白 梓 靜

（寶雞文理學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院， 陜西 寶雞 721013）

分析測(cè)試

RP-HPLC同時(shí)測(cè)定婦炎康沖劑中5種成分的含量

白 梓 靜

（寶雞文理學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院， 陜西 寶雞 721013）

建立RP-HPLC同時(shí)測(cè)定婦炎康沖劑中5種成分的含量。采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm× 250 mm, 5μm)色譜柱；以甲醇-水為流動(dòng)相梯度洗脫；流速1.0 mL/min；柱溫26 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮ⅡA、穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯分別在0.506 8 ～360.2、0.291 2～208、0.257 6～184、0.548 8～392、0.344 4～246μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈很好的線性關(guān)系（r=1）；方法平均回收率為98.93%，100.83%，99.38%，100.2%，99.97%。本法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠，可以很好的用于婦炎康沖劑的質(zhì)量控制。

婦炎康沖劑；隱丹參酮；丹參酮I；丹參酮ⅡA；穿心蓮內(nèi)酯；脫水穿心蓮內(nèi)酯；RP-HPLC

婦炎康沖劑主要由延胡索、敗醬草、丹參、穿心蓮、川楝子等11味中藥組成，具有很好的清熱解毒、行氣止痛的功效。該藥物主要用于治療泌尿系統(tǒng)感染、慢性附件炎，盆腔炎以及子宮內(nèi)膜炎等[1]。其中的丹參、穿心蓮在中醫(yī)當(dāng)中有著極其廣泛的應(yīng)用。隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮ⅡA是丹參[2-3]中的主要有效成分，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯是穿心蓮[4-5]中的主要有效成分，本文選中方中主藥丹參、穿心蓮作為質(zhì)量控制指標(biāo)，采用HPLC對(duì)這兩種主藥當(dāng)中的5種有效成分進(jìn)行測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

（1）Agilent 1200 高效液相色譜儀；UV mini-1240 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）；離心機(jī)（北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司）；超聲清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）。

（2）隱丹參酮（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110852-200818）；丹參酮I（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：0687-200512）；丹參酮ⅡA（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110867-200916）；穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110987-200507）；脫水穿心蓮內(nèi)酯（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110518-200604）；色譜甲醇；自制二次蒸餾水；婦炎康沖劑（延安市中醫(yī)醫(yī)院制劑室，陜藥管制字[2001]第3678號(hào)）。

1.2 溶液的制備

1.2.1 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取丹參酮ⅡA，脫水穿心蓮內(nèi)酯（經(jīng)五氧化二磷干燥12 h以上）以及隱丹參酮、丹參酮I、穿心蓮內(nèi)酯分別為18.4，24.6， 36.2，20.8，39.2 mg將其置于同一25 mL量瓶中，加色譜甲醇溶解至刻度，搖勻，備用。

1.2.2 供試品溶液的制備

精密稱取4 g左右的樣品，置于50 mL的量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，先超聲，后離心（取適量溶液離心），時(shí)間分別為40、15 min（離心機(jī)轉(zhuǎn)速為3 000 r·min-1），取上清液，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。

1.2.3 陰性樣品溶液

按處方配比分別稱取除丹參以外的其余藥味，以制備工藝制成相應(yīng)的陰性樣品，按項(xiàng)下方法操作，制成缺丹參陰性樣品溶液。同法制備缺穿心蓮陰性樣品溶液。

1.3 色譜條件

Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流動(dòng)相：水(A)—甲醇（B），梯度洗脫（0～15 min, 41% A; 15～35 min, 18% A; 35～40 min, 41% A）；流速1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；柱溫26 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。對(duì)照品、樣品、陰性對(duì)照品的色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 HPLC圖Fig.1 HPLC

1.4 線性關(guān)系考察

為配置成一系列濃度的對(duì)照品溶液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，首先取上述1.2.1項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液I（濃度分別為：隱丹參酮1.440 8 mg·mL-1；丹參酮I0.832 mg·mL-1；丹參酮ⅡA 0.736 mg·mL-1；穿心蓮內(nèi)酯1.568 mg·mL-1；脫水穿心蓮內(nèi)酯0.984 mg·mL-1）0.5、0.7、1 mL，分別置于10 mL量瓶中，并用甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻。同時(shí)為配置成對(duì)照品混合溶液Ⅴ，需要量取對(duì)照品溶液Ⅲ 1 mL于10 mL量瓶中。將上述配置好的I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ溶液各20 μL，注入色譜儀，記錄色譜圖。以對(duì)照品 X為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，分別得到5種有效成分的回歸方程為：隱丹參酮： Y=3786.5X－7.0127，R2=0.9999（線性范圍0.5068 ～360.2μg·mL-1）；丹參酮I：Y=13046X＋30.12，R2=0.9999（線性范圍0.2912～208 μg·mL-1）；丹參酮ⅡA： Y=9015.7X＋26.172，R2=0.9999（線性范圍0.2576～184 μg·mL-1）；穿心蓮內(nèi)酯： Y=4927.4X－2.0146，R2=0.9999（線性范圍0.5488～392μ g·mL-1）；脫水穿心蓮內(nèi)酯：Y=11017X－5.9751，R2=0.9999（線性范圍0.3444～246 μg·mL-1），說(shuō)明線性關(guān)系良好。

1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，采用上述色譜條件，每隔2 h依次進(jìn)樣，記錄色譜圖及峰面積，得到峰面積的RSD分別為1.02%，1.46%，1.55%，1.30%，0.98%。

1.6 重復(fù)性試驗(yàn)

按照項(xiàng)下1.2.2，平行制備供試品溶液5份，依次進(jìn)樣分析，5種成分的含量平均值為0.084 15，0.012 49，0.008 26，0.160 4，0.035 17 mg·g-1，RSD分別為1.31%，1.39%，1.44%，1.17%，0.88%。

1.7 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品混合溶液，用上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，RSD分別為1.02%，0.67%，0.44%，0.86%，0.76%。

1.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品（約2 g）共5份，置具塞錐形瓶中，精密加入對(duì)照品溶液，揮干溶劑，按1.2.2項(xiàng)下操作，按外標(biāo)峰面積法計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1。

1.9 樣品測(cè)定

取3個(gè)批次的樣品，按1.2.2項(xiàng)下過(guò)程制備樣品溶液。將每份樣品分別進(jìn)樣5次，記錄色譜圖及峰面積，取平均值，計(jì)算并比較RSD，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Results of recovery experiment

表2 5種成分的含量測(cè)定結(jié)果（n=5）Table 2 Results of content determination of cryptotanshinone, tanshinone Iand tanshinone ⅡA, andrographolide and dehydroandrographolide(n=5)

2 討 論

2.1 流動(dòng)相的選擇

在預(yù)實(shí)驗(yàn)中分別選擇了甲醇-0.2%的冰醋酸，甲醇-0.3%冰醋酸，甲醇-水作為流動(dòng)相進(jìn)樣，最后根據(jù)峰形和理論塔板數(shù)，選擇了甲醇-水作為系統(tǒng)的流動(dòng)相。

2.2 超聲時(shí)間的選擇

在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，分別選取20、40、60 min，對(duì)不同時(shí)間超聲后的樣品依次進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，超聲40 min 時(shí)測(cè)得的樣品面積最大。故選擇40 min作為超聲時(shí)間。

2.3 離心時(shí)間的選擇

樣品通過(guò)離心10、15、20 min處理后，依次進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果顯示15 min和20 min時(shí)的峰面積相差不大。故選擇時(shí)間稍短的15 min作為離心時(shí)間。

［1］劉延紅, 陳永峰, 張迎. 婦炎康沖劑的制備及其主藥的定性鑒別［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生, 2007, 23(7): 1086-1087.

［2］趙鳴舒, 趙希賢. 雙波長(zhǎng)高效液相色譜法測(cè)定丹參中多種成分的含量［J］. 中國(guó)藥事，2010,24（8）：804-806.

［3］姚琳, 程維明 . 采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中的多成分含量［J］. 上海醫(yī)藥，2011, 32（8）：413-415.

［4］徐嵬, 楊秀偉. HPLC測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯原料藥的含量［J］. 中國(guó)中藥雜志，2010，35(16): 2113-2115.

［5］林朝展, 鄧貴華, 祝晨蔯. HPLC同時(shí)測(cè)定穿心蓮藥材及其制劑中的6種內(nèi)酯類成分［J］. 華西藥學(xué)雜志，2011, 26(1): 67-70.

RP-HPLC Simultaneous Determination of Andrographolide, Dehydroandrographolide, Cryptotanshinone, TanshinoneIand TanshinoneⅡA in Fuyankang Granules

BAI Zi-jing
（College of Chem. & Chem. Eng. Baoji University of Arts & Sciences，Shaanxi Baoji 721013，China）

A RP-HPLC method for simultaneous determination of cryptotanshinone, tanshinone Iand tanshinone ⅡA, andrographolide and dehydroandrographolide in Fuyankang granules was developed . The analysis was performed on a C18(250 mm×4.6 mm,5μm) column.The mobile phase was composed of methamol and water in gradient elution mode with at a flow rate of 1.0 ml/min.The column temperature was 26 ℃ and the UV detection wavelength was 254 nm. The results show that, the linear ranges of cryptotanshinone, tanshinone I，tanshinone ⅡA , andrographolide and dehydroandrographolide are 0.506 8 ～360.2,0.291 2～208,0.257 6～184,0.548 8～392,0.344 4～246 μg·mL-1(r=1), respectively.The average recoveries (n=5) of cryptotanshinone, tanshinone I，tanshinone ⅡA , andrographolide and dehydroandrographolide are 98.93%，100.83%，99.38%，100.2% and 99.97%, respectively. The method is convenient and accurate.It can be used for quality control in production of Fuyankang granules.

Fuyankang granules; Cryptotanshinone; TanshinoneI; Tanshinone ⅡA ; Andrographolide; Dehydroandrographolide; RP-HPLC

O 657

： A

： 1671-0460（2015）02-0426-03

2014-09-09

白梓靜（1989-），女，陜西延安人，助教，碩士，研究方向：藥物分析。E-mail：bzj927@126.com。