謝家駿， 周廣興， 喬正東， 成 苗， 張國明， 王建新

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全評價研究中心，上海201203；2.復(fù)旦大學(xué)實驗動物科學(xué)部，上海200032；3.上海市浦東醫(yī)院，上海 201399；4.上海市中藥研究所，上海 201401；5.復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院，上海201203）

［藥 理］

珍菊降壓片中西藥配伍減毒機制

謝家駿1， 周廣興2， 喬正東3， 成 苗4， 張國明4， 王建新5

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全評價研究中心，上海201203；2.復(fù)旦大學(xué)實驗動物科學(xué)部，上海200032；3.上海市浦東醫(yī)院，上海 201399；4.上海市中藥研究所，上海 201401；5.復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院，上海201203）

目的探索珍菊降壓片中西藥配伍減毒機制，評價其長期給藥的安全性。方法將Wistar大鼠隨機分為珍菊降壓片3 200、800、200mg/kg劑量組、相應(yīng)劑量的化藥組分對照組以及空白對照組，每組30只，雌雄各半，連續(xù)給藥26周，停藥恢復(fù)期8周。結(jié)果化藥組分對照組動物體重增長緩慢，血液紅細(xì)胞數(shù) （RBC）、血紅蛋白 （HGB）、紅細(xì)胞壓積 （HCT）、紅細(xì)胞血紅蛋白 （MCH）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度 （MCHC）先升高后降低，血清堿性磷酸酶 （ALP）、游離氨基酸 （NEFA）上升，總蛋白 （TP）、白蛋白 （ALB）、K+、Na+、C1-下降，尿液G1u以及肝、腎、腎上腺、睪丸系數(shù)升高，部分動物肝細(xì)胞呈輕度脂肪變性，腎小管上皮細(xì)胞輕度顆粒樣變性，停藥后亦未見完全恢復(fù)。服用中西藥配伍的珍菊降壓片，200 mg/kg劑量組對化藥組分所導(dǎo)致的異常能呈現(xiàn)完全的對抗，而3 200、800 mg/kg劑量組則呈現(xiàn)部分對抗。結(jié)論珍菊降壓片中西藥配伍用藥具有完全或部分對抗源于化藥組分所致的毒性作用，其程度與化藥組分的劑量密切相關(guān)。珍菊降壓片給大鼠連續(xù)26周灌胃的安全劑量為200 mg/kg，相當(dāng)人臨床劑量的18倍。

珍菊降壓片；鹽酸可樂定；氫氯噻嗪；中西藥配伍；長期毒性試驗；減毒機制；安全劑量

珍菊降壓片是中西藥物復(fù)方制劑，臨床上主要用于輕、中度原發(fā)性高血壓的治療［1-3］。2013年3月，國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)出了關(guān)于修訂珍菊降壓片說明書的公告 （2013年第20號通告）［4］，就該制劑含有的鹽酸可樂定和氫氯噻嗪2種化藥成分，強調(diào)臨床合并用藥時應(yīng)注意并用藥品與其可能的藥物相互作用。鑒于該制劑自研制投放市場應(yīng)用于臨床至今已有40余年，雖對其降壓的主要藥效學(xué)作用進行了一些研究［5-8］，但對復(fù)方的安全性評價及各組分配伍的毒理學(xué)機制卻少有報道。為此，本實驗采用拆方的方法，就該制劑中藥組分與鹽酸可樂定和氫氯噻嗪2種化藥成分配伍的減毒機制進行探索，并對其長期給藥的安全性進行系統(tǒng)評價，旨在為闡明珍菊降壓片中西藥配伍的毒理學(xué)機制、更針對性地修訂使用說明書相關(guān)內(nèi)容提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 受試物 珍菊降壓片 （復(fù)方）為土褐色粉末，由野菊花膏粉、珍珠層粉、蘆丁、氫氯噻嗪、鹽酸可樂定按100∶100∶20∶5∶0.03比例混勻，由上海雷允上藥業(yè)有限公司提供，批號0508ZX。實驗時用0.5%CMC蒸餾水液分別配制成2%、8%、32%的藥液，隨配隨用。

珍菊降壓片 （化藥組分）為白色粉末，由氫氯噻嗪、鹽酸可樂定按500∶3比例混勻，由上海雷允上藥業(yè)有限公司提供，批號0508X。實驗時用0.5%CMC蒸餾水液將其配制成 0.044%、0.178%、0.711%的藥液，隨配隨用。

1.2 實驗動物 Wistar大鼠，SPF級，體質(zhì)量80～110 g，雌雄各半，由上海斯萊克實驗動物責(zé)任有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK（滬）2003-0003。飼以鼠用全價固體高壓顆粒飼料，均由相應(yīng)的動物供應(yīng)商提供。

1.3 檢測儀器 SYSMEX F-800血液分析儀（日本東亞公司）；COBAS EMIRA PLUS生化分析儀（瑞士羅氏公司）；MA-4210尿液分析儀 （桂林市華通醫(yī)用儀器有限公司）。

2 實驗方法

2.1 分組及給藥 將大鼠按體質(zhì)量隨機分成7組，分別為復(fù)方高、中、低劑量組 （3 200、800、200 mg/kg），化藥組分組（71.1、17.8、4.4 mg/kg），另設(shè)對照組（0.5%CMC蒸餾水），每組30只，雌雄各半。每天灌胃1次，每周6次，連續(xù)26周，停藥后觀察8周，灌胃容積均為10 mL/kg。其中，高劑量組單日用藥劑量為最大給藥劑量，為說明書推薦的臨床劑量的284倍，按人與動物體表面積折算，相當(dāng)臨床劑量的45倍；中劑量組單日用藥劑量高于藥效有效劑量，為說明書推薦的臨床劑量的71倍，按人與動物體表面積折算，相當(dāng)臨床劑量的11倍；低劑量組單日用藥劑量高于藥效有效劑量，為說明書推薦的臨床劑量的18倍，按人與動物體表面積折算，相當(dāng)臨床劑量的3倍［6］。

2.2 操作步驟 給藥及恢復(fù)期間，每日觀察動物的外觀體征，行為活動，攝食情況，糞便性狀等，每周稱體質(zhì)量、食耗量。給藥13周、26周、停藥8周時，分別取1/3動物 （雌雄各半），禁食不禁水12 h后收集尿液作尿液常規(guī)檢查，眼眶動脈處采血作血液學(xué)和血清生化學(xué)檢查，戊巴比妥鈉麻醉后放血處死作系統(tǒng)尸解，取主要臟器作肉眼檢查，臟器稱重及換算成臟器系數(shù)，并作石蠟切片、H.E染色及組織學(xué)鏡檢。

2.3 檢測項目

2.3.1 血液學(xué)檢查 紅細(xì)胞數(shù)（RBC），血紅蛋白 （HGB）、紅細(xì)胞壓積 （HCT）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細(xì)胞平均體積（MCV）、網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率（Retic）、白細(xì)胞數(shù)（WBC）、中性粒細(xì)胞百分率 （Neut）、淋巴細(xì)胞百分率（Lymph）、單核細(xì)胞百分率 （Mono）、嗜酸細(xì)胞百分率 （Eos）、嗜堿細(xì)胞百分率 （Baso）、血小板數(shù)（PLT）、凝血時間（CT）。

2.3.2 血清生化檢查 天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶 （ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、乳酸脫氫酶 （LDH）、總蛋白 （TP）、白蛋白 （ALB）、總膽紅素 （TBIL）、尿素氮（BUN）、肌酐 （CRE）、肌酐激酶 （CK）、總膽固醇 （TCHO）、總甘油三酯 （TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白 （LDL）、游離氨基酸（NEFA）、血糖（GLU）、鉀離子（K+）、鈉離子（Na+）、氯離子 （C1-）。

2.3.3 尿液檢查 酸堿值 （pH）、尿比重 （SG）、亞硝酸鹽 （NIT）、尿糖 （GLU）、尿蛋白 （PRO）、隱血（BLD）、膽紅素（BIL）、酮體（KET）、尿膽原（URO）、白細(xì)胞（WBC）。

2.3.4 臟器系數(shù)測定 心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、前列腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢、腦濕重，并換算成臟器系數(shù) （臟體比）。臟器系數(shù)計算公式為臟器系數(shù)（臟體比）=［臟器濕重（g）÷體質(zhì)量 （g）］ ×100%。

2.3.5 組織學(xué)鏡檢 心、肝、腎、腦、主動脈血管、子宮、卵巢、睪丸、附睪、前列腺。

3 實驗結(jié)果

3.1 一般癥狀 在整個實驗過程中，受試物各劑量組及對照組動物活動正常，糞便成形，未見有死亡。

3.2 體質(zhì)量與食耗量變化 化藥組分低劑量組動物給藥后體質(zhì)量增長開始放緩，其中雌、雄動物分別自給藥12、6周開始差異顯著 （P＜0.05或P＜0.01），停藥8周后雄性動物體質(zhì)量仍未見明顯恢復(fù) （P＜0.05或P＜0.01）。而復(fù)方低劑量組動物在整個給藥及停藥恢復(fù)期間體質(zhì)量增長基本正常，與化藥組分組比，差異顯著 （P＜0.05）。復(fù)方中劑量組動物給藥后，體質(zhì)量增長放緩程度有所下降，雖部分時間點與相應(yīng)劑量化藥組分組比，差異顯著 （P＜0.05或P＜0.01），但與對照組比仍呈明顯下降 （P＜0.05或P＜0.01）；復(fù)方高劑量組動物給藥后體質(zhì)量增長放緩程度與相應(yīng)劑量化藥組分組，比未見任何改善，見圖1～3。

整個給藥和停藥恢復(fù)期間，各組動物食耗量未見明顯異常，同時間各劑量組與對照組比無顯著差異（P＞0.05）。

3.3 血液學(xué)檢測 給藥13、26周及停藥8周時，復(fù)方及其化藥組分各劑量組動物WBC、Neut、Lymph、Mono、Eos、Baso、PLT、CT等指標(biāo)均未見有明顯異常。

復(fù)方及其化藥組分低劑量組：在給藥13、26周及停藥8周時，大鼠RBC、HGB、HCT、MCV、 MCH、MCHC平均值與相應(yīng)對照組比均無顯著性差異 （P＞0.05）。

圖1 珍菊降壓片中西藥配伍 （低劑量）對大鼠體質(zhì)量經(jīng)時變化的影響Fig.1 Effect of Zhenju Jiangya Tablets（low dose）on the changes of body weight of rats w ith time

圖2 珍菊降壓片中西藥配伍 （中劑量）對大鼠體質(zhì)量經(jīng)時變化的影響Fig.2 Effect of Zhenju Jiangya Tablets（m idd le dose）on the changes of body weight of ratsw ith time

圖3 珍菊降壓片中西藥配伍 （高劑量）對大鼠體質(zhì)量經(jīng)時變化的影響Fig.3 E ffect of Zhen ju Jiangya Tablets（high dose）on the changes of body weight of rats w ith time

化藥組分中、高劑量組：在給藥13周時，RBC、HGB、HCT、MCH、MCHC明顯升高。其中，中劑量組HGB、高劑量組RBC、HGB、HCT、MCHC差異顯著（P＜0.05或P＜0.01）；在給藥26周時，RBC、HGB、HCT、MCH、MCHC明顯降低 （P＜0.05或P＜0.01），呈先亢進后抑制態(tài)勢，停藥8周時亦未見完全恢復(fù)。

復(fù)方中、高劑量組：在給藥13周時，中劑量組HGB、MCH、高劑量組RBC、HGB、HCT與相應(yīng)化藥組分組比，具有明顯的降低作用 （P＜0.05或P＜ 0.01）；給藥26周時，HGB與相應(yīng)化藥組分組比，具有明顯的升高作用 （P＜0.05或P＜0.01）；停藥8周時，與相應(yīng)化藥組分組比，同樣具有升高RBC、HGB、HCT、MCHC的作用（P＜0.05或P＜0.01）。

其余各用藥組大鼠各時點各項血液學(xué)指標(biāo)平均值與相應(yīng)對照組比，均無顯著性差異 （P＞0.05），見表1。

表1 珍菊降壓片對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響 （）Tab.1 Effect of Zhenju Jiangya Tablets on blood indicators of rats（）

表1 珍菊降壓片對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響 （）Tab.1 Effect of Zhenju Jiangya Tablets on blood indicators of rats（）

注：與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與相應(yīng)劑量的化藥組分組比較，+P＜0.05，++P＜0.01

低劑量 中劑量 高劑量 低劑量 中劑量 高劑量（給藥13周，n=10）觀察指標(biāo) 對照組 化藥組分組 復(fù)方組WBC/（×103/μL） 6.88±2.87 7.72±3.89 6.44±2.23 7.75±1.81 6.92±4.45 7.79±3.40 7.00±4.15 RBC/（×106/μL） 9.54±0.57 9.75±0.95 10.13±1.27 10.63±1.04**9.53±0.80 9.44±0.49 9.44±0.58++HGB/（g/dL） 170±9 168±11 188±18* 194±13** 168±13 165±8++ 167±8++HCT/% 53.9±3.1 55.0±5.2 57.7±6.4 59.3±5.8* 53.1±4.4 52.8±4.2 52.4±2.8++MCV/fL 56.6±2.8 56.4±1.2 57.1±2.8 55.8±1.8 55.7±2.3 55.8±2.1 55.6±1.7 MCH/pg 17.9±0.8 17.3±1.5 18.6±1.2 18.3±0.8 17.7±0.5 17.5±0.7+ 17.7±0.6 MCHC/（g/dL） 316±9 308±29 326±15 328±14* 317±10 313±19 319±11 PLT/（×103/μL） 918±97 835±248 897±174 921±251 755±198* 971±125 922±199 Retic/% 0.51±0.23 0.52±0.34 0.52±0.24 0.52±0.33 0.52±0.26 0.51±0.19 0.52±0.23 Neut/% 19.5±4.0 21.3±4.4 19.8±3.5 22.9±3.2 19.6±2.4 21.8±4.6 24.3±2.1**Lymph/% 76.1±4.2 73.6±4.7 76.5±3.6 71.7±2.3**75.4±2.8 73.7±4.9 72.1±2.0*Mono/% 2.6±1.5 3.4±2.1 2.0±1.5 3.8±1.9 3.0±1.6 3.0±1.9 2.1±1.3+Eos/% 2.0±1.2 1.7±0.8 1.7±0.7 1.6±0.7 2.0±0.9 1.5±1.0 1.5±0.7 Baso/% 0.2±0.2 0.2±0.1 0.1±0.2 0.2±0.1 0.3±0.2 0.1±0.2 0.2±0.3（給藥26周，n=10）WBC/（×103/μL） 5.88±1.26 4.72±1.02 5.58±1.32 5.11±1.46 5.60±0.77+ 6.72±1.72 4.88±1.38 RBC/（×106/μL） 9.67±0.91 9.25±0.63 9.12±0.42 8.94±0.44*9.44±0.57 9.51±0.60 9.43±0.99 HGB/（g/dL） 177±14 164±8 164±6* 160±8** 167±7 172±9+ 171±14+HCT/% 54.8±4.2 52.0±3.5 51.4±3.2 50.4±2.4**53.2±2.8 53.9±3.3 53.2±5.1 MCV/fL 56.8±1.7 56.3±1.9 56.4±1.0 56.4±1.0 56.4±2.9 56.8±1.4 56.5±2.7 MCH/pg 18.3±0.4 17.8±0.6 17.9±0.3* 17.9±0.4 17.8±0.7* 18.1±0.4 18.2±0.6 MCHC/（g/dL） 323±10 317±16 318±10 318±7 315±7 318±13 323±16 PLT/（×103/μL） 939±128 944±108 951±133 804±150* 855±154 781±207+ 823±242 Retic/% 0.51±0.28 0.50±0.27 0.52±0.33 0.53±0.25 0.52±0.26 0.50±0.25 0.53±0.25 Neut/% 22.2±3.7 24.6±3.0 25±3.6 25.1±2.8* 21.8±4.9 24.2±4.8 23.4±2.6 Lymph/% 72.8±3.8 71.3±2.7 71.3±3.8 71.5±3.1 73.4±3.7 71.4±5.4 73.1±2.8 Mono/% 3.0±1.6 1.8±1.7 2.0±0.9 1.8±0.9 2.9±1.6 2.0±1.2 1.6±0.7*Eos/% 2.0±1.1 1.7±1.1 1.7±1.2 1.6±0.7 1.9±0.9 2.4±1.2 1.9±1.1 Baso/% 0.3±0.2 0.2±0.2 0.3±0.2 0.1±0.2 0.3±0.1 0.4±0.2 0.2±0.2（停藥8周，n=10）WBC/（×103/μL） 5.73±1.53 5.63±1.03 4.64±1.05 5.38±2.26 5.03±1.51 6.16±1.34+ 5.09±1.00 RBC/（×106/μL） 10.26±0.73 9.90±0.59 9.06±0.29** 9.21±0.39**9.90±0.75 10.00±0.58++10.34±1.00++HGB/（g/dL） 187±10 157±5** 159±5** 161±4** 178±11 178±7*++ 181±13++HCT/% 57.2±3.4 55.8±2.5 51.7±1.2** 51.8±2.3**55.5±3.5 56.0±1.8++ 57.7±4.3++MCV/fL 55.9±1.9 56.4±1.4 57.1±1.6 56.2±1.4* 56.2±1.4 56.1±1.8 55.9±1.9 MCH/pg 18.2±0.5 17.7±0.8 17.5±0.9 17.5±0.8** 17.9±0.6 17.8±0.5 17.6±0.5*MCHC/（g/dL） 326±7 314±11** 307±10** 312±12 319±6* 318±4**++ 314±8**PLT/（×103/μL） 922±111 955±139 948±97 970±85 940±83 883±110 892±124 Retic/% 0.52±0.29 0.49±0.26 0.54±0.30 0.53±0.20 0.53±0.19 0.51±0.26 0.54±0.23 Neut/% 19.7±1.9 20.7±2.3 19.5±2.1 20.5±2.1 20.5±1.7 19.9±1.4 20.1±1.1 Lymph/% 77.1±2.1 75.7±2.4 77.8±2.3 76.9±2.4 77.0±1.8 77.1±1.7 77.1±1.1 Mono/% 1.3±1.1 1.7±0.7 1.1±0.3 1.3±0.7 1.3±0.7 1.4±0.5 1.3±0.5 Eos/% 1.9±0.7 1.9±0.7 1.5±0.7 1.3±0.7 1.2±0.6*+ 1.6±1.0 1.5±0.5 Baso/%0.3±0.2 0.2±0.1 0.1±0.2 0.3±0.3 0.2±0.2 0.4±0.2 0.2±0.2

3.4 血清生化檢測 化藥組分低劑量組：在給藥13、26周時，大鼠GLU、TP、ALB、HDL有所下降。其中給藥13周時GLU、TP、ALB、HDL、給藥26周時ALB與對照組比，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），而同劑量復(fù)方組大鼠上述指標(biāo)均未見有明顯異常。

化藥組分中、高劑量組：在給藥13、26周時，大鼠TP、ALB、K+、Na+、C1-下降，ALP、NEFA上升。其中，給藥13周時中劑量組NEFA、K+，給藥26周時中劑量組K+、Na+、C1-、高劑量組ALB、K+、Na+與對照組比，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；停藥8周時，GLU、ALP、K+、Na+、C1-指標(biāo)恢復(fù)正常，但中劑量組CREA、HDL、NEFA、高劑量組TG、HDL、NEFA仍明顯下降 （P＜0.05或P＜0.01）。復(fù)方中、高劑量組指標(biāo)變化情況同中、高劑量化藥組分組。

其余各用藥組大鼠各時點各項血液生化學(xué)指標(biāo)平均值與相應(yīng)對照組比，均無顯著性差異 （P＞0.05），見表2。

表2 珍菊降壓片對大鼠血清生化學(xué)指標(biāo)的影響（）Tab.2 Effect of Zhen ju Jiangya Tablets on serum biochem ical indexes of rats（）

表2 珍菊降壓片對大鼠血清生化學(xué)指標(biāo)的影響（）Tab.2 Effect of Zhen ju Jiangya Tablets on serum biochem ical indexes of rats（）

低劑量 中劑量 高劑量 低劑量 中劑量 高劑量（給藥13周，n=10）觀察指標(biāo) 對照組 化藥組分組 復(fù)方組AST/（IU/L） 173±25 162±24 177±20 166±27 177±23 174±27 177±22 ALT/（IU/L） 52.9±8.1 42.9±7.3** 48.1±9.1 48.5±12.0 47.5±8.4 49.6±6.7 46.9±8.1 BUN/（mmo1/L） 6.33±0.85 6.42±0.61 6.55±0.71 6.55±1.30 6.54±0.88 6.25±0.96 6.47±1.17 GLU/（mmo1/L） 4.70±0.52 3.62±0.93**4.12±0.54 4.76±1.02 3.91±0.95 4.27±0.51 3.83±0.56**+ALP/（IU/L） 49.6±16.9 52.4±18.2 54.8±21.5 59.0±12.4 50.9±17.0 55.7±12.2 60.6±16.3 TBIL/（μmo1/L） 10.11±3.28 9.71±4.35 9.90±2.96 8.86±3.86 9.49±3.66 9.35±3.67 8.47±4.17 TP/（g/L） 60.4±5.3 54.3±3.4** 57.9±5.2 55.5±6.5 56.5±5.5 57.9±3.5 53.0±2.6**ALB/（g/L） 34.8±1.6 32.8±1.7* 34.7±2.0 33.5±2.5 33.3±2.0 34.9±2.1 32.3±1.3**CHOL/（mmo1/L） 1.70±0.19 1.60±0.18 1.67±0.18 1.85±0.29 1.57±0.23 1.75±0.16 1.70±0.15 CREA/（μmo1/L） 64.1±7.4 64.7±9.6 63.2±7.0 63.1±7.7 58.4±7.8 66.8±10.0 64.2±6.4 CK/（U/L） 1432±237 1438±263 1444±185 1282±564 1540±134 1463±233 1354±388 LDH/（IU/L） 791±119 714±129 839±118 728±133 806±84 832±114 782±102 TG/（mmo1/L） 1.07±0.52 0.88±0.40 0.98±0.47 0.95±0.25 0.88±0.43 1.07±0.54 1.04±0.44 HDL/（mmo1/L） 1.87±0.16 1.61±0.28* 1.88±0.13 2.04±0.18* 1.76±0.21 1.91±0.17 1.87±0.13+LDL/（mmo1/L） 0.29±0.05 0.28±0.06 0.27±0.04 0.31±0.06 0.30±0.12 0.29±0.07 0.30±0.06 NEFA/（mmo1/L） 1.80±0.62 2.13±1.01 2.56±0.77* 1.91±0.36 1.88±0.83 2.08±0.51 2.37±0.92 K+/（mmo1/L） 7.15±0.19 6.91±0.32 6.81±0.16** 6.92±0.33 7.11±0.48 7.27±0.47++ 6.99±0.29 Na+/（mmo1/L） 145±2 146±3 144±2 144±2 143±7 142±2** 142±2**+C1-/（mmo1/L） 103±2 104±2 103±2 102±1 102±5 101±2**++ 102±2*（給藥26周，n=10）AST/（IU/L） 160±19 165±25 166±26 157±15 167±14 173±22 172±26 ALT/（IU/L） 57.5±6.4 54.2±15.1 51.1±11.1 47.6±9.9 53.4±6.7 52.5±9.0 57.0±16.6 BUN/（mmo1/L） 6.44±0.56 5.97±0.89 6.03±0.83 6.15±0.40 6.73±0.64 6.56±1.03 6.80±1.48 GLU/（mmo1/L） 5.07±0.56 4.98±0.90 5.02±0.58 5.18±0.69 4.85±0.33 4.84±0.53 5.03±0.96 ALP/（IU/L） 46.0±16.2 46.4±14.9 50.2±19.9 56.6±15.7 48.4±18.3 54.7±18.8 59.4±18.2 TBIL/（μmo1/L） 13.08±2.52 13.44±1.99 14.11±2.08 12.35±1.71 12.74±1.37 13.52±3.76 12.78±2.34 TP/（g/L） 73.5±6.2 70.2±6.1 73.1±8.2 71.9±5.2 74.4±3.9 73.7±8.3 72.5±9.6 ALB/（g/L） 37.1±1.5 35.7±1.4* 36.4±1.8 35.0±2.7* 37.5±1.8 36.9±2.6 35.2±1.0**CHOL/（mmo1/L） 2.27±0.36 2.22±0.59 2.15±0.43 2.14±0.45 2.23±0.24 2.07±0.44 2.16±0.41 CREA/（μmo1/L） 54.3±7.3 48.6±5.2 53.2±9.2 55.6±7.1 55.6±3.5 49.7±6.4 49.0±8.9 CK/（U/L） 1875±228 1874±307 1929±134 1786±185 1867±115 1951±226 1890±346 LDH/（IU/L） 973±221 1035±206 955±210 983±196 997±203 944±250 1005±258 TG/（mmo1/L） 1.40±0.75 1.27±0.69 1.34±0.67 1.18±0.48 1.24±0.56 1.56±0.76 1.35±0.57 HDL/（mmo1/L） 2.95±0.32 2.82±0.41 2.87±0.50 2.64±0.52 2.93±0.20 2.71±0.12* 2.68±0.20 LDL/（mmo1/L） 0.52±0.15 0.49±0.26 0.48±0.15 0.48±0.21 0.43±0.10 0.44±0.13 0.55±0.26 NEFA/（mmo1/L） 1.37±0.26 1.18±0.40 1.59±0.72 1.32±0.66 1.35±0.43 1.63±0.59 1.67±0.56 K+/（mmo1/L） 7.02±0.58 6.75±0.25 6.47±0.34* 6.45±0.51* 7.01±0.73 6.93±0.39+ 6.61±0.41 Na+/（mmo1/L） 145±2 144±2 142±2** 141±3** 143±3 142±2** 142±2**+C1-/（mmo1/L） 104±2 104±2 101±1* 102±3 102±3 103±2+ 102±3（停藥8周，n=10）AST/（IU/L）167±14 152±28 168±26 158±18 167±24 166±22 162±10

續(xù)表2

3.5 尿液檢測 復(fù)方及其化藥組分低劑量組：在給藥13、26周及停藥8周時，大鼠 pH、NIT、GLU、SG、BLD、PRO、KET、BIL、URO、WBC平均值與相應(yīng)對照組比，均無顯著性差異 （P＞0.05）。

化藥組分中、高劑量組：給藥13、26周時，中、高劑量組大鼠GLU分別為 （1.93±2.61）、（3.04±2.41）和 （1.94±2.27）、（2.76±2.59）mmo1/L，與對照組比，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。

復(fù)方中、高劑量組：給藥13、26周時，中、高劑量組大鼠 GLU分別為 （1.94±2.27）、（3.32±2.16）mmo1/L和（3.05±2.03）、（3.86± 2.31）mmo1/L，與對照組比，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。GLU變化情況同中、高劑量化藥組分組，仍處高企狀態(tài)。

其余各用藥組大鼠各時點各項尿常規(guī)指標(biāo)平均值與相應(yīng)對照組比，均無顯著性差異 （P＞0.05）。見表3。

3.6 大鼠尸檢 給藥13、26周和恢復(fù)期8周時，各臟器大小、顏色均正常，未見有腫脹、出血、壞死等異常現(xiàn)象。

3.7 臟器系數(shù) 復(fù)方及其化藥組分低劑量組：大鼠在各個時點臟器系數(shù)平均值與相應(yīng)對照組比，均無顯著性差異 （P＞0.05）。

復(fù)方及其化藥組分中、高劑量組：大鼠肝、肺、腎、腎上腺、睪丸、卵巢、腦系數(shù)均呈一定的升高趨勢。其中，在給藥13周時，中劑量組腎、睪丸系數(shù)，高劑量組肝、肺、睪丸、附睪、腦系數(shù)，給藥26周時，中劑量組腎、睪丸、附睪系數(shù)，高劑量組肝、肺、睪丸、卵巢、腦系數(shù)與對照組比，具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05或P＜0.01）；停藥8周時，上述異常指標(biāo)均未發(fā)生明顯的改變。其余各用藥組大鼠各時點各項臟器系數(shù)平均值與相應(yīng)對照組比，均無顯著性差異 （P＞0.05），見表3。

3.8 病理學(xué)檢查 化藥組分各劑量組：在給藥13、26周時，發(fā)現(xiàn)有部分動物肝細(xì)胞呈輕度脂肪變性，部分腎小管上皮細(xì)胞呈輕度顆粒樣變性。其中，在給藥13周時，中、高劑量組大鼠肝細(xì)胞呈輕度脂肪變性者分別為3、5只，呈腎小管上皮細(xì)胞輕度顆粒樣變性者分別為4、5只；給藥26周時，中、高劑量組大鼠肝細(xì)胞呈輕度脂肪變性者分別為4、7只，呈輕度小膽管增生者分別為4、4只，低、中、高劑量組大鼠呈腎小管上皮細(xì)胞輕度顆粒樣變性者分別為2、4、5只。

復(fù)方低劑量組：在給藥13周、26周及停藥8周時，各臟器組織均形態(tài)結(jié)構(gòu)完好，未見明顯出血、增生、水腫、炎癥、壞死等病理改變。

表3 珍菊降壓片對大鼠臟器系數(shù)的影響 （）Tab.3 Effect of Zhenju Jiangya Tablets on organ coefficients of rats（）

表3 珍菊降壓片對大鼠臟器系數(shù)的影響 （）Tab.3 Effect of Zhenju Jiangya Tablets on organ coefficients of rats（）

注：與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與相應(yīng)劑量的化藥組分組比較，+P＜0.05，++P＜0.01

低劑量 中劑量 高劑量 低劑量 中劑量 高劑量（給藥13周，n=5～10）觀察指標(biāo) 對照組 化藥組分組復(fù)方組心臟/% 0.345±0.047 0.331±0.065 0.327±0.052 0.340±0.049 0.344±0.071 0.333±0.063 0.342±0.058肝臟/% 2.395±0.215 2.301±0.150 2.277±0.125 2.343±0.083 2.275±0.097 2.317±0.110 2.448±0.070+脾臟/% 0.168±0.014 0.170±0.030 0.175±0.016 0.167±0.011 0.174±0.017 0.170±0.014 0.167±0.010肺臟/% 0.381±0.062 0.407±0.081 0.413±0.051 0.442±0.057* 0.388±0.041 0.413±0.043 0.426±0.022*腎臟/% 0.576±0.028 0.592±0.036 0.625±0.031** 0.648±0.052**0.593±0.060 0.625±0.028** 0.644±0.026**腎上腺/% 0.018±0.008 0.018±0.005 0.018±0.005 0.020±0.003 0.018±0.006 0.017±0.005 0.019±0.005胸腺/% 0.100±0.027 0.094±0.015 0.094±0.023 0.086±0.022 0.091±0.020 0.095±0.025 0.096±0.016前列腺/% 0.294±0.035 0.291±0.027 0.276±0.022 0.260±0.067 0.296±0.014 0.289±0.041 0.234±0.026*睪丸/% 0.830±0.055 0.898±0.067 0.991±0.049** 1.106±0.040**0.909±0.067 1.068±0.119** 1.095±0.205*附睪/% 0.296±0.025 0.282±0.032 0.303±0.042 0.341±0.040 0.294±0.022 0.324±0.039 0.342±0.047子宮/% 0.176±0.049 0.209±0.046 0.201±0.033 0.174±0.038 0.151±0.049 0.185±0.025 0.223±0.039卵巢/% 0.035±0.007 0.038±0.001 0.040±0.005 0.039±0.004 0.037±0.002 0.038±0.002 0.037±0.002腦/% 0.644±0.168 0.694±0.161 0.749±0.172 0.852±0.153**0.707±0.178 0.747±0.149 0.837±0.134*（給藥26周，n=5～10）心臟/% 0.313±0.048 0.283±0.036 0.320±0.031 0.348±0.037 0.301±0.036 0.349±0.067 0.335±0.032肝臟/% 2.230±0.101 2.117±0.224 2.223±0.121 2.430±0.234* 2.202±0.182 2.265±0.093 2.368±0.182脾臟/% 0.153±0.025 0.154±0.021 0.161±0.015 0.165±0.024 0.154±0.022 0.168±0.022 0.166±0.026肺臟/% 0.334±0.103 0.368±0.052 0.403±0.033 0.430±0.037* 0.379±0.062 0.383±0.040 0.429±0.055*腎臟/% 0.556±0.043 0.525±0.040 0.600±0.028* 0.641±0.047**0.574±0.050 0.612±0.047 0.628±0.046**腎上腺/% 0.014±0.004 0.015±0.005 0.017±0.005 0.018±0.006 0.015±0.004 0.018±0.006 0.018±0.003*胸腺/% 0.080±0.039 0.064±0.016 0.090±0.095 0.056±0.011 0.060±0.015 0.073±0.027 0.061±0.016前列腺/% 0.212±0.042 0.241±0.018 0.247±0.043 0.228±0.028 0.241±0.008 0.285±0.015 0.213±0.018睪丸/% 0.733±0.040 0.807±0.093 0.922±0.072** 0.947±0.074**0.782±0.071 0.915±0.109 1.043±0.067*附睪/% 0.261±0.037 0.247±0.033 0.313±0.021* 0.297±0.029 0.253±0.013 0.287±0.027 0.312±0.044子宮/% 0.182±0.046 0.160±0.057 0.144±0.026 0.157±0.031 0.150±0.017 0.151±0.049 0.186±0.043卵巢/% 0.031±0.003 0.032±0.004 0.036±0.004 0.037±0.003**0.033±0.006 0.034±0.002 0.038±0.002*腦/% 0.577±0.147 0.609±0.158 0.665±0.191 0.777±0.148**0.627±0.154 0.698±0.197 0.781±0.145**（停藥恢復(fù)期8周，n=5～10）心臟/% 0.288±0.034 0.294±0.032 0.299±0.038 0.311±0.044 0.293±0.031 0.304±0.034 0.306±0.040肝臟/% 2.251±0.144 2.560±0.424 2.511±0.273* 2.638±0.17** 2.286±0.084 2.512±0.232** 2.638±0.274**脾臟/% 0.142±0.020 0.143±0.025 0.149±0.022 0.161±0.029 0.144±0.020 0.148±0.024 0.149±0.025肺臟/% 0.351±0.031 0.355±0.045 0.371±0.045 0.377±0.058 0.354±0.047 0.364±0.040 0.372±0.057腎臟/% 0.521±0.053 0.544±0.050 0.558±0.040 0.578±0.090 0.534±0.043 0.587±0.048** 0.568±0.043*腎上腺/% 0.014±0.004 0.0141±0.005 0.015±0.007 0.016±0.007 0.014±0.005 0.015±0.006 0.015±0.006胸腺/% 0.065±0.029 0.069±0.018 0.060±0.014 0.066±0.016 0.061±0.013 0.066±0.018 0.067±0.020前列腺/% 0.247±0.013 0.198±0.069 0.245±0.038 0.238±0.027 0.242±0.029 0.264±0.046 0.193±0.048睪丸/% 0.733±0.016 0.705±0.147 0.812±0.023**0.888±0.169 0.754±0.092 0.824±0.074* 0.904±0.095*附睪/% 0.256±0.017 0.260±0.045 0.268±0.004 0.280±0.017 0.274±0.028 0.285±0.031 0.257±0.022子宮/% 0.158±0.024 0.158±0.010 0.336±0.382 0.197±0.031 0.174±0.039 0.293±0.210 0.180±0.039卵巢/% 0.028±0.002 0.034±0.009 0.031±0.005 0.037±0.010 0.030±0.023 0.033±0.004 0.033±0.002**腦/% 0.542±0.018 0.577±0.124 0.615±0.151 0.645±0.160 0.567±0.139 0.602±0.133 0.643±0.142

復(fù)方中、高劑量組：有部分動物肝細(xì)胞呈輕度脂肪變性、輕度小膽管增生或/和腎小管上皮細(xì)胞呈輕度顆粒樣變性。其中，在給藥13周時，中、高劑量組大鼠肝細(xì)胞呈輕度脂肪變性或輕度炎癥者分別為1、2只，腎小管上皮細(xì)胞呈輕度顆粒樣變性者分別為3、4只；給藥26周時，中、高劑量組大鼠肝細(xì)胞呈輕度脂肪變性者分別為0、3只，呈輕度小膽管增生者分別為1、1只，腎小管上皮細(xì)胞呈輕度顆粒樣變性者分別為4、4只，所有病變未見有明顯的性別差異。

此外，在給藥13、26周以及停藥8周時，各劑量組和空白對照組動物的心、肝、腎、腦、主動脈血管、子宮、卵巢、睪丸、附睪、前列腺等組織器官均未發(fā)現(xiàn)明顯異常。

4 討論

珍菊降壓片是中西藥配伍復(fù)方制劑的典型代表，是臨床上最常用的治療高血壓的藥物之一。該制劑的研制起源于20世紀(jì)70年代，限于當(dāng)時的研發(fā)條件及對藥物安全性的認(rèn)識水準(zhǔn)，近來有不少學(xué)者對其組方合理性提出質(zhì)疑［9］。尤其該制劑中的化藥成分鹽酸可樂定和氫氯噻嗪，因其固有的副作用使在臨床選擇使用時增添了不少擔(dān)憂。為此，本課題組就珍菊降壓片長時間大劑量使用的安全性進行評價，并通過拆方方式，以制劑中鹽酸可樂定和氫氯噻嗪化藥組分的固有毒性為比較對象，從毒理學(xué)角度對其中西藥配伍機制進行研究。

鹽酸可樂定［10-11］屬α受體激動劑，其降壓機制為激動中樞咪唑啉受體，使外周交感張力降低，同時，激動外周交感神經(jīng)突觸前膜α2受體，增強其負(fù)反饋作用，減少末梢神經(jīng)釋放去甲腎上腺素，降低外周血管和腎血管阻力，減慢心率，降低血壓。但長期使用可使周圍血管阻力持續(xù)降低，并可使心率減慢。過大劑量可能導(dǎo)致可逆性心臟傳導(dǎo)障礙或心律失常，短暫高血壓，短暫血糖升高。氫氯噻嗪［12］為臨床上常用的利尿藥，能抑制腎小管對Na+、C1-的主動重吸收，增加胃腸道對Na+的排泄，長期用藥可致血膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白水平升高，血Mg2+、K+、Na+、C1-及HDL水平降低，臨床上表現(xiàn)為口干、惡心、嘔吐和極度疲乏無力、肌肉痙攣、肌痛、腱反射消失，有促進動脈粥樣硬化的可能，但停藥即可恢復(fù)。本實驗結(jié)果顯示，給大鼠灌服分別相當(dāng)于人體臨床劑量18、71、284倍的珍菊降壓片中的鹽酸可樂定和氫氯噻嗪的化藥組分，每天1次，連續(xù)26周，受試動物體質(zhì)量增長持續(xù)下降，血液RBC、HGB、HCT、MCH、MCHC先升高后降低，血清ALP、NEFA上升，TP、ALB、K+、Na+、C1-下降，尿液G1u以及肝、腎、腎上腺、睪丸系數(shù)升高，部分動物肝細(xì)胞呈輕度脂肪變性，腎小管上皮細(xì)胞呈輕度顆粒樣變性，停藥后亦未見完全恢復(fù)，其程度呈明顯的量效關(guān)系。上述指標(biāo)的異常變化與珍菊降壓片中化藥成分的副作用相關(guān)，提示珍菊降壓片的副作用主要源于鹽酸可樂定和氫氯噻嗪2種化藥成分。

服用中西藥配伍的珍菊降壓片，發(fā)現(xiàn)由配伍化藥組分所導(dǎo)致的體質(zhì)量增長緩慢現(xiàn)象受到明顯抑制，其抑制程度有明顯的量效關(guān)系，低劑量組完全對抗，中劑量部分對抗，高劑量對抗不明顯；同樣，珍菊降壓片對由化藥組分所導(dǎo)致的紅細(xì)胞系各項指標(biāo)的異常亦有劑量依賴性的對抗或部分對抗活性，與化藥組分對照組比，表現(xiàn)為在給藥13周時抑制RBC、HGB、HCT、MCH的升高，而在給藥26周及停藥8周時對抗RBC、HGB、HCT、MCHC降低；對于由化藥組分所導(dǎo)致的糖脂代謝 （GLU，HDL，NEFA）、肝功能（ALP，TP，ALB）以及電解質(zhì) （K+、Na+、C1-）異常，珍菊降壓片低劑量顯示出完全的對抗能力，而中、高劑量對抗作用不明顯；珍菊降壓片對由化藥組分所導(dǎo)致的肝、腎、睪丸、卵巢系數(shù)增加未見有明顯對抗作用，但對受損肝、腎組織的病理改變有一定的改善作用。

進一步研究還顯示，連續(xù)13周給大鼠灌服配伍化藥組份或復(fù)方制劑，均可引起大鼠腎臟基因表達(dá)水平的改變，且不同組分所引起的腎臟基因表達(dá)改變的差異不同。聚類結(jié)果顯示，基因表達(dá)譜的改變以配伍化藥組分作用最為明顯，且劑量大小與基因表達(dá)變化程度呈正相關(guān)。將化藥低劑量組與化藥中劑量組聚類在一起，中西藥配伍使用的復(fù)方低劑量與配伍化藥低劑量組顯著分開，接近于空白對照組，而復(fù)方中劑量組與配伍化藥中劑量組有一定比例的改變，但基因聚類結(jié)果尚不能完全分開，提示低劑量復(fù)方中的中藥組分能降低化藥組分引起的基因表達(dá)水平的改變，而高劑量復(fù)方中的中藥組分對于化藥組分長期造成的基因表達(dá)改變作用不顯著，表明中西藥配伍的珍菊降壓片在一定程度上能保持腎臟基因表達(dá)水平的穩(wěn)定，且與化藥組分的劑量相關(guān)［13］。

綜上，給大鼠每日灌服低劑量珍菊降壓片，連續(xù)26周，受試動物各項指標(biāo)均表現(xiàn)為正常，表明長期給藥的安全劑量為人臨床劑量的18倍，提示臨床上按照說明書推薦劑量服藥是比較安全的。但在71、284倍劑量下受試動物部分血清、尿液、臟器系數(shù)和組織病理等指標(biāo)出現(xiàn)明顯的異常，提示過分高于說明書推薦劑量服用藥物存在著潛在的風(fēng)險，必須引起高度重視。此外，對于患有肝腎疾病或糖尿病的患者，建議在使用過程中，定期檢測其血液生化和尿常規(guī)等指標(biāo)，并應(yīng)在醫(yī)生的指導(dǎo)下謹(jǐn)慎用藥。

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Detoxic attenuation mechanism of Zhenju Jiangya Tablets containing phyto-Chinesemedicine extracts and chem ical drugs'com ponents

XIE Jia-jun1， ZHOU Guang-xing2， QIAO Zheng-dong3， CHENG Miao4， ZHANG Guo-ming4，WANG Jian-xin5

（1.Center for Drug Evaluation，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai201203，China；2.Department of Laboratory Animal Science，F(xiàn)udan University，Shanghai200032，China；3.Shanghai Pudong Hospital，Shanghai201399，China；4.Shanghai Instituteof ChineseMateria Medica，Shanghai201401，China；5.School of Pharmacy，F(xiàn)udan University，Shanghai201203，China）

AIMTo investigate the safety and the detoxic mechanism of Zhenju Jiangya Tab1ets containing phyto-Chinesemedicine and chemica1s.METHODSThe ratswere treated with Zhenju Jiangya Tab1ets at a dose of 3 200，800，200 mg/kg respective1y and its corresponding chemica1s through intragastric administration once a day for 26 weeks.RESULTSAfter the administration of the chemica1 components，the anima1body weight dec1ined.RBC，HGB，HCT，MCH，MCHC initia11y increased and then decreased in the b1ood.ALP，NEFA，ALB，K+increased.TP，Na+，C1-decreased in the serum.G1u increased in the urine.The coefficients of 1iver，kidney，adrena1g1and and testis increased.Some anima11iver ce11s showedmi1d steatosis and some anima1 rena1 tubu-1ar epithe1ia1 ce11s showed mi1d granu1ar degeneration.Both did not recover comp1ete1y after the administration stopped.But Zhenju Jiangya Tab1ets cou1d comp1ete1y inhibit these adverse reactions at a dose of 200 mg/kg，and part1y inhibit them at a dose of 3 200 and 800 mg/kg.CONCLUSIONZhenju Jiangya Tab1ets can comp1ete1y orpartia11y antagonize toxicity induced by the chemica1s'components，and its antagonizing degree is c1ose1y re1ated to the dosages of the chemica1s'components.The safe dosage of Zhenju Jiangya Tab1ets by intragastric administration for 26 weeks for rats is200 mg/kg，equiva1ent to 18 times of the c1inica1dosage for human.

Zhenju Jiangya Tab1ets；c1onidine hydroch1oride；hydroch1orothiazide；combination of phyto-Chinesemedicine and chemica1s；chronic toxicity test；detoxic attenuationmechanism；safe dose

R285.5

A

1001-1528（2015）08-1633-09

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.08.001

2015-03-02

國家 “十二五”科技重大專項課題（2011ZX09301-009）；上海市科委中藥現(xiàn)代化專項 （04DZ19854）

謝家駿 （1959—），男，研究員，碩士生導(dǎo)師，研究方向為藥理毒理學(xué)研究與中藥新藥開發(fā)。Te1：（021）51322395，E-mai1：xiejj001@163.com