閔濟(jì)富 高 建

HPLC法測(cè)定續(xù)斷接骨膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量

閔濟(jì)富 高 建

目的采用高效液相色譜法測(cè)定續(xù)斷接骨膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量。方法色譜柱:Amethyst C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相:乙腈－水(28∶72)，檢測(cè)波長(zhǎng):212 nm，流速:1.0 mL/min。結(jié)果川續(xù)斷皂苷Ⅵ的質(zhì)量濃度線性范圍為0.019～0.612 mg/mL(r=0.999 9)，平均加樣回收率為100.89%，RSD=1.10%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為續(xù)斷接骨膠囊的質(zhì)量控制手段。

續(xù)斷接骨膠囊;高效液相色譜法;川續(xù)斷皂苷Ⅵ

續(xù)斷接骨膠囊是天長(zhǎng)市中醫(yī)院骨傷科的協(xié)定方，經(jīng)現(xiàn)代提取技術(shù)、制備工藝加工制成的醫(yī)院制劑，由酒續(xù)斷、炙黃芪、當(dāng)歸等中藥組成，具有續(xù)筋接骨、補(bǔ)益肝腎的功效，用于骨折中后期的治療，經(jīng)過(guò)我院老中醫(yī)十多年的臨床驗(yàn)證，療效可靠。本處方中酒續(xù)斷為君藥，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、續(xù)折傷、止崩漏、安胎等功效［1］。續(xù)斷接骨膠囊的化學(xué)成分主要為三萜皂苷類、環(huán)烯醚萜苷類、黃酮類、生物堿類、揮發(fā)油類等，其中主要的有效成分為川續(xù)斷皂苷Ⅵ［2］。本文采用HPLC法對(duì)續(xù)斷接骨膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 日本島津LC-10AT高效液相色譜系統(tǒng);N2000色譜工作站;Mettler Toledo公司ABS135-S型電子天平。

續(xù)斷接骨膠囊(天長(zhǎng)市中醫(yī)院制劑室，批號(hào):101001、101002、101003);川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品(南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司，標(biāo)定純度:97.60%)。

1.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品(純度:97.60%)6.27 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇1 mL溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含川續(xù)斷皂苷Ⅵ0.612 0 mg的溶液。

1.3 供試品溶液制備 取本品研細(xì)的粉末1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，置水浴加熱回流1.5 h，冷卻，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.4 陰性對(duì)照品溶液制備 按處方比例制備不含酒續(xù)斷的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2 結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱:Amethyst C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);以乙腈 －水(28 ∶72)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng):212 nm;柱溫:25℃;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:20 μL。理論塔板數(shù)按川續(xù)斷皂苷Ⅵ峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000，色譜圖見圖1～圖3。

2.2 線性關(guān)系考察 取“1.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，分別用流動(dòng)相稀釋 0、2、4、8、16、32 倍，精密吸取上述溶液各20 μL注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=7 534 952 X+3 508，r=0.999 9。川續(xù)斷皂苷Ⅵ在0.019～0.612 mg/mL范圍內(nèi)，峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗(yàn) 取同一濃度對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果得川續(xù)斷皂苷Ⅵ峰面積的RSD為2.04%(n=6)，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液20 μL，于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量的RSD為2.28%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品6份，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量，RSD為1.25%(n=6)，表明重復(fù)性良好。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量的樣品9份(含量:6.67 mg/g)，分別精密加入1.5、2.5和3.5 mL濃度為1.33 mg/mL的川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品，按供試品溶液的制備方法制備溶液，測(cè)定含量并計(jì)算回收率得平均回收率為100.89%，RSD=1.10%(n=9)。見表1。

表1 川續(xù)斷皂苷Ⅵ加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.7 樣品含量測(cè)定 取不同批號(hào)樣品(批號(hào)為101001、101002、101003)，按“1.3”制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行HPLC分析，測(cè)定其中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量，見表2。

表2 不同批號(hào)樣品含量測(cè)定(n=3)

3 討論

本文采用HPLC對(duì)續(xù)斷接骨膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量進(jìn)行測(cè)定，續(xù)斷皂苷Ⅵ的質(zhì)量濃度線性范圍為0.019～0.612 mg/mL(r=0.999 9)，平均加樣回收率為100.89%，RSD=1.10%，3批樣品中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的平均含量分別為 2.684 mg/粒、2.610 mg/粒和2.677 mg/粒。實(shí)驗(yàn)中通過(guò)紫外分光光度法掃描，川續(xù)斷皂苷Ⅵ在212 nm處有最大吸收，以及參考相關(guān)研究［3，4］，本實(shí)驗(yàn)采用 212 nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

本文供試品溶液的制備方法在參照文獻(xiàn)［1，3］的基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化，依次對(duì)提取溶劑(甲醇∶乙醇∶水飽和正丁醇)、提取方法和時(shí)間(加熱回流1.5、3 h和超聲處理 30、60 min)、溶劑用量(50、100、200 mL)進(jìn)行考察，結(jié)果顯示以甲醇50 mL加熱回流1.5 h時(shí)所測(cè)川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量最高，最終確定了供試品溶液的制備方法。

文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC法測(cè)定川續(xù)斷皂苷Ⅵ的方法中，使用的流動(dòng)相主要有乙腈 －水(31∶69)［5］，乙腈－水(30 ∶70)［3］，乙腈 －水(28 ∶72)［4］，甲醇 － 水(梯度洗脫)［6］，實(shí)驗(yàn)中比較了不同比例的乙腈－水系統(tǒng)和甲醇－水系統(tǒng)，其中以乙腈－水(28∶72)為流動(dòng)相，基線較平，分離度好。

HPLC對(duì)續(xù)斷接骨膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ進(jìn)行定量分析，具有較好的準(zhǔn)確度和靈敏度，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性高。本方法可用于續(xù)斷接骨膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的定性及定量研究，為續(xù)斷接骨膠囊的質(zhì)量控制提供參考。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:309.

［2］劉二偉，吳帥，樊官偉.川續(xù)斷化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，7(12):1421 － 1423.

［3］譚洪根，林生，張啟偉，等.高效液相色譜法測(cè)定續(xù)斷藥材中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量［J］.中國(guó)中藥雜志，2006，31(9):726－727.

［4］李大慶，王曼寧，梁曉麗，等.祛風(fēng)止痛膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量測(cè)定［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，31(6):791 － 792.

［5］董文桑，瞿發(fā)林，蔣燕.HPLC法測(cè)定舒筋活絡(luò)酒中川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量［J］.中國(guó)藥師，2008，11(3):284 －286.

［6］胥秀英，鄭一敏，傅善權(quán)，等.道地藥材川續(xù)斷指紋圖譜模糊模式識(shí)別研究［J］.中國(guó)藥業(yè)，2008，17(5):8－9.

Determination of asperosaponinⅥin Xuduanjiegu capsule by HPLC

Min Jifu，Gao Jian
School of Pharmacy，Anhui University of Chinese Medicine，Hefei 230038，China

ObjectiveTo determine asperosaponinⅥ in Xuduanjegu capsule by HPLC.MethodsThe chromatography procedure was carried out using Amethyst C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)as an analytic column and acetonitrile－ water(28 ∶72，v/v)as a mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was set at 212 nm.ResultsThe linear range of asperosaponinⅥ was between 0.019 mg/mL and 0.612 mg/mL(r=0.999 9).The average recovery rate of asperosaponin Ⅵ was 100.89%，with the RSD of 1.10%.ConclusionThe method is simple，accurate and reliable and can be used for the quality control of Xuduanjiegu capsule.

Xuduanjiegu capsule;HPLC;AsperosaponinⅥ

10.3969/j.issn.1000 －0399.2015.03.001

2013年安徽省高等教育振興計(jì)劃人才項(xiàng)目，安徽省學(xué)術(shù)和技術(shù)帶頭人后備人選培養(yǎng)資助

230038 合肥 安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院(閔濟(jì)富，高建)

230022 合肥 安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科(高建)

高建，gaojianayfy@163.com

(2014－10－23收稿 2014－12－27修回)