黃國(guó)全，黎 暉，張才全，吳泉峰，孫建華

1.湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院胃腸外科，湖北 恩施 445000；

2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科，重慶 400016

CDC4及c-Myc在胃癌中的表達(dá)及臨床意義

黃國(guó)全1，黎 暉2，張才全2，吳泉峰1，孫建華1

1.湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院胃腸外科，湖北 恩施 445000；

2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科，重慶 400016

背景與目的：胃癌是全世界多發(fā)惡性腫瘤之一，其死亡率及術(shù)后復(fù)發(fā)率高。目前治療胃癌的手段主要是手術(shù)及放化療，但總體效果欠佳。隨著經(jīng)濟(jì)及分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，胃癌的早期診斷及分子靶向治療成為全世界研究的熱點(diǎn)。胃癌的發(fā)生、發(fā)展與抑癌基因的失活和癌基因的過(guò)表達(dá)相關(guān)。CDC4/Fbχw7為重要的抑癌基因。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究CDC4(F框/WD-40域蛋白7，也稱為FBXW7、Sel-10、Ago)及c-Myc蛋白在人胃癌組織中的表達(dá)，分析兩者與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。方法：應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(semiquantitative reverse transcription polymerase chain reaction，sRT-PCR)、免疫組化及蛋白［質(zhì)］印跡法(Western blot)檢測(cè)40例胃癌組織、癌旁組織及正常胃黏膜組織中CDC4、c-Myc的mRNA及蛋白的表達(dá)，并分析兩者之間的相關(guān)性及與患者病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果：胃癌中CDC4蛋白的表達(dá)明顯低于癌旁組織及正常組織(P<0.05)。而c-Myc蛋白的表達(dá)在胃癌中顯著增高，陽(yáng)性率同癌旁組織及正常組織比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CDC4、c-Myc蛋白及其mRNA的表達(dá)與胃癌患者的性別、年齡、腫瘤部位無(wú)關(guān)，而與腫瘤浸潤(rùn)深度、分化程度、TNM分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。CDC4和c-Myc在mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論：CDC4在胃癌中表達(dá)量顯著下降，可能與胃癌的浸潤(rùn)、分化及轉(zhuǎn)移相關(guān)，其表達(dá)缺失可能導(dǎo)致c-Myc的過(guò)度表達(dá)。CDC4可能成為早期診斷、判斷胃癌預(yù)后及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的生物學(xué)指標(biāo)。

CDC4；c-Myc；免疫組化；半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)；蛋白［質(zhì)］印跡法

胃癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率居各種惡性腫瘤之首［1-2］，5年生存率僅為5%～15%［3］。CDC4(F框/WD-40域蛋白7，也稱為FBXW7、Sel-10、Ago)是F-box蛋白家族成員，其基因在多種腫瘤中均有突變，表現(xiàn)為不同程度的缺失［4-8］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)CDC4、c-Myc蛋白的表達(dá)，探討其與胃癌臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 病理資料

收集重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科2010年10月—2011年9月確診為胃癌的臨床手術(shù)標(biāo)本40例。所有患者術(shù)前均未行過(guò)放化療，其中男性26例，女性14例，年齡38～78歲，平均年齡59.7歲。每例標(biāo)本均收取癌組織、癌旁組織(距腫瘤邊緣1.5～2.0 cm)及正常胃黏膜組織(距腫瘤邊緣≥6 cm)。標(biāo)本離體后迅速將每例標(biāo)本分為3份，兩份放入液氮中保存，供半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，sRTPCR)及蛋白［質(zhì)］印跡法(Western blot)檢測(cè)，余下的用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋后供免疫組化檢測(cè)。所有病例的臨床資料完整。

1.2 主要試劑

鼠抗人CDC4單克隆抗體(ab74054)購(gòu)自武漢艾美捷科技有限公司，兔抗人c-Myc多克隆抗體(bs-0842R)購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，免疫組化試劑盒CW2035和CW2068均購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L)購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，SDS-PAGE凝膠配制試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，蛋白提取試劑盒購(gòu)自上海貝博生物試劑公司，RNA裂解液TRIzol購(gòu)自上海貝博生物試劑公司，擴(kuò)增試劑盒購(gòu)自Fermentas中國(guó)公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 sRT-PCR檢測(cè)胃癌組織中CDC4和c-Myc mRNA的表達(dá)

根據(jù)總RNA抽提試劑盒說(shuō)明書(shū)提取胃癌組織總RNA，將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增引物由生工生物工程(上海)股份有限公司設(shè)計(jì)合成。c-Myc基因擴(kuò)增上游引物為5’-GACAGCAGCTCGCCCAAGT-3’，下游引物為5’-CTCCAGCAGAAGGTGATCCAG-3’，產(chǎn)物長(zhǎng)度為253 bp。CDC4基因擴(kuò)增上游引物為5’-GTGGGACATACAGGTGGA-3’，下游引物為5’-CAACGCACAGTGGAAGTA-3’，產(chǎn)物長(zhǎng)度為146 bp。內(nèi)參GAPDH基因擴(kuò)增上游引物為5’-AAATCCCATCACCATCTTCCAG-3’，下游引物為5’-TGAGTCCTTCCACGAT ACCAAA-3’，產(chǎn)物長(zhǎng)度為310 bp。擴(kuò)增條件：94 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性10 s，57 ℃退火20 s，72 ℃延伸40 s，共40個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增后取擴(kuò)增產(chǎn)物各3 μL在1.5%瓊脂糖凝膠電泳儀上鑒定，用Bio-Rad凝膠成像儀顯像，并用Quantityone軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.3.2 Western blot檢測(cè)胃癌組織中CDC4及c-Myc蛋白的表達(dá)

按試劑盒說(shuō)明書(shū)提取上述胃癌標(biāo)本的總蛋白，測(cè)定蛋白濃度后加入5×蛋白上樣緩沖液煮沸5 min。配制5%濃縮膠和10%分離膠行SDS-PAGE凝膠電泳，根據(jù)蛋白Maker切膠并轉(zhuǎn)移蛋白到PVDF膜上，5%脫脂奶粉封閉2 h，溫育一抗(稀釋比例均為1∶100)，4 ℃過(guò)夜，并以GAPDH做內(nèi)對(duì)照。PBST洗膜3次，每次10 min。溫育二抗1 h后再用PBST洗膜3次，每次10 min。采用ECL顯影試劑進(jìn)行顯影，Bio-Rad凝膠成像儀顯像，并用Quantity-one軟件對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行分析。

1.3.3 免疫組化檢測(cè)胃癌組織中CDC4及c-Myc蛋白的表達(dá)

按免疫組化SP法操作說(shuō)明書(shū)檢測(cè)CDC4和c-Myc蛋白的表達(dá)。胃癌組織經(jīng)4%多聚甲醛固定，石蠟包埋后，4 μm連續(xù)切片。將切片經(jīng)二甲苯中脫蠟、乙醇梯度水化、阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶、抗原修復(fù)、正常山羊血清封閉后，滴加一抗(均為1∶100稀釋)，4 ℃過(guò)夜，再加入生物素化的二抗(37 ℃，30 min)，滴加辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素，DAB顯色，鏡下觀察至出現(xiàn)黃色終止反應(yīng)，蘇木精復(fù)染，中性樹(shù)膠封片后顯微鏡下采集圖片。

所有免疫組化結(jié)果至少由2位未參與實(shí)驗(yàn)研究的病理科醫(yī)生分別獨(dú)立以盲法觀察確定來(lái)計(jì)算細(xì)胞總數(shù)和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。若遇結(jié)果不一致時(shí)，則由2人商議做出決定。以細(xì)胞核和(或)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，按照Beesley分級(jí)法［9］，以陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比和著色強(qiáng)度進(jìn)行分級(jí)：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于10%為陰性(-)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%～25%為弱陽(yáng)性(+)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25%～50%為陽(yáng)性(++)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于50%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 胃癌組織中CDC4和c-Myc的mRNA表達(dá)

本研究采用sRT-PCR法檢測(cè)40例胃癌組織中CDC4及c-Myc的mRNA的表達(dá)。CDC4及c-Myc的mRNA在人胃癌組織、癌旁組織及正常組織的表達(dá)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖1)。

CDC4 mRNA在胃癌組織中的表達(dá)水平較癌旁組織及正常胃黏膜中顯著降低(P<0.05)。c-Myc mRNA在胃癌中的表達(dá)水平較癌旁組織及正常胃黏膜中則是明顯升高(P<0.05)。隨著腫瘤的分化程度的降低，TNM分期、浸潤(rùn)深度的增加，CDC4 mRNA的表達(dá)有顯著下降趨勢(shì)(P<0.05)；而c-Myc mRNA的表達(dá)隨著腫瘤的分化程度的降低，TNM分期、浸潤(rùn)深度的增加而顯著升高(P<0.05)。CDC4 mRNA和c-Myc mRNA的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤的部位及淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(表1)。

2.2 胃癌組織中CDC4及c-Myc 蛋白的表達(dá)

選取所收集的40例胃癌組織標(biāo)本中的6例胃癌組織標(biāo)本及對(duì)應(yīng)的癌旁正常組織，同時(shí)從重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院標(biāo)本庫(kù)中選取6例胃正常黏膜組織標(biāo)本均行Western blot檢測(cè)CDC4的蛋白表達(dá)情況。采用Western blot法檢測(cè)人胃癌組織、癌旁組織及正常組織中CDC4及c-Myc的蛋白的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CDC4及c-Myc在胃癌組織、癌旁組織及正常組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖2，表2)。

圖1 RT-PCR法檢測(cè)CDC4、c-Myc mRNA 的表達(dá)Tab. 1 The expressions of CDC4 mRNA and c-Myc mRNA detected by RT-PCR

表1 CDC4 mRNA和 c-Myc mRNA的表達(dá)與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系Tab. 1 The correlation between the mRNA expression of CDC4, c-Myc and clinical pathological parameters in gastric cancer (±s)

表1 CDC4 mRNA和 c-Myc mRNA的表達(dá)與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系Tab. 1 The correlation between the mRNA expression of CDC4, c-Myc and clinical pathological parameters in gastric cancer (±s)

*: P<0.05, compared with corresponding group

Group n CDC4 mRNA t value c-Myc mRNA t value Gender Male 26 0.758 0±0.062 8 0.790 0.894 2±0.095 8 0.302 Female 14 0.837 0±0.070 0 0.847 8±0.109 0 Age/year <60 19 0.830 1± 0.078 2 0.888 0.793 5±0.064 7 1.114≥60 21 0.745 4±0.056 7 0.954 4±0.124 1 Tumor location Cardiac and gastric body 22 0.757 6±0.064 5 0.6494 0.889 9±0.114 1 0.180 Gastric antrum 18 0.820 0±0.071 2 0.863 3±0.083 4 TNM stagingⅠ-Ⅱ 13 0.965 6±0.087 9 2.863* 0.569 4±0.060 6 3.320*Ⅲ-Ⅳ 27 0.699 0±0.048 9 1.027 0±0.090 5 Differentiation Well and moderate 14 0.649 3±0.055 9 2.210* 1.071 0±0.173 8 2.084* Poor 16 0.859 1±0.062 5 0.758 6±0.059 1 Invasion depth 1.038 0±0.179 1 2.095* 0.431 0±0.044 1 2.486* T3-4 35 0.749 6±0.045 9 0.941 8±0.076 5 Lymph node metastasis Yes 28 0.667 6±0.046 2 0.381 0.960 0±0.060 0 1.647 No 12 0.636 6±0.060 7 1.130 0±0.072 3 T1-25

40例胃癌組織中CDC4的陽(yáng)性表達(dá)率為52.5%；在癌旁組織及正常組織中分別為42.5%和70.0%。c-Myc在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為60.0%，在癌旁組織及正常胃黏膜組織中分別為45.0%和27.5%。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表明：與癌旁組織及正常組織相比，CDC4在胃癌組織中的表達(dá)明顯下降，而c-Myc則顯著增高(表3，圖3)。

CDC4蛋白的表達(dá)在胃癌組織較癌旁組織及正常組織顯著增高，c-Myc蛋白在胃癌組織中的表達(dá)較癌旁組織及正常胃黏膜組織則明顯降低；隨著腫瘤分化程度的降低、TNM分期的增加、腫瘤浸潤(rùn)深度越深，CDC4蛋白的表達(dá)顯著下降(P<0.05)。而c-Myc蛋白的表達(dá)隨著腫瘤分化程度的降低、TNM分期的增加、腫瘤浸潤(rùn)深度越深而顯著升高(P<0.05)，并且兩種蛋白的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤的部位及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均無(wú)關(guān)。CDC4與c-Myc在mRNA水平(r2=0.101 3，P=0.042 5)和蛋白水平(r2=0.822 2，P=0.012 6)的表達(dá)也呈負(fù)性相關(guān)(圖4，表4)。

圖2 Western blot檢測(cè)CDC4、c-Myc表達(dá)結(jié)果Fig. 2 CDC4 and c-Myc protein expressions detected by Western blot

表2 CDC4和c-Myc蛋白在胃癌組織、癌旁組織及正常黏膜組織中的表達(dá)Tab. 2 Protein expressions of CDC4 and c-Myc in gastric cancer tissues, adjacent mucosa tissues and normal mucosa tissues

表3 CDC4和c-Myc蛋白在胃癌組織、癌旁組織及正常黏膜組織中的表達(dá)Tab. 3 The protein expressions of CDC4 and c-Myc in gastric cancer tissues, adjacent mucosa tissues and normal mucosa tissues

圖3 胃癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織中CDC4和c-Myc的表達(dá)Fig. 3 The protein expressions of CDC4 and c-Myc in gastric cancer tissues, adjacent mucosa tissues and normal mucosa tissues (DAB, ×400)

圖4 CDC4與c-Myc在mRNA水平和蛋白水平的相關(guān)性表達(dá)Fig. 4 The correlation of CDC4 and c-Myc in mRNA level and protein level

表4 CDC4和c-Myc蛋白水平的表達(dá)與胃癌臨床病理特征之間的聯(lián)系Tab. 4 The correlation between the protein expressions of CDC4 and c-Myc and clinical pathological parameters in gastric cancer

3 討 論

胃癌為世界范圍內(nèi)第四常見(jiàn)的癌癥，超過(guò)70%的病例出現(xiàn)在發(fā)展中國(guó)家。胃癌的危險(xiǎn)因素包括幽門螺桿菌感染、吸煙、高鹽飲食及腌制食品，并有1%～3%的胃癌與遺傳性易感綜合征有關(guān)。人類抑癌基因CDC4定位于4q31.2，長(zhǎng)約200 kb。CDC4蛋白是F-box蛋白家族成員，并且是SCF(SKP1-CUL1-F-box)型泛素連接酶的靶蛋白識(shí)別組分。CDC4作用的許多底物均為癌基因，如cyclin E、c-Myc、c-Jun和Notch基因通路等［10-11］，它們?cè)诩?xì)胞生物學(xué)中具有非常重要地位。前已有研究［12］證明，CDC4能促使cyclin E、c-Myc和c-Jun等癌基因表達(dá)產(chǎn)物的降解。另有研究［13］表明，CDC4的表達(dá)缺失會(huì)導(dǎo)致cyclin E、c-Myc及Aurora-A等蛋白質(zhì)大量蓄積，從而加快了癌細(xì)胞的增殖。國(guó)外已有文獻(xiàn)報(bào)道［14］，在胃癌組織中，CDC4的低表達(dá)與腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良等有關(guān)。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：CDC4在胃癌組織中的低表達(dá)與胃癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，即胃癌分化程度越低、分期越晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量越多，則CDC4的陽(yáng)性表達(dá)率越低。這說(shuō)明CDC4的表達(dá)可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的過(guò)程中起重要作用。

c-Myc是MYC家族成員之一。該家族屬核蛋白類，其編碼產(chǎn)物可與核內(nèi)DNA特異性結(jié)合，在細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)化成功能蛋白。已知的MYC家族至少有3個(gè)成員：c-Myc、n-Myc和l-Myc。其中c-Myc的作用是三者中最強(qiáng)的，可促進(jìn)細(xì)胞增殖、永生化、去分化和轉(zhuǎn)化等，在多種腫瘤形成過(guò)程中處于重要地位［15］。c-Myc基因既是一種可易位基因，又是一種多種物質(zhì)調(diào)節(jié)的可調(diào)節(jié)基因，也是一種可使細(xì)胞無(wú)限增殖，獲永生化功能，促進(jìn)細(xì)胞分裂的基因。已有研究表明［16-17］，c-Myc是CDC4泛素化修飾的重要底物，CDC4的表達(dá)缺失可以導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)c-Myc蛋白的顯著增加，而CDC4的過(guò)表達(dá)則可促使c-Myc泛素化修飾和蛋白降解。本實(shí)驗(yàn)顯示，c-Myc蛋白和mRNA的表達(dá)在胃癌組織、癌旁組織及正常組織中的表達(dá)情況差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這與林靜等［18］的研究結(jié)果一致。c-Myc的表達(dá)與胃癌的分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，即組織分化程度越低、分期越晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越多，則c-Myc表達(dá)的陽(yáng)性率就越高。這說(shuō)明其表達(dá)越高，預(yù)示胃癌的惡性程度越高，浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力也越強(qiáng)。

c-Myc和cyclin E均是細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)因子，他們含量的下降可以引起細(xì)胞退出細(xì)胞周期，而CDC4的表達(dá)缺失增加了這兩種因子的蛋白含量，從而促使細(xì)胞周期的重新進(jìn)入，這是CDC4基因突變?cè)斐砂┌Y發(fā)生的重要原因之一。在我們的前期研究中發(fā)現(xiàn)［19］，CDC4和cyclin E在胃癌組織中mRNA的表達(dá)呈負(fù)性相關(guān)，通過(guò)負(fù)性調(diào)節(jié)cyclin E可達(dá)到抑制胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述，CDC4同c-Myc與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。聯(lián)合檢測(cè)CDC4和c-Myc有助于診斷胃癌、評(píng)價(jià)胃癌的惡性程度、轉(zhuǎn)移能力及預(yù)后判斷，CDC4可能成為將來(lái)胃癌診斷的又一新的重要生物學(xué)指標(biāo)和胃癌靶基因治療的新靶點(diǎn)。

［1］ JEMAL A, SIEGEL R, WARD E, et al. Cancer statistics, 2007［J］. CA Cancer J Clin, 2007, 57(1): 43-66.

［2］ PARKIN D M, BRAY F, FERLAY J, et al. Global cancer statistics, 2002［J］. CA Cancer J Clin, 2005, 55(2): 74-108.

［3］ BERARDI R, SCARTOZZI M, ROMAGNOLI E, et al. Gastric cancer treatment: a systematic review［J］. Oncol Rep, 2004, 11(4): 911-916.

［4］ MOBERG K H, BELL D W, WAHRER D C, et al. Archipelago regulates cyclin E levels in Drosophila and is mutated in human cancer cell lines［J］. Nature, 2001, 413(6853): 311-316.

［5］ STROHMAIER H, SPRUCK C H, KAISER P, et al. Human F-box protein hCdc4 targets cyclin E for proteolysis and is mutated in a breast cancer cell line［J］. Nature, 2001, 413(6853): 316-322.

［6］ EKHOLM-REED S, SPRUCK C H, SANGFELT O, et al. Mutation of hCDC4 leads to cell cycle deregulation of cyclin E in cancer［J］. Cancer Res, 2004, 64(3): 795-800.

［7］ CASSIA R, MORENO-BUENO G, RODRIGUEZ-PERALES S, et al. Cyclin E gene (CCNE) amplification and hCDC4 mutations in endometrial carcinoma［J］. J Pathol, 2003, 201(4): 589-595.

［8］ RAJAGOPALAN H, JALLEPALLI P V, RAGO C, et al. Inactivation of hCDC4 can cause chromosomal instability［J］. Nature, 2004, 428(6978): 77-81.

［9］ BEESLEY M F, MCLAREN K M. Cytokeratin 19 and galectin-3 immunohistochemisty in the differential diagnosis of solitary thyroid nodules［J］. Histopathology, 2002, 41(3): 236-243.

［10］ MILNE A N, LEGUIT R, CORVER W E, et al. Loss of CDC4/ FBXW7 in gastric carinoma ［J］. Cell Oncol, 2013, 32(5-6): 347-359.

［11］ BABAEI-JADIDI R, LI N, SAADEDDIN A, et al. FBXW7 influences murine intestinal homeostasis and cancer, targeting Notch, Jun, and DEK for degradation［J］. J Exp Med, 2011, 208(2): 295-312.

［12］ NAKAYAMA K I, NAKAYAMA K. Ubiquitin ligases: cellcycle control and cancer［J］. Nat Rev Cancer, 2006, 6(5): 369-381.

［13］ FUJII Y, YADA M, NISHIYAMA M, et al. Fbxw7 contributes to tumor suppression by targeting multiple proteins for ubiquitin-dependent degradation［J］. Cancer Sci, 2006, 97(8): 729-736.

［14］ YOKOBORI T, MIMORI K, IWATSUKI M, et al. P53-altered FBXW7 expression determines poor prognosis in gastric cancer cases［J］. Cancer Res, 2009, 69(9): 3788-3794.

［15］ COLLINS S, GROUDINE M. Amplification of endogenous myc-related DNA sequences in a human myeloid leukaemia cell line［J］. Nature, 1982, 298(5875): 679-681.

［16］ WELCKER M A, ORIAN A, GRIM J E. A nucleolar isoform of the Fbw7 ubiquitin ligase regulates c-Myc and cell size［J］. Curr Biol, 2004, 14(20): 1852-1857.

［17］ YADA M, HATAKEYAMA S, KAMURA T, et al. Phosphorylation-dependent degradation of c-Myc is mediated by the F-box protein Fbw7［J］. EMBO J, 2004, 23(10): 2116-2125.

［18］ 林 靜, 項(xiàng)鋒鋼, 楊文榮, 等. PTTG、c-Myc及Ki67在胃癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究［J］. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志, 2007, 16(6): 528-531.

［19］ 黃國(guó)全, 張才全, 彭小超, 等. 胃癌中CDC4及cyclin E的表達(dá)及臨床意義［J］. 生命科學(xué)研究, 2011, 15(4): 339-344.

The expressions of CDC4 and c-Myc in gastric cancer and their clinical signifieance

HUANG Guoquan1, LI Hui2, ZHANG Caiquan2, WU Quanfeng1, SUN Jianhua1 (1.Gastrointestinal Surgery, the Central Hospital of Enshi Autonomous Prefecture, Enshi 445000, Hubei Province, China; 2. Department of Gastrointestinal Surgery, the First Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China)

ZHANG Caiquan E-mail: zhangyu0323@21cn.com

Background and purpose:The gastric cancer is the highest incidence of malignant tumors in the world. The main treatment methods for gastric cancer are operation and chemotherapy. But the effect is not good. With the rapid development of economy and molecular biology, early diagnosis and molecular targeted therapy for gastric cancer has become a research hotspot. The oncogene overexpression and the anti-oncogene lower expression are closely related with gastric cancer. CDC4/FBXW7 is an anti-oncogene, but c-Myc is an oncogene. The previous research showed that CDC4 affected the expression of many oncogenes, such as Cyclin E. This study aimed to investigate the expression of CDC4 and c-Myc in gastric cancer and to elucidate the potential relationship between their expressions and clinical pathological characteristics.Methods:Semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (sRT-PCR), immunohistochemistry and Western blot method were used to determine the mRNA and protein expressions of CDC4 and c-Myc in 40 specimens of gastric carcinoma tissues, corresponding adjacent tissues and normal mucosal tissues. The expressions of CDC4 and c-Myc and the clinical pathological characteristics were analyzed.Results:Theprotein expressions of CDC4 in gastric cancer tissues were significantly lower than those in adjacent tissues and normal mucosal tissues (P<0.05), whereas the protein expression of c-Myc in gastric cancer tissues was significantly higher than that in adjacent tissues and normal mucosal tissues (P<0.05). The protein and mRNA expression of CDC4 and c-Myc were correlated with differentiation, TNM stage, lymph node metastasis, infiltration, but not with patients’ gender, age and site of cancer (P<0.05). There was a significant negative correlation between CDC4 and c-Myc at the mRNA and protein expression levels (P<0.05).Conclusion:The lower expression of CDC4 is correlated with differentiation, TNM stage, lymph node metastasis and infiltration. c-Myc overexpression is likely to be the CDC4 loss. It suggests that the loss of CDC4 may be a valuable marker for assessing the diagnosis and treatment and the prognosis of gastric cancer.

CDC4; c-Myc; Immunohistochemistry; Semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction; Western blot

10.3969/j.issn.1007-3969.2015.12.003

R735.2

A

1007-3639(2015)12-0933-07

2014-07-21

2015-05-14）

張才全 E-mail:zhangyu0323@21cn.com