■陳 路 楊嚴(yán)鷗 宛曉春 周裔彬 桑八一 張建立

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，安徽合肥 230036；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院農(nóng)業(yè)部茶葉生物技術(shù)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230036)

魚類抗氧化酶系統(tǒng)在維持機(jī)體的正常代謝和功能上起著十分重要的作用[1]。超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）以及γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-GT）是反映抗氧化能力的重要指標(biāo)。SOD能夠通過歧化反應(yīng)將超氧化物轉(zhuǎn)化為過氧化氫與氧氣[2]，而CAT又能高效地將過氧化氫轉(zhuǎn)化為水和氧氣[3]，因此，SOD與CAT對清除氧化脅迫過程中產(chǎn)生的活性氧自由基起著決定性作用[4]。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-GT）是氧自由基的發(fā)生器，其活性升高是各種疾病發(fā)生的標(biāo)志[5]。

研究顯示，茶多酚可以提高魚類超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）活性[6-9]，而茶多酚是茶葉中的重要成分，我國是茶葉生產(chǎn)大國，茶葉種類多，產(chǎn)量高，可以考慮將茶葉作為添加劑使用到飼料中，但目前，有關(guān)茶葉對魚類的抗氧化能力影響的研究十分缺乏。因此，本試驗(yàn)選擇4種綠茶[屏山炒青（四川）、霍山黃芽（安徽）、黃山毛峰（安徽）、龍井（浙江）]、1種紅茶[祁門紅茶（安徽）]與1種黑茶[普洱茶（云南）]進(jìn)行試驗(yàn)。出于實(shí)際應(yīng)用中的成本考慮，添加物為茶葉加工中篩下來的副產(chǎn)品茶末，分別按1%和2%用量添加到斑點(diǎn)叉尾鮰基礎(chǔ)飼料中，旨在比較不同茶葉及不同添加量對該種魚類抗氧化能力的影響，為茶葉加工副產(chǎn)品在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)養(yǎng)殖系統(tǒng)為室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng)，主要包括水處理系統(tǒng)與39個單個體積為60 cm×60 cm×65 cm(有效水體180 L)的塑料水族箱。試驗(yàn)魚取自安徽合肥市的巢湖三珍養(yǎng)殖場，運(yùn)回后2%食鹽水消毒，在上述水族箱中暫養(yǎng)2周。暫養(yǎng)期間投喂基礎(chǔ)飼料。屏山炒青、霍山黃芽、黃山毛峰、龍井、祁門紅茶和普洱茶6種茶葉的茶末粉碎后，過60目篩，分別按1%、2%用量添加到基礎(chǔ)飼料中，再加上添加量為0%的對照組，試驗(yàn)飼料共13種，每組3個重復(fù)。飼料以顆粒機(jī)制成粒徑2 mm顆粒，65℃烘干后過篩，-20℃保存?zhèn)溆??；A(chǔ)飼料配方及營養(yǎng)水平見表1。

1.2 試驗(yàn)過程與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)開始前，將魚饑餓24 h，然后隨機(jī)取樣稱重，每箱放入試驗(yàn)魚30尾，個體初始平均體重為1.80～1.90 g/尾。每天9:00和15:00各投適量飼料一次，1 h后回收殘餌，以預(yù)防水質(zhì)變壞。試驗(yàn)水源為曝氣自來水，使用沸石、活性炭凈化水體，真空泵提水。單只箱體循環(huán)水量為2.5 L/min，箱內(nèi)放置散氣石，以通風(fēng)管連接羅茨鼓風(fēng)機(jī)間斷性充氧。自然水溫，變化范圍25.2～28.5℃，節(jié)能日光燈提供照明，光照時(shí)間8:30～20:00，瞬時(shí)開斷。試驗(yàn)持續(xù)8周。

1.3 取樣與方法

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將魚饑餓24 h，每箱中隨機(jī)取樣7尾，取內(nèi)臟團(tuán)，冰浴條件下分離肝胰臟，-70℃冰箱保存。將養(yǎng)殖箱中的水體高度從60 cm降到10 cm，充氧，擁擠脅迫3 d后，前2 d每天投喂兩次（時(shí)間如前），第3 d饑餓，再每箱隨機(jī)取樣7尾，按前述方法分離并保存肝胰臟。

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

CAT、SOD、γ-GT活性參考南京建成生物研究所生產(chǎn)的試劑盒的測定方法進(jìn)行測定，方法參見試劑盒。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA）后進(jìn)行組間差異的多重比較（Duncan's procedure）。以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 對SOD活性的影響（見表2）

表2顯示，養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與對照組相比，龍井1%、2%組的SOD活性均顯著提高，屏山炒青和普洱的1%組顯著提高。其余各組顯著降低或與對照組相比無顯著差異。對同種茶葉，屏山炒青和普洱的1%組顯著高于2%組，而黃山毛峰的1%組顯著低于2%組，其余3種茶葉兩組之間無顯著差異。

表2 茶葉種類、添加劑量以及脅迫對斑點(diǎn)叉尾鮰魚體肝臟SOD活性的影響(U/mg prot.)

脅迫后，與對照組相比，霍山黃芽和黃山毛峰的1%、2%組的SOD活性均顯著高于對照組，屏山炒青和祁門紅茶僅1%組的SOD活性顯著提高，龍井和普洱兩種劑量與對照組相比均無顯著差異。對于同種茶葉，屏山炒青和祁門紅茶的1%組顯著高于2%組，其余4種茶葉兩組間無顯著差異。

結(jié)果顯示，不同茶葉在提高SOD活性效果上有不同特點(diǎn)。脅迫前，龍井茶（兩組）和普洱茶（1%組）有顯著提高SOD活性的效果，脅迫后這種作用消失，而黃山毛峰與霍山黃芽（兩組）以及祁門紅茶（1%組）在脅迫前未顯示出提高SOD活性的效果，脅迫后表現(xiàn)出這種效果。屏山炒青（1%組）則在脅迫前后均有此效果。

2.2 對CAT活性的影響（見表3）

表3 茶葉種類、添加劑量以及脅迫對斑點(diǎn)叉尾鮰魚體肝臟CAT活性的影響(U/mg prot.)

表3顯示，養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與對照組相比，屏山炒青、龍井的1%組及霍山黃芽的2%組均導(dǎo)致CAT活性顯著提高，其余各組顯著低于或與對照組相比無顯著差異。對同種茶葉，屏山炒青、龍井、普洱以及祁門紅茶的1%組顯著高于2%組，其余2種茶葉1%組顯著低于2%組或無顯著差異。

脅迫后，霍山黃芽2%組顯著高于對照組，其余各組顯著低于或與對照組相比無顯著差異。對于同種茶葉，普洱、祁門紅茶的1%組顯著低于2%組，而黃山毛峰的1%組顯著高于2%組，其余3種茶葉的1%、2%組之間無顯著差異。

由此可見，霍山黃芽2%組在脅迫前后均能顯著提高CAT活性，屏山炒青與龍井茶只在1%組脅迫前有效果，其余各組對提高CAT活性無顯著作用甚至顯著降低了CAT活性。

2.3 對γ-GT活性的影響（見表4）

表4顯示，養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，黃山毛峰2%組和祁門紅茶1%組的γ-GT活性與對照組相比無顯著差異，其余各組均顯著低于對照組。對同種茶葉，屏山炒青和祁門紅茶的1%組顯著高于2%組，而黃山毛峰的1%組顯著低于2%組，其余3種茶葉的1%、2%組之間無顯著差異。

表4 茶葉種類、添加劑量以及脅迫對斑點(diǎn)叉尾鮰魚體肝臟γ-GT活性的影響(U/g prot.)

脅迫后，黃山毛峰、普洱以及祁門紅茶的γ-GT活性均顯著高于對照組。對同種茶葉，屏山炒青和祁門紅茶的1%組顯著高于2%組，而龍井1%組顯著低于2%組，其余3種茶葉的1%、2%組之間無顯著差異。

由此可知，龍井茶與霍山黃芽在脅迫前與脅迫后均顯著低于對照組或與對照組相比無顯著差異，其余各種茶葉在脅迫前基本能顯著降低γ-GT活性，脅迫后γ-GT活性則顯著升高(屏山炒青2%組除外)。

3 討論

3.1 對SOD活性的影響

超氧化物歧化酶（SOD）可催化超氧陰離子自由基的歧化反應(yīng)，從而阻斷自由基的連鎖反應(yīng)，是機(jī)體清除自由基能力的標(biāo)志[10]。本試驗(yàn)中，養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)有部分試驗(yàn)組的SOD活性顯著提高，例如龍井（1%、2%組）、屏山炒青與普洱（均為1%組），這與徐奇友等[6]的試驗(yàn)結(jié)果類似，該試驗(yàn)在虹鱒飼料中添加茶多酚，導(dǎo)致肝臟中SOD活性顯著提高。值得注意的是，脅迫前有部分試驗(yàn)組SOD活性顯著低于對照組或與對照組相比無顯著變化，但脅迫后，這些組的SOD活性顯著高于對照組，例如黃山毛峰（1%、2%組）、霍山黃芽（1%、2%組）與祁門紅茶（1%組）等，即這些種類茶葉的效果在脅迫后才凸顯出來。這兩種現(xiàn)象在紅茶、綠茶中均有出現(xiàn)。因此，結(jié)果不同，應(yīng)該與具體的茶葉種類不同有關(guān)，這還有待進(jìn)一步研究。

3.2 對CAT活性的影響

本試驗(yàn)顯示，無論脅迫前或脅迫后，除個別試驗(yàn)組CAT活性顯著提高外，多數(shù)試驗(yàn)組肝臟CAT活性改善不顯著甚至有所降低，而劉振興等[7]報(bào)道，羅非魚飼料中添加333 mg/kg茶多酚可提高其肝臟的CAT活性。本試驗(yàn)結(jié)果與之不同，可能與魚種不同有關(guān)，也可能與茶多酚劑量不同有關(guān)。按茶多酚約占紅茶干重的10%以及綠茶干重的15%～25%[11]來計(jì)算，本試驗(yàn)飼料中茶多酚添加量約為1 000～5 000 mg/kg，明顯高于羅非魚試驗(yàn)的添加量。這一問題還需要進(jìn)一步的研究。

3.3 對γ-GT活性的影響

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-GT）是氧自由基的發(fā)生器，其活性升高是肝功能受損的標(biāo)志[5]。本試驗(yàn)顯示，茶葉添加會導(dǎo)致肝臟中γ-GT活性顯著降低，表明茶葉具有抑制肝功能受損的功能[12]。但脅迫后多數(shù)試驗(yàn)組的γ-GT活性升高，且顯著高于對照組，原因還有待進(jìn)一步研究。不過龍井茶與霍山黃芽在脅迫后與對照組相比仍無顯著差異或顯著低于對照組，這可能與兩種茶葉中含有某些特殊成分有關(guān)，導(dǎo)致與其它茶葉有明顯不同的結(jié)果，這還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

6種茶葉中，龍井茶與霍山黃芽的作用更為相似，提高抗氧化能力的作用最為明顯；在兩種添加劑量中，1%添加量提高抗氧化能力的作用更為顯著。