徐基偉, 孫元社, 唐 濤,, 夏明珠, 雷 武, 王風(fēng)云, 李 彤*

(1. 南京理工大學(xué), 江蘇 南京 210094; 2. 大連依利特分析儀器有限公司, 遼寧 大連 116023)

混合色譜填料的研究進(jìn)展

徐基偉1, 孫元社2, 唐 濤1,2, 夏明珠1, 雷 武1, 王風(fēng)云1, 李 彤2*

(1. 南京理工大學(xué), 江蘇 南京 210094; 2. 大連依利特分析儀器有限公司, 遼寧 大連 116023)

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,人們需要分離分析的樣品越來越復(fù)雜,尤其是多肽、蛋白質(zhì)類生物樣品的復(fù)雜性使得單一模式色譜難以滿足分離分析的要求?；旌夏Ｊ缴V因其獨(dú)特的分離性能,可以在一次分離中獲得與多維色譜相當(dāng)?shù)姆蛛x效果,而且可以避免多維色譜系統(tǒng)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、流動(dòng)相兼容性差、分析時(shí)間長等問題,成為近年來的研究熱點(diǎn)之一?；旌夏Ｊ缴V的研究重點(diǎn)是色譜固定相的設(shè)計(jì)與開發(fā)?；旌夏Ｊ缴V固定相包括反相/離子交換混合固定相、反相/親水混合固定相、親水/離子交換混合固定相、兩性離子交換混合固定相及三相混合固定相。本文綜述了近年來混合模式色譜填料的研究及應(yīng)用進(jìn)展,并對(duì)混合模式色譜及固定相的發(fā)展前景進(jìn)行了展望。

混合色譜；反相/離子交換混合固定相;反相/親水混合固定相;親水/離子交換混合固定相;兩性離子交換混合固定相

高效液相色譜法是目前發(fā)展最快、應(yīng)用最廣泛的分離分析技術(shù)之一,在藥物分析、生命科學(xué)、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域發(fā)揮著越來越重要的作用[1]。色譜填料作為液相色譜分離的核心之一,其性能特點(diǎn)直接影響分離分析的最終結(jié)果。面對(duì)復(fù)雜樣品,尤其是藥物提取液、多肽、蛋白質(zhì)等樣品的分析需求,單一機(jī)理的色譜固定相已經(jīng)難以滿足復(fù)雜樣品的分離分析要求。雖然多維色譜技術(shù)能夠滿足人們對(duì)分辨率的要求,但多維色譜系統(tǒng)存在著操作復(fù)雜、設(shè)備昂貴、流動(dòng)相兼容性差等問題[2-4]?；旌仙V固定相在分離樣品時(shí)能夠提供多重保留機(jī)理,同時(shí)可以通過改變流動(dòng)相中有機(jī)相與水相的比例、pH值的高低、鹽濃度的大小等多種方法改變分離選擇性,與單一機(jī)理的色譜固定相相比,混合色譜固定相選擇性好[5]、載樣量高[6,7],還可以降低分析成本,提高分析效率[8]。目前混合模式色譜固定相在多肽、蛋白質(zhì)[9]、藥物分子[10,11]、無機(jī)離子[12]等復(fù)雜樣品分離中表現(xiàn)出比傳統(tǒng)色譜固定相更好的分離選擇性。本文對(duì)混合模式色譜進(jìn)行簡要概述,著重介紹反相/離子交換、反相/親水、親水/離子交換、兩性離子交換及三相混合固定相的研究進(jìn)展及應(yīng)用,并對(duì)混合模式色譜及固定相的發(fā)展前景進(jìn)行了展望。

1 混合模式色譜概述

混合模式色譜是指在固定相與樣品之間能實(shí)現(xiàn)多重相互作用的一種色譜模式[13]?；旌夏Ｊ缴V并不是一個(gè)全新的概念,在單一模式的色譜分析中往往也存在著多種分離機(jī)理,如靜電效應(yīng)存在于反相色譜中、疏水作用存在于離子交換色譜中[14,15]。這些附加的作用力雖然較弱,但也是導(dǎo)致峰形拖尾的原因。在早期的研究中,科研人員極力消除這種附加作用力帶來的影響[16,17]。然而,隨著生命科學(xué)等學(xué)科的發(fā)展,面對(duì)極其復(fù)雜樣品的分離分析,人們逐漸認(rèn)識(shí)到色譜分離過程中附加作用力在分離復(fù)雜樣品時(shí)起到的積極作用?；旌夏Ｊ缴V中多種相互作用同時(shí)存在,可以通過選擇合適的色譜方法使樣品在一次分離中存在多種作用力,從而獲得更好的分離選擇性。

混合模式色譜的類型可以分為3類:(1)串聯(lián)兩根或多根具有不同分離機(jī)理的色譜柱,通過不同的接口連接,即多維色譜;(2)將兩種或兩種以上具有不同分離機(jī)理的固定相裝填在一根色譜柱中[18-20]; (3)在固定相表面鍵合具有不同分離機(jī)理的官能團(tuán),將其裝填在色譜柱中。其優(yōu)缺點(diǎn)見表1。

表1 3種混合模式色譜的優(yōu)缺點(diǎn)

* 1. connecting two columns with different retention mechanism in series which is termed multidimensional chromatography; 2. packing two stationary phase separately in two ends of the same column; 3. packing stationary phase with different retention mechanism functional group into one column.

第3種類型的混合模式色譜固定相以其相對(duì)低廉的設(shè)備要求、高效的選擇性和良好的裝填重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn),成為目前研究的熱點(diǎn)[21-26]?；旌夏Ｊ缴V固定相多將兩種具有正交性質(zhì)的官能團(tuán)鍵合到硅膠表面,從而達(dá)到最佳的分離選擇性。目前,已有研究報(bào)道的混合模式色譜固定相包括:反相/離子交換混合固定相[27-32]、反相/親水混合固定相[33-37]、親水/離子交換混合固定相[38-40]、兩性離子交換混合固定相[41-43]以及三相混合固定相[44-48]。表2列舉了最近5年來出現(xiàn)的部分混合模式色譜固定相的鍵合官能團(tuán)信息、分離模式及應(yīng)用領(lǐng)域。

RP: reversed-phase; CEX: cationic exchange; AEX: anion exchange; HILIC: hydrophilic interaction liquid chromatography; SAX: strong anion exchange; WAX: weak cationic exchange; WCX: weak anion exchange; BOC: butoxycarbonyl.

2 兩相混合固定相

2.1 反相/離子交換混合固定相

反相色譜是目前應(yīng)用最廣泛的一種色譜模式,能實(shí)現(xiàn)70%以上化合物的分離,但對(duì)大多數(shù)極性和離子化合物的分離效果較差。反相色譜與離子交換色譜的組合在多維液相色譜系統(tǒng)中比較常見[52-55],其分離條件易于保持樣品的生物活性,因此多用在生物樣品的分離分析中。反相/離子交換色譜固定相是在硅膠填料表面同時(shí)鍵合具有疏水性質(zhì)的碳鏈和具有離子交換性質(zhì)的陰離子或陽離子,將疏水作用與靜電作用相結(jié)合,使這兩種具有正交性質(zhì)的分離機(jī)理融合在單次分離中,從而獲得更好的分離選擇性。

1986年,Regnier等[56]用合成的陰離子交換固定相分離蛋白質(zhì),結(jié)果表明對(duì)蛋白質(zhì)的分離呈現(xiàn)疏水和離子交換雙重作用機(jī)理。1995年,Walshe等[18]將強(qiáng)陽離子交換填料與反相色譜填料裝填在一根色譜柱中,并以堿性物質(zhì)為探針研究了其保留機(jī)理。1999年,Link等[57]也使用同樣的混合固定相色譜柱結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜分離檢測蛋白質(zhì)。2000年,Hayes等[58]首次利用含C18基團(tuán)、季氨基團(tuán)的硅烷試劑與四甲氧基硅烷經(jīng)溶膠-凝膠法制備含有C18及季氨基正離子的雜化整體柱,并對(duì)材料的形成機(jī)理進(jìn)行了闡述。2009年,Geng等[8]使用反相/弱陽離子交換的混合色譜柱快速分離蛋白質(zhì),其分離結(jié)果優(yōu)于單一的弱陽離子色譜柱或反相色譜柱。2012年,Liang等[50]利用極性共聚的方法將具有疏水性的C18基團(tuán)與帶正電荷的季氨基團(tuán)平行鍵合到硅膠表面,合成了一種反相/強(qiáng)陰離子混合固定相(見圖1a)。該色譜固定相能與100%親水性流動(dòng)相兼容,在10 mmol/L、pH=3的醋酸銨流動(dòng)相條件下分離胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶3種物質(zhì),分離結(jié)果重復(fù)性良好。使用這種混合固定相制備SPE柱,對(duì)馬兜鈴酸能起到很好的富集作用,這為提取和分離馬兜鈴酸提供了一種方便快捷的方法。同年,Liu等[49]發(fā)展了一種類似的反相/陰離子交換色譜固定相,不同點(diǎn)在于該固定相中帶正電荷的季氨基內(nèi)嵌于疏水鏈中(見圖1b)。用該色譜固定相分離果皮中的生物堿類物質(zhì),生物堿在8 min內(nèi)出峰,其他酸性和中性物質(zhì)在混合色譜柱中比堿性物質(zhì)保留更強(qiáng),最后通過質(zhì)譜共鑒定出22種生物堿。

2013年,彭西甜等[59]采用一種簡單的“混合配體”的方法將辛基和磺酸基以平行的方式鍵合到硅膠表面(見圖1c),制備了共同鍵合辛基和磺酸基的反相/強(qiáng)陽離子交換混合固定相,并在反相色譜流動(dòng)相條件下,使用幾種堿性樣品作為探針,研究混合色譜固定相的保留機(jī)理。結(jié)果表明兩點(diǎn)保留機(jī)理更加符合混合色譜固定相,可根據(jù)兩點(diǎn)保留機(jī)理的公式分別得出單一的疏水或離子交換作用力對(duì)樣品保留的影響,為混合色譜固定相的機(jī)理研究提供了重要的參考。按照同樣的思路,彭西甜等[60]又通過點(diǎn)擊化學(xué)的方法將辛基和羧基平行鍵合到硅膠表面,合成了一種反相/弱陽離子交換混合固定相(見圖1d)。由于羧酸是一種弱酸,在低pH值時(shí)羧基不電離,則此時(shí)混合模式色譜固定相主要以疏水作用為主;在高pH值時(shí)羧基電離帶負(fù)電荷,此時(shí)的保留作用是疏水和靜電作用的結(jié)合,使分析物的保留行為更容易得到調(diào)節(jié)。采用此固定相對(duì)3種陽離子表面活性劑、6種抗抑郁藥及7種堿性溶質(zhì)分子進(jìn)行分離,均取得了良好的分離效果。同年,Song等[51]合成了一種適合于蛋白質(zhì)分離的新型反相/弱陽離子色譜固定相(見圖1e),即先使用環(huán)氧硅烷作為偶聯(lián)劑將聚乙二醇400鍵合到硅膠表面,然后再將琥珀酸酐連接到聚乙二醇400上。研究發(fā)現(xiàn)該混合固定相在分離蛋白質(zhì)過程中出現(xiàn)一個(gè)特殊現(xiàn)象,即隨著流動(dòng)相中鹽濃度的增加,蛋白質(zhì)的保留時(shí)間呈現(xiàn)“U”形曲線。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因是在不同鹽濃度的流動(dòng)相中混合固定相呈現(xiàn)不同的保留機(jī)理。該現(xiàn)象在其他文獻(xiàn)中鮮有報(bào)道。該混合固定相色譜柱可以取代由弱陽離子色譜和疏水色譜組成的二維色譜系統(tǒng),為單柱二維色譜的發(fā)展提供了重要參考,對(duì)蛋白質(zhì)組學(xué)的研究具有重要的意義。

2.2 反相/親水混合固定相

親水作用色譜是一種以極性填料為固定相,以高比例極性有機(jī)溶劑和低比例水溶液為流動(dòng)相的色譜模式。1990年,Alpert[61]首次提出了親水性色譜概念,為強(qiáng)極性化合物的分離分析提供了很好的選擇,已成為色譜科學(xué)研究的熱點(diǎn)之一[62,63]。經(jīng)典的反相色譜在疏水性化合物的分離中具有較大優(yōu)勢(shì),但在分離極性化合物時(shí)常常存在一定的局限性?，F(xiàn)代分離工作中,樣品常常是復(fù)雜的極性與非極性的混合物,這兩種模式的組合為這些混合物的分離提供了幫助。

黃曉佳等[64]在國內(nèi)首次合成了內(nèi)嵌酰胺鍵的極性基團(tuán)混合色譜填料,當(dāng)pH在2.5～7.5之間時(shí)穩(wěn)定性良好。由于內(nèi)嵌極性基團(tuán)有效地屏蔽了硅羥基與堿性物質(zhì)的相互作用,在分離堿性化合物時(shí)可以獲得良好的峰形。Liu等[35]發(fā)展了一種疏水鏈的末端帶有兩個(gè)羥基的色譜固定相(見圖2a)。該固定相在高比例有機(jī)相流動(dòng)相中表現(xiàn)出親水色譜模式,在低比例有機(jī)相流動(dòng)相中表現(xiàn)出疏水色譜模式,成功地分離了5種不同聚合度的聚乙二醇。Guo等[36]通過點(diǎn)擊化學(xué)的方法將寡聚乙二醇鍵合到硅膠表面(見圖2b)。寡聚乙二醇分子鏈中內(nèi)嵌多個(gè)氧原子并且末端的羥基為該固定相提供了一定的親水性。Xie等[65]通過在甲基丙烯酸十八酯中加入親水性單體甲氧基聚乙二醇甲基丙烯酸酯,熱聚合后得到一種具有親水性的新型C18填料,采用該填料制備SPE柱用于富集水中的酚類化合物。與傳統(tǒng)的C18富集材料相比,改性后的C18填料對(duì)酚類的富集效果更好。Zhang等[34]使用硅膠先后與氨丙基三甲氧基硅烷及葡萄酸內(nèi)酯反應(yīng)制備了一種多羥基化合物鍵合的新型反相/親水混合固定相,并以6種強(qiáng)極性中藥組分作為探針研究其機(jī)理。當(dāng)流動(dòng)相中有機(jī)相的比例在0～100%內(nèi)變化時(shí),溶質(zhì)的保留呈“U”形曲線,證明此種混合固定相屬于典型的反相/親水色譜混合模式。Aral等[37]報(bào)道了一種將含氮基團(tuán)與苯基相結(jié)合的反相/親水色譜固定相(見圖2c),研究表明該固定相既可以在親水模式下分離核苷類化合物,也可以在疏水模式下分離酚類化合物,并成功分離了9種核苷類混合物、11種植物激素和7種酚類化合物。武曉玉等[66]報(bào)道了一種同時(shí)兼具分離和富集功能的填料,通過對(duì)該填料的外表面進(jìn)行親水性修飾,使其外表面與生物樣品中的大分子不發(fā)生不可逆變形或吸附,因而大分子洗脫時(shí)間接近死時(shí)間；對(duì)其內(nèi)表面進(jìn)行疏水修飾,使小分子分析物可以進(jìn)入填料內(nèi)孔,通過疏水作用被保留,使其對(duì)生物樣品具有很好的初級(jí)分離效果。

圖2 反相/親水混合固定相Fig.2 Reversed-phase/hydrophilic mixed-mode stationary phases a. diol group stationary phase; b. oligo-ethylene glycol stationary phase; c. glutamine stationary phase.

2.3 親水/離子交換混合固定相

大多數(shù)生物樣品都具有一定的極性和親水性,例如多肽樣品具有親水性的同時(shí)還帶有電荷,在分離過程中將親水和靜電作用相結(jié)合能夠極大地改善分離效果。1998年,Mant等[67]報(bào)道了親水性陽離子色譜柱在環(huán)形多肽樣品分離中的應(yīng)用。2001年,Olsen[68]報(bào)道了親水性陰離子柱在分離小分子藥物上存在的優(yōu)勢(shì)。2003年,Hartmann等[69]比較了親水性陽離子柱與反相柱在分離兩性螺旋狀多肽時(shí)的差異,結(jié)果顯示兩者呈現(xiàn)完全不同的選擇性,且對(duì)溫度變化非常敏感。同年,付紅靖等[70]發(fā)展了親水性強(qiáng)陽離子毛細(xì)管柱,考察了該柱的親水/強(qiáng)陽離子交換保留機(jī)制,并成功分離了9種兩性化合物肽和8種結(jié)構(gòu)差別微小的吡啶化合物。2006年,Ye等[71]通過在硅膠表面鍵合可電離的極性基團(tuán),即利用3-氨基丙基三甲氧基硅烷修飾硅膠基質(zhì)固定相,制備了一種具有親水性弱陰離子交換混合模式的色譜柱。2009年,Lin等[72]制備了親水性陰離子交換毛細(xì)管整體柱,其在分離多肽、酸堿混合物等極性樣品時(shí)有很好的選擇性,并在分離堿性樣品時(shí)不會(huì)出現(xiàn)峰拖尾的現(xiàn)象。

近年來有關(guān)親水性離子交換色譜固定相的保留機(jī)理也是研究的熱點(diǎn)之一。2012年,Dong等[39]研究發(fā)現(xiàn)弱陽離子柱存在親水性與離子交換的混合機(jī)理,為了更好地理解其保留機(jī)理,具體研究了流動(dòng)相中有機(jī)相的比例、鹽濃度的大小對(duì)保留行為的影響,結(jié)果進(jìn)一步證明了混合保留機(jī)理的存在,最后利用弱陽離子柱分別在親水模式、離子交換模式和二者的混合模式下對(duì)5種殼聚糖進(jìn)行了分離,并從保留時(shí)間、分離度、不對(duì)稱度等方面對(duì)分離結(jié)果進(jìn)行了比較,發(fā)現(xiàn)混合模式下的分離結(jié)果更好。2013年,Xu等[40]合成了一種同時(shí)含有伯氨基和叔氨基的混合固定相(見圖3),分別使用核苷化合物、磺胺類化合物和喹諾酮類化合物為探針研究其保留機(jī)理,結(jié)果表明該混合固定相色譜柱存在親水、離子交換的保留機(jī)理。同時(shí)還研究了流動(dòng)相的pH和離子強(qiáng)度對(duì)保留的影響,最后成功地分離了5種核苷類和7種磺胺類化合物。該混合固定相對(duì)多肽、蛋白質(zhì)等復(fù)雜樣品的分離具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

圖3 親水/離子交換混合固定相Fig.3 Hydrophilic/ion-exchange mixed-mode stationary phase

2.4 兩性離子交換混合固定相

離子交換色譜是使用靜電作用對(duì)樣品實(shí)現(xiàn)分離的一種色譜模式。常見的離子交換色譜有4類,即表面鍵合磺酸基的強(qiáng)陽離子色譜、鍵合羧基的弱陽離子色譜、鍵合季氨基的強(qiáng)陰離子色譜和鍵合氨基的弱陰離子色譜。單一機(jī)理的離子交換色譜僅對(duì)陰陽離子中的某一種離子有保留作用,分離選擇性受到很大限制。兩性離子交換固定相是指表面同時(shí)鍵合帶有正負(fù)電荷基團(tuán)的固定相,此固定相可以很好地分離離子化合物和極性化合物[73]。最早合成的兩性離子固定相是將季銨鹽離子和磺酸根離子通過烷基鏈連接而成,帶負(fù)電荷的磺酸基位于固定相外部,帶正電荷的季銨鹽離子位于固定相內(nèi)部,整個(gè)固定相表面帶有微弱的負(fù)電荷。該固定相已被廣泛應(yīng)用于分離硫代葡萄糖苷、多肽、代謝物等復(fù)雜樣品。隨后,Jiang等[74]合成了一種所帶的電荷順序與上述固定相相反的兩性離子固定相,即負(fù)電荷位于固定相內(nèi)部、正電荷位于固定相表面,結(jié)果表明該固定相表面仍顯示微弱的電負(fù)性,證明了固定相表面所示電性與表面電荷分布無直接關(guān)系。由于離子交換色譜的分辨率較反相色譜低,在分離復(fù)雜樣品時(shí)分辨率往往達(dá)不到要求,但離子交換色譜與反相色譜完全正交,這為陰陽離子混合色譜的應(yīng)用開辟了方向。Shen等[41]報(bào)道了一種半胱氨酸鍵合硅膠固定相(見圖4),由于氨基酸是一種兩性化合物,在不同的pH條件下帶有不同程度的正負(fù)電荷,使用該色譜柱與C18柱組成的二維色譜系統(tǒng)在分離蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物中正交性高達(dá)88%。Liang等[42]通過水平聚合的方法將烯基硅烷鍵合到硅膠表面,然后與帶巰基的兩性離子化合物通過巰基點(diǎn)擊反應(yīng)制備出兩性離子固定相,將該固定相用于多肽、果寡糖、生物堿的分離,均取得很好的分離效果。

圖4 兩性離子交換混合固定相Fig.4 Zwitterionic mixed-mode stationary phase

Qiu等[43]將帶正電荷的咪唑鎓鹽與末端帶有磺酸基的碳鏈鍵合到硅膠表面,合成了一種兩性離子交換混合固定相,研究表明該固定相對(duì)陰離子、堿性化合物、維生素和3種咪唑鎓鹽離子液體均具有較好的分離效果。Boersema等[75]使用兩性離子交換混合固定相分離復(fù)雜的多肽混合物,表現(xiàn)出了靜電和極性兩種相互作用;由于離子交換基團(tuán)的存在,當(dāng)pH從3到8變化時(shí),分離結(jié)果發(fā)生了顯著變化。以上研究表明,多肽類生物樣品帶有一定的電荷,在該混合固定相上的分離主要受靜電作用的影響,而流動(dòng)相的pH值是調(diào)節(jié)靜電作用的重要參數(shù),這也為帶電樣品在該混合固定相上的分離提供了重要的參考。

3 三相混合固定相

由于分析物的復(fù)雜性和多樣性,要在一次分析中同時(shí)分離疏水性相近的酸性、堿性、中性的混合物,需要固定相同時(shí)具有陰陽離子交換和疏水的混合保留機(jī)理。

Liu等[44,45]采用靜電驅(qū)動(dòng)自組裝法制備了一種集反相、陰離子、陽離子為一體的三相混合固定相,該填料內(nèi)部鍵合的基團(tuán)提供疏水和陰離子交換保留機(jī)理,外部提供陽離子交換保留機(jī)理,該設(shè)計(jì)確保了反相、陰陽離子交換能同時(shí)發(fā)揮作用。對(duì)離子化合物的分離表明,分離結(jié)果受流動(dòng)相中有機(jī)相比例、pH值、離子強(qiáng)度的影響,而對(duì)中性化合物的分離主要受流動(dòng)相中有機(jī)相的影響。他們應(yīng)用該混合固定相色譜柱成功分離了含酸堿、陰陽離子的10種混合物。Kazarian等[31]也研究了結(jié)構(gòu)相似的3種反相陰陽離子三相混合模式色譜固定相的保留機(jī)理,對(duì)強(qiáng)酸、弱酸、強(qiáng)堿、弱堿以及兩性化合物在混合固定相色譜柱上的保留行為隨流動(dòng)相pH變化的趨勢(shì)進(jìn)行了研究,并將3根色譜柱的分離結(jié)果作了對(duì)比分析,為其應(yīng)用和方法開發(fā)指明了方向。

圖5 三相混合固定相Fig.5 Trimode mixed-mode stationary phase

2014年,Li等[48]合成了一種全新樹枝狀聚合物改性的反相親水性陰離子交換混合固定相(見圖5),該固定相結(jié)合了苯環(huán)、季氨基陽離子和多個(gè)羥基,能提供親水、疏水和陰離子交換3種保留機(jī)理,通過分離一系列的標(biāo)準(zhǔn)品分別驗(yàn)證了混合色譜填料的各保留機(jī)理以及反相離子交換、親水離子交換的混合保留機(jī)理。該固定相在分離多肽蛋白質(zhì)方面具有較好的應(yīng)用前景。

4 結(jié)論與展望

近年來,隨著復(fù)雜樣品分析需求的增加,混合模式色譜固定相已經(jīng)受到越來越多的關(guān)注。與單一機(jī)理的色譜固定相相比,混合固定相具有高選擇性、高負(fù)載量等優(yōu)點(diǎn);與多維色譜相比,混合固定相對(duì)設(shè)備要求低、操作簡單。但由于多重分離機(jī)理的存在,要合理調(diào)控與分配不同的機(jī)理較為困難,導(dǎo)致混合固定相色譜柱的分離結(jié)果的重復(fù)性往往較差。

此外,有關(guān)混合模式固定相及色譜柱評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)尚未統(tǒng)一,繼續(xù)深入考察不同樣品在混合固定相色譜柱上的保留機(jī)理,總結(jié)其保留規(guī)律,形成不同類型混合固定相色譜柱的相對(duì)統(tǒng)一的評(píng)價(jià)方法,對(duì)混合固定相及色譜柱的制備與應(yīng)用具有重要的意義。

混合模式固定相及色譜柱在復(fù)雜樣品分析領(lǐng)域具有廣闊的市場和應(yīng)用前景,隨著對(duì)其保留機(jī)理、應(yīng)用分析及評(píng)價(jià)方法的深入研究,混合固定相色譜會(huì)在分離分析工作中發(fā)揮越來越重要的作用。

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State of art of mixed-mode stationary phase

XU Jiwei1, SUN Yuanshe2, TANG Tao1,2, XIA Mingzhu1, LEI Wu1, WANG Fengyun1, LI Tong2*

(1.NanjingUniversityofScienceandTechnology,Nanjing210094,China; 2.DalianEliteAnalyticalInstrumentsCo.,Ltd.,Dalian116023,China)

With the development of science and technology, more and more complex samples like peptides and proteins need to be separated. It is difficult to separate them by single mode chromatography. Due to the unique separation character of mixed-mode chromatography, the same separation performance can be obtained in mixed-mode chromatography in one separation as multidimensional chromatography. And some disadvantages of multidimensional chromatography can be avoided in mixed-mode chromatography, such as the complexity of the system, the poor compatibility of mobile phases and the long analytical time. More and more attention is devoted to the mixed-mode chromatography in recent years. The focus on the mixed-mode chromatography is to design new structures of mixed-mode stationary phase. At present, mixed-mode stationary phases included reversed-phase/ion-exchange, reversed-phase/hydrophilic, hydrophilic/ion-exchange, zwitterionic and trimode mixed-mode stationary phases. The kinds of mixed-mode stationary phases are summarized and their features and applications in different fields are discussed in this review.

mixed-mode chromatography; reversed-phase/ion-exchange mixed-mode stationary phase; reversed-phase/hydrophilic mixed-mode stationary phase; hydrophilic/ion-exchange mixed-mode stationary phase; zwitterion exchange mixed-mode stationary phase

10.3724/SP.J.1123.2015.06025

國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(51472121);國家重大科學(xué)儀器設(shè)備開發(fā)專項(xiàng)(2012YQ12004401,2012YQ12004403);江蘇省高等學(xué)校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程項(xiàng)目.

2015-06-17

O658

:A

:1000-8713(2015)11-1140-07

特殊選擇性分離介質(zhì)的制備專欄·專論與綜述

*通訊聯(lián)系人.Tel:(0411)84732388,E-mail:tonglii@elitehplc.com.