古訓(xùn)瑚，劉志強(qiáng)，鐘芳君，王　偉，徐麗君(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，江西南昌　330006)

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7，8-二羥基黃酮改善慢性應(yīng)激小鼠認(rèn)知功能

古訓(xùn)瑚，劉志強(qiáng)，鐘芳君，王偉，徐麗君
(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，江西南昌330006)

7，8-dihydroxyflavone improves cognitive impairment caused by chronic stress in mice

GU Xun-hu，LIU Zhi-qiang，ZHONG Fang-jun，WANG Wei，XU Li-jun
(Dept of Neurology，the Second Affiliated Hospital to Nanchang University，Nanchang 330006，China)

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間: 2015 － 6 － 5 11: 22 網(wǎng)絡(luò)出版地址: http: / /www.cnki.net /kcms /detail /34.1086.R.20150605.1122.030.html

徐麗君(1962－)，女，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向:神經(jīng)系統(tǒng)疾病新藥，通訊作者，Tel: E-mail: xulijun20050901@ sina.com

慢性應(yīng)激影響認(rèn)知功能，包括海馬依賴的空間和陳述性記憶等認(rèn)知過程［1］。7，8-二羥基黃酮(7，8-dihydroxyflavone，7，8-DHF)可透血腦屏障，與腦源性神經(jīng)生長因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)受體酪氨酸激酶B(tyrosine kinase receptor B，TrKB)高親和力藥物［2］。應(yīng)激敏感的海馬，且高表達(dá)BDNF及TrKB［3］。目前，關(guān)于7，8-DHF對(duì)慢性應(yīng)激所致海馬依賴的認(rèn)知損傷的影響，尚未有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)利用慢性社會(huì)挫敗應(yīng)激(chronic social defeat stress，CSDS)模型，觀察7，8-DHF改善小鼠海馬依賴學(xué)習(xí)記憶及相關(guān)蛋白質(zhì)阻斷后海馬學(xué)習(xí)記憶變化。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物及分組♂C57BL/6J小鼠，8-10周齡，♂CD1小鼠(僅作攻擊用)，8～9月齡，均購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。第1步實(shí)驗(yàn)分組: control組、control + 7，8-DHF組、CSDS組、CSDS +7，8-DHF組;第2步實(shí)驗(yàn)分組: CSDS組、CSDS + U0126組、CSDS + 7，8-DHF組、CSDS + U0126 +7，8-DHF組。

1.2藥品及試劑7，8-DHF(美國TCI公司)，腹腔注射5 mg·kg－1，每天1次，共10 d［3］。U0126(美國Selleck公司)，7，8-DHF給藥前30 min雙側(cè)背側(cè)海馬微量注射，每天1次，共10 d［4］。p44/42MAPK(Erk1/2)抗體、Phospho-p44/42MAPK(Erk1/2)抗體、TrKB抗體、Phospho-TrKB抗體、Synapsin I抗體，均購于Abcam公司。

1.3慢性社會(huì)挫敗應(yīng)激模型參照以往方法［5］。取C57BL/6J小鼠1只，放入陌生♂CD1小鼠飼養(yǎng)籠，使C57BL/6J小鼠遭受♂CD1小鼠攻擊約10 min;然后用鐵絲網(wǎng)隔開，持續(xù)4 h，如此連續(xù)應(yīng)激14 d，保證每天C57BL/6J小鼠受不同CD1鼠的攻擊。

1.4 T形迷宮實(shí)驗(yàn)與新物體認(rèn)知實(shí)驗(yàn)觀察小鼠海馬依賴的工作記憶和新物體識(shí)別記憶。

1.5 Western blot檢測突觸小體相關(guān)蛋白表達(dá)變化。

1.6腦立體定位及套管安置前囟為基點(diǎn)，定位于雙側(cè)海馬坐標(biāo)(－1. 7 mm，±1. 5 mm，－2. 3 mm)。

2　結(jié)果

2.1 7，8-DHF逆轉(zhuǎn)應(yīng)激導(dǎo)致的海馬依賴空間記憶和物體認(rèn)知功能實(shí)驗(yàn)各組曠場實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)總路程差異無顯著性(P＞0. 05)。小鼠T形迷宮交替率:與control組相比，CSDS組空間記憶明顯減退，7，8-DHF逆轉(zhuǎn)其減退(P＜0. 05)。新物體認(rèn)知實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與control組相比，CSDS組新物體識(shí)別功能減退，且7，8-DHF逆轉(zhuǎn)海馬依賴的新物體認(rèn)知減退(P＜0. 05)。

2.2 7，8-DHF提高應(yīng)激鼠海馬TrKB、ERK磷酸化水平和突觸膜蛋白表達(dá)海馬蛋白印跡條帶相對(duì)灰密度值:與control組相比，CSDS組ERK、TrKB磷酸化水平降低(P＜0. 05)，7，8-DHF逆轉(zhuǎn)應(yīng)激所致的TrKB、ERK磷酸化水平下降(P＜0. 05)。與control組相比，CSDS組突觸膜蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0. 01)，7，8-DHF逆轉(zhuǎn)其變化(P＜0. 05)。

2.3 U0126阻斷7，8-DHF改善認(rèn)知T形迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果: CSDS +7，8-DHF + U0126組與CSDS組差異無顯著性(P＞0. 05)。新物體認(rèn)知實(shí)驗(yàn)結(jié)果: CSDS + 7，8-DHF + U0126組與CSDS組差異無顯著性(P＞0. 05)。

3　討論

挫敗應(yīng)激鼠的海馬依賴工作記憶及新物體認(rèn)知明顯減退，7，8-DHF可明顯改善海馬依賴的學(xué)習(xí)記憶，而7，8-DHF對(duì)正常鼠無改善作用，推測7，8-DHF可特異性改善慢性應(yīng)激所致學(xué)習(xí)記憶減退。挫敗應(yīng)激鼠ERK、TrKB磷酸化水平降低，7，8-DHF逆轉(zhuǎn)挫敗應(yīng)激所致的TrKB、ERK磷酸化水平下降，提示7，8-DHF提高TrKB、ERK磷酸化水平發(fā)揮其改善認(rèn)知功能。挫敗應(yīng)激減少海馬突觸膜蛋白表達(dá)，而7，8-DHF增加海馬突觸膜蛋白表達(dá)。ERK阻斷劑U0126完全阻斷7，8-DHF改善挫敗鼠海馬依賴的空間和新物體認(rèn)知，且挫敗鼠單獨(dú)給予U0126對(duì)認(rèn)知無明顯影響，推測7，8-DHF改善認(rèn)知需通過ERK信號(hào)通路，ERK信號(hào)通路與腦保護(hù)相關(guān)［6］。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)7，8-DHF改善慢性挫敗應(yīng)激導(dǎo)致海馬空間記憶和物體認(rèn)知損傷，7，8-DHF激動(dòng)TrKB，激活ERK通路，且7，8-DHF可逆轉(zhuǎn)慢性應(yīng)激導(dǎo)致的海馬突觸膜蛋白缺失。

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［6］Tu X K，Shi S S，Yang W Z，et al.5-lipoxygenase inhibitor zileuton attenuates neuroinflammation and brain damage via modulating ERK1/2 signaling pathway in rats of cerebral ischemia［J］.Chin Pharmacol Bull，2014，30(10):1441－4.

中國圖書分類號(hào): R-332; R322.81; R338.64; R345.57; R916. 4; R977. 6

關(guān)鍵詞:慢性應(yīng)激;認(rèn)知功能; 7，8-二羥基黃酮;受體酪氨酸激酶B; T形迷宮;新物體識(shí)別;海馬

Key words:chronic stress; cognition; 7，8-dihydroxyflavone; tyrosine kinase receptor B; T-shaped maze; new object recognition;hippocampus

作者簡介:古訓(xùn)瑚(1989－)，男，碩士生，研究方向:神經(jīng)藥理，E-mail:540523118@ qq.com;

基金項(xiàng)目:江西省青年科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 20122BAB215035)

收稿日期:2015－03－27，修回日期:2015－04－25

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1001－1978(2015)07－1034－02

doi:10.3969/j.issn.1001－1978.2015.07.030