宮鵬 高建

蒼辛滴鼻劑的提取工藝實(shí)驗(yàn)研究

宮鵬 高建

目的優(yōu)選蒼辛滴鼻劑的最佳提取工藝。方法水提工藝及醇沉工藝均以綠原酸為考察指標(biāo)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。結(jié)果蒼辛滴鼻劑的最佳水提工藝為:加水8倍量，煎煮2次，每次1 h。最佳醇沉工藝為:水提液濃縮至相對(duì)密度為1.05的清膏，乙醇濃度為70%，靜置24 h。結(jié)論優(yōu)選出的蒼辛滴鼻劑提取工藝穩(wěn)定可行。

蒼辛滴鼻劑;正交實(shí)驗(yàn);綠原酸

蒼辛滴鼻劑由蒼耳子、辛夷、白芷三味中藥組方而成，主要治療鼻炎、鼻竇炎及相關(guān)并發(fā)癥［1－3］。本方參照宋代《濟(jì)生方》中的治療鼻炎鼻竇炎的經(jīng)典方(蒼耳子散)，原方為蒼耳子、薄荷、辛夷、白芷四味中藥，本方在原有基礎(chǔ)上進(jìn)行了調(diào)整，選取蒼耳子、辛夷、白芷這三味，由對(duì)治療鼻炎明確有效的中藥提取精制而成［4］。本制劑汲取了傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論，運(yùn)用現(xiàn)代的研究精制方法，制備成外用滴鼻制劑，不僅療效顯著且使用方便。本文依據(jù)方中君藥蒼耳子的理化性質(zhì)，同時(shí)結(jié)合本制劑的功能主治，以綠原酸為考察指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選蒼辛滴鼻劑的提取工藝［5］。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 Waters 600高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)，BP210S型萬(wàn)分之一電子天平(德國(guó)賽多利斯)，AS3120型超聲波清洗器(天津奧特賽恩斯公司)。蒼耳子、辛夷、白芷均購(gòu)自合肥和義堂中藥飲片廠。綠原酸對(duì)照品(批號(hào):753－9205)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，乙腈(色譜純)，重蒸水，其他試劑均為分析純。

1.2 水提工藝的研究

1.2.1 水提正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 分別稱取蒼耳子10 g、辛夷10 g、白芷10 g，共9份，按照表1中的L9(3)4正交表進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，收集水提液，并定容到1 000 mL。

表1 水提實(shí)驗(yàn)因素水平

1.2.2 HPLC法測(cè)定水提液中綠原酸含量

1.2.2.1 色譜條件 shim-pack ODS柱(250×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 －0.4%磷酸溶液(13 ∶87);檢測(cè)波長(zhǎng):327 nm;柱溫:25℃;流速:1.0 mL/min。

1.2.2.2 綠原酸對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品1.967 mg，置10 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成目標(biāo)濃度的溶液，即得。

1.2.2.3 供試品溶液的制備 取“1.2.1”項(xiàng)下的水提液適量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密吸取綠原酸對(duì)照品1、2、4、8、12、16 μL，依次注入液相色譜儀，依法測(cè)定。得A=1 414 320 C+72 469;R2=0.998 8。結(jié)果表明，綠原酸在0.196 7～3.147 2 μg范圍內(nèi)，綠原酸含量與峰面積呈良好線性關(guān)系。

1.2.2.5 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，依照水提正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)測(cè)定。

1.3 醇沉工藝的研究

1.3.1 醇沉正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 取水提液，平均分成9份，再按照表2中L9(3)4正交表進(jìn)行醇沉實(shí)驗(yàn)。棄去醇沉后的雜質(zhì)，得醇液定容至500 mL。

表2 醇沉實(shí)驗(yàn)因素水平

1.3.2 HPLC法測(cè)定醇沉液中綠原酸含量

1.3.2.1 色譜條件 shim-pack ODS柱(250×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 －0.4%磷酸溶液(10 ∶90);檢測(cè)波長(zhǎng):327 nm;柱溫:25℃;流速:1.0 mL/min。

1.3.2.2 綠原酸對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品1.706 mg，置10 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成目標(biāo)濃度的溶液，即得。

1.3.2.3 供試品溶液的制備 取“1.3.1”項(xiàng)下的醇液適量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.3.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取綠原酸對(duì)照品0.5、2、4、6、8、10 mL 至 10 mL 量瓶中，加 50%甲醇至刻度，搖勻即得。得 A=34 653 C－4 485.6;R2=0.999 8。結(jié)果表明，綠原酸在 8.53 ～136.48 μg/mL 范圍內(nèi)，綠原酸含量與峰面積呈良好線性關(guān)系。

1.3.2.5 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液20 μL與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，依照醇沉正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 水提正交結(jié)果 正交實(shí)驗(yàn)表結(jié)果可知最佳水提工藝為:A3B1C3，見表3。方差分析見表4，B項(xiàng)煎煮時(shí)間具有極顯著性影響，故煎煮時(shí)間1 h即可，符合綠原酸長(zhǎng)時(shí)間受熱會(huì)被破壞的理論依據(jù)［6］。其他兩項(xiàng)加水量為默認(rèn)誤差，煎煮次數(shù)的顯著性相對(duì)于煎煮時(shí)間的顯著性可忽略，故從降低工業(yè)生產(chǎn)成本的角度出發(fā)，可得最佳水提工藝為A1B1C1。綜合考慮，并參照表3中的綠原酸含量，最后確定最佳水提工藝為A2B1C2，即用8倍量水，提取2次，每次1 h。

表3 水提正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表4 水提方差分析結(jié)果

2.2 水提驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 稱取蒼耳子300 g、辛夷300 g、白芷300 g，按照水提正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選后的方案，即用8倍量水，提取2次，每次1 h進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，水提液定容到9 000 mL，作為供試品溶液。按“1.2.2”項(xiàng)下的色譜條件，運(yùn)用外標(biāo)一點(diǎn)法依法進(jìn)行含量測(cè)定。水提后綠原酸得提取率可達(dá)80%以上，此驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)可確定該水提工藝穩(wěn)定合理，見表5。

表5 水提工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 醇沉正交結(jié)果 正交實(shí)驗(yàn)表結(jié)果可知最佳醇提工藝為:A1B3C1，見表6。方差分析見表7，A項(xiàng)相對(duì)密度和B項(xiàng)醇沉濃度均具有極顯著性，A項(xiàng)相對(duì)密度越小，即在水提液濃縮的過(guò)程中有效成分綠原酸被雜質(zhì)包裹的可能性越低［7］，所得綠原酸含量越高;B項(xiàng)醇沉濃度決定在醇沉?xí)r濃縮液中綠原酸的溶出，綠原酸在70%乙醇中的溶解度最大［8］，與方差分析結(jié)果一致，故可確定最佳醇沉工藝的相對(duì)密度為1.05，醇沉濃度為70%乙醇。C項(xiàng)醇沉?xí)r間為默認(rèn)誤差，故從縮短工業(yè)生產(chǎn)周期的角度出發(fā)，選取醇沉?xí)r間為24小時(shí)，可得最佳水提工藝為 A1B3C1，與表6所得結(jié)果一致。最后確定的最佳醇提工藝為A1B3C1，即相對(duì)密度1.05，醇沉濃度為70%，醇沉?xí)r間24 h。

表6 醇沉正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表7 醇沉方差分析結(jié)果

2.4 醇沉驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 稱取蒼耳子100 g、辛夷100 g、白芷100 g，水提后按照醇沉正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選后的方案，即相對(duì)密度1.05，醇沉濃度為70%，醇沉?xí)r間24 h進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，按“1.3.2”項(xiàng)下的色譜條件，運(yùn)用外標(biāo)一點(diǎn)法依法進(jìn)行含量測(cè)定。水提醇沉后綠原酸得提取率可達(dá)75%以上，此驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)可確定該醇沉工藝穩(wěn)定合理，見表8。

表8 醇沉工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

3 討論

3.1 考察指標(biāo)選擇 本方蒼辛滴鼻劑中蒼耳子為君藥，具有散風(fēng)除濕，通鼻竅的功能，為歷代治療鼻淵及頭痛要藥。蒼耳子主要含有酚酸類、水溶性苷類、脂肪油、蛋白質(zhì)等成分［6］?，F(xiàn)代研究表明蒼耳子主要活性成分為酚酸類化合物，具有抗感染和鎮(zhèn)痛等作用［4］，其中綠原酸為主要有效成分。故本文選取綠原酸為指標(biāo)對(duì)提取工藝進(jìn)行篩選。

3.2 提取方法的選擇 在確定蒼辛滴鼻劑以綠原酸為考察指標(biāo)后，考慮到蒼耳子中含有大量的蛋白質(zhì)成分［8］，制成鼻腔給藥制劑會(huì)對(duì)鼻黏膜造成一定的刺激，影響制劑使用的舒適性，故在提取方法的選擇方面采用水提醇沉法。先進(jìn)行水提最大限度的保留有效成分，得水提液后醇沉去除水溶性蛋白雜質(zhì)。

3.3 流動(dòng)相篩選 在正交水提過(guò)程中，綠原酸的測(cè)定方法是參照2010年版藥典第一部中測(cè)金銀花中的綠原酸含量的色譜條件，流動(dòng)相即乙腈－0.4%磷酸 溶液(13∶87)為流動(dòng)相，此條件下峰形，柱效均可達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)。但在測(cè)定醇沉實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下的綠原酸時(shí)，樣品峰分離度不佳，故考慮以增大流動(dòng)相中的水相比例來(lái)增大分離度，最后確定流動(dòng)相為乙腈－0.4%磷酸溶液(10∶90)，在此條件下峰形，柱效均可達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)。

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［2］馬濤，李繼鋒，孫政，等.經(jīng)單側(cè)鼻孔蝶竇入路顯微切除垂體瘤30 例［J］.安徽醫(yī)學(xué)，2014，35(4):508－509.

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Study on extraction process of Cangxin Nasal Drops

Gong Peng，Gao Jian
College of Pharmacy，Anhui Traditional Chinese Medicine University，Hefei 230038，China

ObjectiveTo optimize the extracting technique condition of Cangxin Nasal Drops.MethodsThe total quantity of Cycolohexanecaboxylio acid was used as the index for both the processing for water extraction and alcohol precipitation by the orthogonal design.ResultsThe optimum water extraction conditions of Cangxin Nasal Drops were:8 times of water，extracted 2 times and each time lasted 1 hours.The optimum alcohol precipitation conditions of Cangxin Nasal Drops were:the relative density of water extraction was 1.05，and the concentration of the alcohol for precipitate was 70%，settlement for 24 h.ConclusionThe extraction process of Cangxin Nasal Drops is stable and feasible.

Cangxin Nasal Drops;Orthogonal experiments;Cycolohexanecaboxylio acid

10.3969/j.issn.1000 －0399.2015.03.002

2013年安徽省高等教育振興計(jì)劃人才項(xiàng)目;2013年安徽省中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展專項(xiàng)資金項(xiàng)目

230038 合肥 安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院(宮鵬)

230022 合肥 安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥化學(xué)三級(jí)實(shí)驗(yàn)室(高建)

高建，gaojianayfy@163.com

(2014－09－05收稿 2014－11－30修回)