張念英

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué),四川成都 611130）

金黃色葡萄球菌的分離及其抗藥性的研究

張念英

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué),四川成都 611130）

通過對(duì)金黃色葡萄球菌的分離和抗藥性的研究，進(jìn)一步明確土壤中金黃色葡萄球菌的分離方法，并對(duì)其耐藥性進(jìn)行研究。文中針對(duì)不同土壤共分10種方式進(jìn)行采樣，通過鑒定、分離和培養(yǎng)，找到了典型的金黃色葡萄球菌，并觀察分離的金黃色葡萄球菌的抗藥性。結(jié)果顯示，金黃色葡萄球菌直徑0.5～1.5μm，篩選出屬革蘭陽(yáng)性球菌的微球菌科和消化球菌科細(xì)菌共25個(gè)。其中，有12個(gè)細(xì)菌（排除消化球菌科細(xì)菌）可生長(zhǎng)，最終確定8個(gè)葡萄球菌屬。有5個(gè)無(wú)法生長(zhǎng)，金黃色葡萄球菌對(duì)新生霉素敏感。當(dāng)金黃色葡萄球菌經(jīng)過亞硝酸鈉誘變后，對(duì)5種實(shí)驗(yàn)抗生素的抗性均有所增加，但對(duì)四環(huán)素的抗性較小。所以，可以看出，經(jīng)亞硝酸鈉誘變對(duì)金黃色葡萄球菌的抗藥性十分有利。

金黃色葡萄球菌 分離 抗藥性

金黃色葡萄球菌是一種革蘭氏陽(yáng)性球菌，屬于微球菌科，能夠引起化膿性的炎癥。如果侵入血液，可能引起致病性敗血癥。部分由葡萄球菌產(chǎn)生的耐熱性腸毒素，會(huì)引起食物中毒反應(yīng)，金黃色葡萄球菌對(duì)抗生素較為敏感，因此，大部分抗生素對(duì)其相關(guān)病癥的治療效果較為明顯[1]。本文通過對(duì)金黃色葡萄球菌的分離以及其抗藥性的研究，以期為治療病原菌抗生素提供理論指導(dǎo)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

菌種：由金黃色葡萄球菌作為菌株，將其從花園與某大學(xué)宿舍樓的土壤中進(jìn)行分離。培養(yǎng)基和試劑：培養(yǎng)基包括糖發(fā)酵培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基以及醇類發(fā)酵培養(yǎng)基。試劑包括：生理鹽水，NaNO2溶液，和在市面上常見的青紅霉素、四環(huán)素和氯霉素、鏈霉素等。

1.2 方法

1.2.1 金黃色葡萄球菌的分離方法

（1）選擇10處采樣地點(diǎn)，采樣均在表層下8 cm左右采樣，后于容器，集體烘干后混勻；（2）針對(duì)樣品進(jìn)行統(tǒng)一處理，選取土樣1 g置入無(wú)菌錐形瓶中，加入100 ml蒸餾水，與土樣搖勻，搖晃時(shí)間在10 min左右。稀釋10-2土壤懸液，制備成為10-3、10-4、10-5、10-6、10-7；（3）分離菌種。本次分離的菌種為金黃色葡萄球菌，進(jìn)行革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)、酸鹽性試驗(yàn)、微量生化管試驗(yàn)，分別采用以上幾種實(shí)驗(yàn)方式對(duì)新生霉素進(jìn)行敏感試驗(yàn)。

1.2.2 菌種耐藥性鑒定

（1）分離：將菌種進(jìn)行培養(yǎng)和分離，采用梯度平皿，對(duì)菌種進(jìn)行抗性水平考核，將以上分離出的抗性菌株制成菌懸液，再接種到含抗生素的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，存放于37℃恒溫環(huán)境中觀察3 d。（2）制備菌懸液和穩(wěn)定性培養(yǎng)：測(cè)定金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)曲線，觀察金黃色葡萄球菌的亞硝酸鈉的菌懸液的制備和穩(wěn)定培養(yǎng)。

2 結(jié)果

2.1 菌種分離觀察

觀察菌種分離情況。金黃色葡萄球菌菌落不大，平均在直徑0.8μm左右，濕潤(rùn)，呈透明狀，表面光滑，隆起邊緣。在接種的平板上鑒定出40個(gè)金黃色葡萄球菌菌落。

觀察菌種個(gè)體形態(tài)。金黃色葡萄球菌直徑0.5～1.5μm，單個(gè)排列或成對(duì)排列，可明顯看出呈葡萄串狀。菌種不運(yùn)動(dòng)，革蘭陽(yáng)性。以上鑒定出的40個(gè)金黃色葡萄球菌菌落篩選出屬革蘭陽(yáng)性球菌的微球菌科和消化球菌科細(xì)菌共25個(gè)。

2.2 金黃色葡萄球菌耐藥性觀察

40株金黃色葡萄球菌以青霉素、紅霉素、四環(huán)素、鏈霉素和氯霉素五種常見抗生素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果現(xiàn)實(shí)，對(duì)以上五種抗生素耐藥率均大于65%，對(duì)其他兩種抗生素包括萬(wàn)古霉素、利奈唑胺的敏感率可達(dá)到98%。針對(duì)7種抗生素的耐藥性和敏感性分析，具體結(jié)果如下：

對(duì)青霉素耐藥性為98.1%，敏感率為1.9%；紅霉素耐藥性為91.2%，敏感率為8.8%；四環(huán)素耐藥性為77.1%，敏感率為22.9%；鏈霉素耐藥性為75.6%，敏感率為24.4%；氯霉素耐藥性為72.1%，敏感率為27.9%。對(duì)萬(wàn)古霉素和利奈唑胺的敏感率分別為98.1%和99.3%，耐藥性分別為1.9%和0.7%。

2.3 亞硝酸鹽誘變后的耐藥性觀察

在5種抗生素梯度平板上，菌落的生長(zhǎng)如下：抗生素濃度為40（μg ml-1）時(shí)，5種抗生素均可生長(zhǎng)，抗生素濃度為60（μg ml-1）時(shí)，青霉素和紅霉素可生長(zhǎng)，抗生素濃度≥80（μg ml-1）時(shí)，只有青霉素可生長(zhǎng)。由此可以看出，當(dāng)金黃色葡萄球菌經(jīng)過亞硝酸鈉誘變后，對(duì)5種實(shí)驗(yàn)抗生素的抗性均有所增加，但對(duì)四環(huán)素的抗性較小。

3 討論

土壤中包含多種微生物，從土壤中分理處來經(jīng)過培養(yǎng)可稱為金黃色葡萄球菌。在試驗(yàn)過程中，通過土壤分離金黃色葡萄球菌的試驗(yàn)方法已經(jīng)基本完備，本次選擇的分離方法是臨床中比較成熟的方法，在土表層下8 cm左右采樣，加入100 ml蒸餾水，搖晃時(shí)間在10 min左右，進(jìn)行革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)、酸鹽性試驗(yàn)、微量生化管試驗(yàn)進(jìn)行分離以及為抗藥性試驗(yàn)做出準(zhǔn)備。金黃色葡萄球菌對(duì)某些抗生素有一定的抗藥性，但通過亞硝酸鈉的誘變，金黃色葡萄球菌的抗藥性有所降低[3]。通過本次研究證明，利用無(wú)機(jī)鹽對(duì)金黃色葡萄球菌進(jìn)行誘變，能夠影響金黃色葡萄球菌的抗藥性。通過研究中對(duì)5種常見抗生素的對(duì)比發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過誘變后的金黃色葡萄都對(duì)大部分抗生素的抗性均得到了提高。

[1] 高延玲，董鵬，李金磊，等.奶牛場(chǎng)金黃色葡萄球菌的分離及耐藥性研究[J].畜牧與飼料科學(xué)，2014，6（9）：1-4.

[2] 涂建斌，饒麗華.金黃色葡萄球菌醫(yī)院感染的臨床特征及耐藥性分析[J].實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)，2014，5（12）：32-33.

[3] 安然，楊杰，孫家明.整形外科患者創(chuàng)面感染MRSA的感染率及對(duì)應(yīng)治療觀察[J].中國(guó)美容醫(yī)學(xué)，2014，8（23）：1965-1968.