司馬學琴，楊春榮

(1.湖北科技學院基礎醫(yī)學院，湖北 咸寧 437100;2.宜昌市中心人民醫(yī)院病理科)

肝癌是臨床上一種常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，具有發(fā)病隱匿、進展快、惡性程度高、預后差、復發(fā)率高、死亡率高等特點，為世界十大惡性腫瘤之一。目前，臨床治療肝癌采用以手術治療為主的綜合治療方案，但患者復發(fā)率及死亡率仍然較高。因此，對患者治療及預后有重要價值的觀察指標成為肝癌臨床研究的熱點。研究發(fā)現特異富含AT 序列結合蛋白1(SATB1)與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉移等生物學行為具有一定相關性［1，2］。本文旨在研究SATB1 在肝癌細胞中的表達及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 選取2010 年1 月至2012 年1 月于宜昌市中心人民醫(yī)院手術治療的肝癌患者78例，術前沒有放療和化療。男42例，女36例;年齡38～76歲。HbsAg(+)69例;腫瘤數目1～6 個;直徑2～9cm，直徑＜5cm 33例，5cm 及以上45例;包膜完整65例，伴肝硬化70例，癌栓9例。分化程度:高分化32例，中分化27例，低分化19例。TNM 分級:Ⅰ級18例，Ⅱ級43例，Ⅲ級17例。復發(fā)時間＜6 個月9例，6個月至2 年14例，無復發(fā)55例。所有患者在手術過程中均經病理檢查確診，留取癌組織標本及部分癌旁組織標本各1 份。另取20 份正常肝臟組織標本，所有患者均經病理檢查確診。

1.2 試劑與儀器 Trizol RNA 抽提試劑盒，MBI Fermentas 公司逆轉錄cDNA 第一鏈合成試劑盒。美國ABI 公司系列產品:ABI7500PCR 儀、DU800 紫外分光光度計;上海仕博公司H6-1 微型電泳儀。

1.3 實驗方法 按RNA 抽提試劑盒及逆轉錄試劑盒實驗流程提取組織樣本SATB1 mRNA 合成樣本相應cDNA。引物由上海基康生物技術有限公司合成:SATB1 上游引物5＇-AGGAAAACCGACAGAAGAC-3＇，下游引物為5＇-ACTGAACCTGACCGTACACCCACGTCT TGTATGAAACT-3＇，片段長度256bp;內參GAPDH 上游引物為5＇-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3 ＇，下游引物為 5 ＇-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3＇，片段長度138bp。反應體系如下:cDNA 2μl、0.6μmol/L 上游引物0.4μl、0.6μmol/L 下游引物0.4μl、SYBR Green I 10μl、ROX Reference Dye Ⅱ0.4μl、DEPC 水6.8μl，總反應體積為20μl。擴增條件如下:95℃預變性3min、95℃變性30s、64℃退火34s，40 循環(huán)。每次試驗均設置1 個陽性、陰性、空白對照。

1.4 SATB1 表達相對定量分析 實時熒光定量PCR 檢測樣本中SATB1 和GAPDH 的mRNA 表達水平，根據公式CTSATB1=CtSATB1/CtGAPDH，計算出癌組織和正常組織中SATB1 相對于GAPDH 的相對值。并分析不同組織中SATB1 表達差異;根據SATB1 表達水平將肝癌患者分為高表達組和低表達組，相對表達量≥0.105 視為高表達，相對表達量＜0.105 視為低表達，比較兩組患者復發(fā)率及生存率，分析其危險因素。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 18.0 統(tǒng)計學軟件進行數據處理，計量資料采用t 檢驗，SATB1 與臨床病理學參數的相關性用卡方檢驗。P ＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 肝癌組織和正常肝組織中SATB1 mRNA 相對表達量比較 在肝癌組織及正常肝組織中均可檢測到SATB1 mRNA 的表達。癌組織中SATB1 mRNA 表達水平(0.196±0.045)明顯高于正常肝組織(0.052±0.035)，差異有統(tǒng)計學意義(P ＜0.05)。

2.2 SATB1 表達水平與肝癌臨床病理學參數的關系 結果顯示，腫瘤大小、癌栓、分化程度、TNM分級與SATB1 相關，SATB1 表達水平與復發(fā)無相關性。詳見表1。

表1 SATB1 相對表達量與臨床病理學參數的關系

3 討論

SATB1 是一種核基質結合區(qū)結合蛋白，可以獨特模式識別與核基質結合區(qū)結合，可參與組織特異性基因表達調控及染色質高級結構形成過程，并可通過多種途徑調控全基因組基因的表達。SATB1 可促進T 細胞凋亡，下調中性粒細胞吞噬功能及免疫功能，促進腫瘤復發(fā)，誘導腫瘤出現侵襲性表型，進而促進腫瘤的生長及轉移［3］。

彭正奎等［4］研究認為SATB1 蛋白表達可參與肝細胞癌的復發(fā)轉移過程。有研究［5］表明運用生物學技術方法RNA 干擾敲除SATB1 基因，可以抑制肝癌細胞增值及其遠處轉移能力，證明SATB1 能作為肝癌早期診斷指標之一，在肝癌細胞轉移和侵襲中發(fā)揮重要作用。在本研究中，SATB1 mRNA 相對表達水平在癌組織中明顯高于正常肝細胞組織(P ＜0.05)，說明SATB1 在癌組織中表達水平明顯升高;卡方檢驗分析表明SATB1mRNA 相對表達水平與患者腫瘤大小、病理分化程度、TNM 分級等參數呈正相關性，與患者復發(fā)沒有明顯相關性。鑒于本次研究的局限，需要更多的標本做樣本研究，以及后續(xù)細胞生物學行為及動物實驗的深入研究，確立SATB1 基因與肝癌發(fā)生發(fā)展的相關性。

目前對于SATB1 研究較多，但其對基因表達調控、對細胞凋亡影響及其與腫瘤間相關性仍不是很明確，許多問題及機理仍需進一步研究證明［6～8］。隨著腫瘤分子靶向治療的不斷發(fā)展與完善，SATB1 表達對肝癌治療及預后判斷將成為未來研究熱點［9］。綜上所述，SATB1 在肝癌組織中表達水平高，與患者腫瘤大小、癌栓、病理分化程度、TNM 分級有關，可能參與肝癌發(fā)展進程，對患者預后及轉歸具有重要提示價值，亦可能為肝癌治療提供新的治療靶點。

［1］向江東，席曉薇.特異AT 序列結合蛋白1 與腫瘤關系的研究進展［J］.腫瘤，2009，29(11):1101

［2］Galande S，Purbey KP，Notanil D，et al.The third dimension of gene regulation:organization of dynamic chromatin loopscape by SATB1［J］.Curr Opin Genet Dev，2007，17(5):408

［3］Nakayama Y，Mian IS，Kohwi-Shigematsu T，et al.A nuclear targeting determinant for SATB1，a genome organizer in the T cell lineage［J］.Cell Cycle，2005，4(8):1099

［4］彭正奎，楊定華，李湘竑，等.肝細胞肝癌組織SATB1表達及其臨床意義的研究［J］.中華腫瘤防治雜志，2011，18(9):697

［5］Tu W，Luo M，Wang Z，et al.Up regulation of SATB1 promotes tumor growth and metastasis in liver cancer［J］.Liver Int，2012，32 (7):1064

［6］Han H，Russo J，Kohwi Y，et al.SATB1 reprogrammes gene expression to promote breast tumour growth and metastasis［J］.Nature，2008，452(7184):187

［7］Patani N，Jiang W，Mansel R，et al.The mRNA expression of SATBl and SATB2 in human breast cancer［J］.Cancer Cell Int，2009，9:18

［8］EI-Serag HB，Rudilph KL.Hepatocellular carcinoma:epidemiology and molecular carcinogenesis［J］.Gastroenterology，2007，132(7):2557

［9］Kobierzycki C，Wojnar A，Dziegiel P.Expression of SATB1 protein in the ductal breast carcinoma tissue microarrays-preliminary study［J］.Folia Histochem Cytobiol，2013，51(4):333