余志剛楊曉茂程培秀周小力李 建張 彬

（1.四川省雅安市人民醫(yī)院，四川 雅安 625000；2.四川省雅安市食品藥品檢驗(yàn)所，四川 雅安625000；3.雅安三九藥業(yè)有限公司，四川 雅安 625000）

·研究報(bào)告·

HPLC法測(cè)定活血益腎散中丹參酮ⅡA的含量*

余志剛1楊曉茂1程培秀2△周小力2李 建2張 彬3

（1.四川省雅安市人民醫(yī)院，四川 雅安 625000；2.四川省雅安市食品藥品檢驗(yàn)所，四川 雅安625000；3.雅安三九藥業(yè)有限公司，四川 雅安 625000）

目的建立HPLC法測(cè)定活血益腎散中丹參酮ⅡA含量。方法采用反相HPLC法，色譜柱為Phenomenex Gamini-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-水（85∶15），檢測(cè)波長(zhǎng)為 270 nm，流速1.0 mL/min，柱溫35℃。結(jié)果丹參酮ⅡA進(jìn)樣量在0.09168～1.146 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r= 0.99999），平均加樣回收率為97.07%，RSD=1.69%（n=6）。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于活血益腎散中丹參酮ⅡA的含量測(cè)定。

活血益腎散 丹參酮Ⅱ A HPLC

活血益腎散為四川省雅安市人民醫(yī)院院內(nèi)制劑，由丹參等藥組成，具有活血止痛、養(yǎng)血強(qiáng)筋等功效，臨床用于血虛失養(yǎng)引起的股骨頭壞死癥。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)均為一般鑒別反應(yīng)，專屬性差，無含量測(cè)定項(xiàng)，為控制本品質(zhì)量，確保療效和安全性，結(jié)合該制劑的組分特點(diǎn)，丹參為該制劑主藥，而丹參的有效成分為丹參酮ⅡA，筆者參照有關(guān)文獻(xiàn)［1-10］，建立了丹參酮ⅡA含量測(cè)定的高效液相色譜法。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與試藥

美國(guó)Agilent 1260型高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器；AS5150A型超聲波清洗器 （天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；BP211D電子天平 （德國(guó)賽多利斯公司）；UPT-Ⅱ-10T超純水機(jī)（成都超純科技有限公司）。丹參酮ⅡA對(duì)照品（來源：中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110766-200518）；樣品及陰性樣品為我院制劑室提供（批號(hào)：20090504、20090601、20090602）。甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：phenomenex Gamini-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流動(dòng)相為甲醇∶水（85∶15）。流速：1.0 mL/min。柱溫：35℃。檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm。進(jìn)樣量：10 μL。理論塔板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計(jì)不低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12 h的丹參酮ⅡA對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇制成40 μg/mL的溶液 （精密稱取丹參酮ⅡA 11.46 mg制成45.84 μg/mL的對(duì)照品溶液）。

2.3 供試品溶液的制備 取樣品約3 g，精密稱定，置于塞棕色瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)充減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，得供試品溶液；按處方比例制備不含丹參的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2.4 專屬性試驗(yàn) 取2.3項(xiàng)下的3種溶液，按擬定的色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。從圖中可見，供試品溶液色譜在與丹參酮ⅡA對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間有一致的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取丹參酮ⅡA對(duì)照品（45.84 μg/mL）溶液2、5、8、10、15、25 μL，依次進(jìn)樣，記錄峰面積。以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=6.10591X-14.66637，r=0.99999（n=6）。結(jié)果表明，丹參酮ⅡA進(jìn)樣量在0.09168～1.146 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取丹參酮ⅡA對(duì)照品（45.84 μg/mL）溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.5%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性考察 取同一供試品溶液，室溫下放置，精密吸取10 μL，每隔2 h測(cè)定1次，20 h內(nèi)共測(cè)10次，測(cè)定其峰面積，RSD為1.8%。結(jié)果表明供試品溶液在20 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品6份，制備供試品溶液，進(jìn)樣，分析，結(jié)果樣品峰面積的RSD為0.4%，表明本試驗(yàn)條件下重現(xiàn)性較好。

2.9 回收率試驗(yàn) 見表1。取已知含量供樣品（含量為0.28mg/g）6份，分別精密加入對(duì)照品溶液（0.2292mg/mL）5 mL，置水浴上揮干，再按2.3項(xiàng)下方法制備溶液。

2.10 樣品含量測(cè)定 取樣品3批，測(cè)定其含量。結(jié)果分別為0.28、0.27、0.29 mg/g。

3 討 論

取對(duì)照品溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)進(jìn)行紫外掃描，最大吸收在270 nm處。

提取方法及時(shí)間確定：分別考察了超聲20、30、 40、60 min的提取效率和回流30、60 min的提取效率，結(jié)果超聲20 min和回流提取30 min時(shí)還未完提取完全，而超聲30、40、60 min提取率與回流60 min無明顯差別，考慮實(shí)驗(yàn)的方便性，故確定其提取方法及時(shí)間為超聲30 min。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

流動(dòng)相比例的確定：對(duì)流動(dòng)相甲醇與水的不同比例進(jìn)行了考察，結(jié)果以甲醇∶水（85∶15）為最佳，基線平穩(wěn)，丹參酮ⅡA的色譜峰與雜質(zhì)峰分離最好，峰形最好。

對(duì)照品及樣品貯存條件：由于丹參酮類見光不穩(wěn)定，因此樣品及對(duì)照品應(yīng)貯存于棕色瓶中。

本文建立了HPLC法測(cè)定活血益腎散中丹參酮ⅡA的含量，該方法簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，回收率高，可用于提高該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：71，905.

［2］ 段喜云.HPLC法測(cè)定溶栓通脈膠囊中丹參酮ⅡA的含量［J］.中國(guó)中醫(yī)藥咨訊，2010，2（15）：252.

［3］ 圖雅，張貴軍.HPLC法測(cè)定通脈靈片中丹參酮ⅡA的含量［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，32（3）：253-254.

［4］ 劉明海.高效液相色譜法測(cè)定活血通脈片丹參酮ⅡA的含量［J］.浙江中醫(yī)雜志，2012，47（5）：383.

［5］ 黃瑋.HPLC法測(cè)定活血效靈丸中丹參酮ⅡA的含量［J］.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2008，22（2）：50-51.

［6］ 湯迎爽，康阿龍，宋紅儒.HPLC法測(cè)定心脈樂片中丹參酮ⅡA的含量［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，18（9）：97.

［7］ 呂高明，張靜.高效液相色譜法測(cè)定活血通脈膠囊中丹參酮ⅡA的含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2013，22（6）：59-60.

［8］ 張靜宇，李冬梅.高效液相色譜法測(cè)定抗栓膠囊中丹參酮ⅡA的含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2008，17（15）：31-32.

［9］ 牛曉鋼，趙玉梅.高效液相色譜法測(cè)定丹參通脈膠囊中丹參酮ⅡA的含量［J］.河南中醫(yī)藥學(xué)刊，2002，17（1）：16-17.

［10］豐艷梅，馬小亞.HPLC法測(cè)定頸康寧膠囊中丹參酮ⅡA的含量［J］.西北藥學(xué)雜志，2008，23（1）：10-11.

Determination of Tanshinone IIA Content in Huoxue Powder by HPLC

YU Zhigang，YANG Xiaomao，CHENG Peixiu，et al. Ya’an People’Hospital，SiChuan Province，Sichuan，Ya’an 625000，China

Objective：To establish a method for determining tanshinone IIA content in huoxueyishen powder by HPLC.Method：Tanshinone IIA was analysed by using Phenomenex Gamini-C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）with the mobile phase of methanol-water（85∶15）at the flow rate was 1.0 mL/min，and the detection wavelength was 270 nm，column temperature was 35℃.Result：The linear regression equation of tanshinone IIA was from 0.09168 μg to 1.146 μg，the average recoveries were 97.07%with RSD of 1.69%（n=6）.Conclusion：The method is simple，reliable and accurate，and can be used for the determination of tanshinone IIA content in huoxueyishen powder.

Huoxueyishen powder；Tanshinone IIA；HPLC

R289.5

A

1004-745X（2015）06-0988-02

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.06.017

2015-01-21）

四川省雅安市中西醫(yī)結(jié)合重點(diǎn)建設(shè)?？?/p>

△通信作者（電子郵箱：cheng-cheng2004＠163.com）