羅諾桿菌建立了LAMP法并與PCR法進(jìn)行比較，確立了檢測限，對36株近源菌進(jìn)行特異性檢測后發(fā)現(xiàn)兩法均有很好的特異性。2014年周巍等[47]建立了一種檢測嬰兒配方乳粉中阪崎克羅諾桿菌的解旋酶恒溫基因擴(kuò)增方法，此法特異性強(qiáng)、靈敏性高、耗時短，為快速檢測提供了新方法。

3.3.4 探針雜交方法

Almeida等[48]針對阪崎克羅諾桿菌的16S rRNA設(shè)計了一條肽核酸（PNA）探針，檢測嬰幼兒配方粉中阪崎克羅諾桿菌時具有很好的特異性和靈敏性。德國醫(yī)藥研究公司也針對阪崎克羅諾桿菌16S rRNA設(shè)計了一種熒光標(biāo)記的DNA探針，基于此探針建立了一整套檢測及鑒定系統(tǒng)[49]。Lehner等[49]依據(jù)Vermicon identification technology（VIT）操作指南對阪崎克羅諾桿菌進(jìn)行基因探針檢測研究，與普通PCR相比，兩種檢測方法都具有很好的特異性。探針雜交技術(shù)不需要提取DNA，檢測快捷，但此技術(shù)原則上只能檢測到活菌體。

基于探針雜交技術(shù)的基因芯片具有高通量、操作簡便快速、特異性強(qiáng)、敏感性高等優(yōu)點(diǎn)。Liu等[50]利用基因芯片技術(shù)，依據(jù)6株阪崎克羅諾桿菌的ITS序列和GenBank序列信息設(shè)計探針，對23株阪崎克羅諾桿菌和65株其他菌進(jìn)行特異性檢測，結(jié)果未出現(xiàn)假陰性和假陽性。經(jīng)過選擇性富集，靈敏度可達(dá)1.3 CFU/100g嬰兒配方粉。Wang等[51]基于ITS序列和O抗原聚合酶基因?qū)Πㄚ嫫榭肆_諾桿菌在內(nèi)的10種致病菌進(jìn)行基因芯片檢測，靈敏度可達(dá)到0.100 ng DNA。

4 分子分型

目前，用于阪崎克羅諾桿菌的分子分型方法有隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD）、核糖體分型（Ribotyping）和PFGE法等[52-54]。近幾年，多位點(diǎn)序列分型（multilocus sequence typing,MLST）技術(shù)成為受研究者關(guān)注的細(xì)菌分子分型方法。

4.1 PFGE

PFGE是20世紀(jì)80年代中期發(fā)展起來的用于分離線狀DNA大分子的一種電泳技術(shù),是目前公認(rèn)的最標(biāo)準(zhǔn)、最可靠的病原菌分子分型方法，被譽(yù)為“金標(biāo)準(zhǔn)”[55]。PFGE分型方法分辨力高、重復(fù)性好，易于標(biāo)準(zhǔn)化，便于不同實驗室之間的結(jié)果比較。1996年，美國疾病預(yù)防控制中心（U.S Centers for Disease Control and Prevention,CDC）制訂了各種細(xì)菌的PFGE分型標(biāo)準(zhǔn)，建立了覆蓋北美、歐洲、亞太等地區(qū)的以PFGE技術(shù)為核心的細(xì)菌分子分型國家電子網(wǎng)絡(luò)（PulseNet）使各實驗室數(shù)據(jù)溝通交流更加方便。目前，PulseNet在E.coli O157：H7、沙門氏菌、李斯特菌和副溶血弧菌等常見致病菌的分型、監(jiān)測和疾病預(yù)防控制中發(fā)揮著重要作用[56-57]。

1999年，Nazarowec-White等對加拿大配方粉和臨床樣本分離到的18株阪崎克羅諾桿菌進(jìn)行PFGE和核糖體分型時，從同一食品生產(chǎn)廠家分離到的核糖體指紋圖相同的3株菌XbaⅠ酶切PFGE電泳圖譜各不相同，但其中2株SpeⅠ酶切圖譜相同，SpeⅠ酶切結(jié)果的分辨率略低于XbaⅠ，故Nazarowec-White等推薦最好能用1種以上的限制性內(nèi)切酶消化細(xì)菌染色體DNA，以便更好鑒別阪崎克羅諾桿菌[58]。2008年，裴曉燕等[59]首次在國內(nèi)同時采用XbaⅠ和SpeⅠ兩種限制性內(nèi)切酶對中國2004至2006年分離的阪崎克羅諾桿菌進(jìn)行PFGE分型研究，發(fā)現(xiàn)得到的條帶存在不同程度的差異，可用于阪崎克羅諾桿菌流行株的溯源研究。2010年，許龍巖等[60]采用XbaⅠ對部分國內(nèi)外食品中分離得到的38株阪崎克羅諾桿菌進(jìn)行PFGE分型，獲得了37個型別。柴云雷等[61]對10株來源不同的阪崎克羅諾桿菌進(jìn)行了PFGE分型，與16S rDNA序列分析后發(fā)現(xiàn)PFGE的分型能力明顯優(yōu)于16S rDNA序列分析。周蒂等[62]對2009年-2013年幼兒配方奶粉生產(chǎn)監(jiān)控過程分離的46株阪崎克羅諾桿菌菌株進(jìn)行了PFGE分型研究并取得很好的分型結(jié)果。

4.2 多位點(diǎn)序列分型技術(shù)

多位點(diǎn)序列分型技術(shù)（Multilocus Sequence Typing,MLST）是近年來發(fā)展速度非?？斓姆肿由飳W(xué)分型方法，由多位點(diǎn)酶切電泳技術(shù)（Multilocus enzyme electrophoresis,MLEE）衍生出來，操作簡便,數(shù)據(jù)方便共享，具有很高分辨力,目前已應(yīng)用于多種細(xì)菌的分型和進(jìn)化分析[63]。雖然阪崎克羅諾桿菌日益受到廣泛關(guān)注，但國外對其進(jìn)行MLST分型的研究還為數(shù)不多，國內(nèi)則更少。2009年Baldwin等[64]建立了基于阪崎克羅諾桿菌ATCC BAA-894全基因組7個管家基因atpD、fusA、glnS、gltB、gyrB、infB和ppsA的克羅諾桿菌MLST分型方法，并指出了ST型與克羅諾桿菌的分離特征和致病性間的相關(guān)性。趙冬等[65]對石家莊市售嬰幼兒食品和環(huán)境中分離的19株阪崎克羅諾桿菌和1株標(biāo)準(zhǔn)株ATCC51329進(jìn)行MLST分型后得到12個序列型,發(fā)現(xiàn)9個新ST型。Joseph和Forsythe[66-67]以及Sonbol等[68]研究表明ST4型阪崎克羅諾桿菌與致病性密切相關(guān)，是全球近20年來最為重要的序列型。2012年，Strydom等[69]根據(jù)DNA雜交、表型分型、16S rRNA測序和利用7個看家基因的多序列分析方法對克羅諾桿菌屬菌株進(jìn)行了重新分類。Cui等[70]和Pan等[28]對阪崎克羅諾桿菌進(jìn)行了PFGE和MLST分型，Cui等[71]對來自我國九個省不同來源的151株菌株進(jìn)行了MLST分型，與PubMLST數(shù)據(jù)庫比對后發(fā)現(xiàn)部分從食品和水中分析得到的序列型與之前其他國家報道的臨床中的序列型相同。

5 藥敏性

1980年，F(xiàn)armer等[1]采用 Kirby—Bauer法檢測了24株阪崎克羅諾桿菌對抗生素的敏感性。1988年Willis和Robinson[72]推薦使用慶大霉素和氨比西林聯(lián)合治療作為阪崎腦膜炎治療的金標(biāo)準(zhǔn)。2002年，Dennison等[73]從1名64歲患者傷口上分離到的阪崎克羅諾桿菌對氨比西林、慶大霉素和頭孢噻肟產(chǎn)生抗性，與早期的文獻(xiàn)報道相差甚遠(yuǎn)。由于腸桿菌科細(xì)菌能夠產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，較易產(chǎn)生針對廣譜抗菌素氨芐西林和頭孢菌素的耐藥性。Block等[74]和Caubilla-Barron等[75]先后于2002年和2007年對來自新生兒和兒童患者的阪崎克羅諾桿菌進(jìn)行藥敏性分析后，表明這些菌株均為β-內(nèi)酰胺酶陽性。

裴曉燕等[76]、陸崢等[77]、李秀娟等[78]先后在2007-2010年采用紙片擴(kuò)散法對嬰幼兒配方食品或奶粉生產(chǎn)環(huán)境的阪崎克羅諾桿菌進(jìn)行了藥敏性測定。此外，相關(guān)研究表明嬰幼兒配方粉中阪崎克羅諾桿菌的耐藥性明顯低于臨床分離株[76,79]，其原因可能由于配方法中阪崎克羅諾桿菌主要來自環(huán)境污染，而臨床分離株受臨床用藥的影響較大，易產(chǎn)生耐藥性。由于抗生素的廣泛使用和濫用，致使細(xì)菌的耐藥程度逐漸增強(qiáng)。阪崎克羅諾桿菌從最初發(fā)現(xiàn)至今，耐藥性逐漸增加，盡管對其采用的治療方案在不斷變化，仍增加了臨床治療的難度。

6 阪崎克羅諾桿菌毒理研究

阪崎克羅諾桿菌是一種條件致病菌，雖然該菌很多致病機(jī)制尚待闡明，但對其毒力因子的研究可能成為揭示其致病機(jī)理的關(guān)鍵。2003年，Pagotto等[80]首次提出阪崎克羅諾桿菌的毒力因子可能是一類腸毒素樣（Enterotoxin-like）化合物，他們使用18株阪崎克羅諾桿菌以腹腔注射和口腔注入兩種方式感染乳鼠,108CFU/每鼠劑量時，18株試驗株均能在3 d內(nèi)導(dǎo)致乳鼠死亡。

OmpA是革蘭氏陰性細(xì)菌中最主要的毒力因子之一。Wu等[81]基于小鼠模型研究表明該蛋白的表達(dá)會影響新生小鼠腦膜炎的發(fā)生，在100%致死率的小鼠模型中均檢測到OmpA，未檢測到OmpA的感染小鼠中未發(fā)現(xiàn)任何臨床致病表現(xiàn)。

脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）也稱作細(xì)菌內(nèi)毒素，是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞外壁中非常重要的結(jié)構(gòu)和功能分子,也是一種非常重要的毒力因子。2007年，Townsend等[82]發(fā)現(xiàn)嬰兒配方奶粉中含有細(xì)菌脂多糖—內(nèi)毒素（LPS），他將純化的脂多糖與阪崎克羅諾桿菌一起注射入乳鼠腹腔，能明顯提高阪崎克羅諾桿菌穿透血腦屏障的能力，該研究雖未確切表明阪崎克羅諾桿菌產(chǎn)生內(nèi)毒素，但可以推測阪崎克羅諾桿菌的致病性與細(xì)菌內(nèi)毒素有明顯的關(guān)聯(lián)。

生物膜（Biofilm）是微生物細(xì)胞與外界環(huán)境相互作用的接口。Mange等[83]通過體外組織細(xì)胞培養(yǎng)實驗觀察到阪崎克羅諾桿菌對人類上皮細(xì)胞和腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞有吸附粘連特性，并形成叢生，表面形成生物保護(hù)膜。Kim等[84]研究表明只要有一定營養(yǎng)液和適宜溫度，阪崎克羅諾桿菌就可以在不銹鋼管、玻璃管及PVC塑料管腔內(nèi)壁內(nèi)吸附生存，并形成生物保護(hù)膜,抵御消毒劑等的殺傷作用，與Mange等[83]研究結(jié)果一致。

7 結(jié)束語

阪崎克羅諾桿菌主要通過嬰兒配方奶粉傳播，能引起嚴(yán)重的新生兒疾患。近年來多起與之相關(guān)的食品安全事件已引起了FAO/WHO及各國的高度重視。目前，國內(nèi)外報道最多的是食品安全問題，但對阪崎克羅諾桿菌的流行狀況、檢測方法、分型方法、耐藥及毒理研究尚缺少系統(tǒng)的總結(jié)歸納。本文對目前阪崎克羅諾桿菌以上相關(guān)領(lǐng)域的研究進(jìn)行了綜述，以期為深入研究阪崎克羅諾桿菌提供參考。

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