綦 菲，陳麗艷，孫銀玲，王偉明（黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院中藥所，哈爾濱150036）

靈須護肝片對急性酒精性肝損傷的保護作用

綦 菲，陳麗艷，孫銀玲，王偉明*通信作者：王偉明，博士，研究員，碩士研究生導(dǎo)師，電話－（0451）55665478，電子信箱－zyyjy＠163.com
（黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院中藥所，哈爾濱150036）

目的 研究靈須護肝片對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用。方法 以50％乙醇灌胃方法造成小鼠急性酒精性肝損傷模型，觀察血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、肝組織三酰甘油（TG）、丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）的水平。結(jié)果 與模型對照組相比，陽性對照組、靈須護肝片中、高劑量組均可降低血清中ALT、AST的活性及肝組織中TG、MDA的含量（P＜0.05），提高肝組織中GSH的含量（P＜0.05）。結(jié)論 靈須護肝片對小鼠急性酒精性肝損傷具有保護作用，可顯著降低ALT、AST活性，升高GSH含量，調(diào)節(jié)TG、MDA含量。

靈須護肝片；酒精性肝損傷；小鼠

酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）是指由于大量長期飲酒導(dǎo)致的肝臟疾病，是我國常見的肝臟疾病之一，包括酒精性脂肪肝、肝炎、肝纖維化和肝硬化等類型［1-2］。其致病因素比較單一，通常是由于長期大量飲酒導(dǎo)致的。近年來，酒精性肝病的發(fā)病率逐年增加，嚴(yán)重威脅著人類的健康。據(jù)估計，全世界約有1 500萬～2 000萬人酗酒，這些人中10％～20％有不同程度的酒精性肝?。?］，因此，酒精性肝損傷的防治也成為人們關(guān)注的焦點。靈須護肝片是我院近年來研制開發(fā)的對酒精性肝損傷具有保護作用的保健食品，配方中所用的靈芝、玉米須等藥材均為藥食同源的中藥，在解酒護肝的同時又起到補益身體、增強機體免疫力的作用。實驗通過建立小鼠急性酒精性肝損傷模型，研究了靈須護肝片對酒精性肝損傷的保護作用。

1 材料

1.1 實驗動物 72只雄性KM小鼠（長春億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司，許可證號：SCXK-〔吉〕2013-0014，清潔級），體質(zhì)量（20±2）g。

1.2 儀器與試藥 10V-AC型半自動生化儀（韓國SECOMAN株式會社）；Infinite M200 Pro酶標(biāo)儀（Tecan）；Sorvall ST 16高性能離心機（Thermo Fisher）；靈須護肝片（黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室自制，批號131102）；葵花牌護肝片（黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司，批號201310043）；三酰甘油（TG）試劑盒（北京北化康泰臨床試劑有限公司）；丙二醛（MDA）試劑盒、還原型谷胱甘肽（GSH）試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）試劑盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

2 方法

2.1 分組與給藥［4-5］KM小鼠隨機分為空白對照組、模型對照組、陽性對照組（葵花護肝片）、靈須護肝片低劑量組（1.17 g/kg）、中劑量組（2.34 g/kg）、高劑量組（4.68 g/kg），每組12只，空白對照組和模型對照組給予等量蒸餾水，1次/d。連續(xù)灌胃給藥30 d，第30天模型對照組、陽性對照組及各給藥組1次灌胃給予50％乙醇，灌胃量為12mL/kg BW，禁食16 h，小鼠摘眼球取血，分離血清，脫臼處死，取出肝臟，－80℃保存。

2.2 檢查指標(biāo)及方法 采用微板法測定小鼠血清中ALT、AST活性，采用半自動生化儀檢測小鼠肝臟組織中TG、MDA、GSH含量。

2.3 統(tǒng)計學(xué)處理 實驗結(jié)果采用SPSS Statistics 19統(tǒng)計軟件進行分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用方差分析進行統(tǒng)計學(xué)檢驗。

3 結(jié)果

3.1 對血清AST、ALT活性的影響 與模型對照組比較，陽性對照組、靈須護肝片中、高劑量組血清中AST活性顯著降低（P＜0.05）；陽性對照組、靈須護肝片低、中、高劑量組血清 ALT活性顯著降低（P＜0.05），靈須護肝片高劑量組與陽性對照組間無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

3.2 對肝組織TG、MDA、GSH含量的影響 與模型對照組比較，陽性對照組、靈須護肝片中、高劑量組肝組織中 TG、MDA含量顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），且靈須護肝片中劑量組對MDA的下調(diào)作用顯著高于陽性對照組（P＜0.05），靈須護肝片中、高劑量組及陽性對照組肝組織中GSH含量顯著提高（P＜0.05），與陽性對照組間無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

表1 靈須護肝片對小鼠血清AST、ALT活性的影響（±s，n＝12）U/L

表1 靈須護肝片對小鼠血清AST、ALT活性的影響（±s，n＝12）U/L

注：與模型對照組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01，與陽性對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

組別AST ALT空白對照組 44.63±12.40＃＃ 38.57±6.30＃＃模型對照組 90.80±18.17 75.22±7.01陽性對照組 56.24±13.16＃＃ 47.61±10.63靈須護肝片低劑量組 81.78±18.38△△ 64.35±8.77?！鳌黛`須護肝片中劑量組 68.48±14.90＃△ 54.10±8.89＃?！黛`須護肝片高劑量組 61.39±14.06＃＃ 46.21±9.44＃＃

表2 靈須護肝片對小鼠肝組織TG、MDA、GSH含量的影響（±s，n＝12）

表2 靈須護肝片對小鼠肝組織TG、MDA、GSH含量的影響（±s，n＝12）

注：與模型對照組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01，與陽性對照組比較，△P＜0.05

組 別 TG/（mmol/L）MDA/（nmol/mg）GSH/（g/L）空白對照組 3.97±2.56＃＃ 4.37±0.89＃＃ 2.20±0.46＃＃模型對照組 10.35±3.75 8.23±1.48 1.67±0.29陽性對照組 5.40±1.85＃＃ 6.83±0.46＃＃ 2.08±0.29＃＃靈須護肝片低劑量組9.69±1.80 7.60±1.26 1.93±0.41靈須護肝片中劑量組6.42±1.10＃＃ 5.81±1.38＃?！?2.03±0.34＃靈須護肝片高劑量組7.74±2.30＃＃ 7.10±1.21＃ 2.34±0.43＃＃

4 討論

人體攝入酒精后，有90％～95％的乙醇在肝臟代謝［6］，在乙醇脫氫酶（ADH）和微粒體乙醇氧化酶系的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)橐胰?，乙醛再氧化為乙酸?］。肝臟內(nèi)ADH和乙醛脫氫酶（ALDH）在輔酶Ⅰ（NAD＋）參與下對乙醇正常的生理代謝共同發(fā)揮作用［8］。H＋從底物上轉(zhuǎn)移到NAD（氧化型輔酶Ⅰ），使其轉(zhuǎn)變?yōu)镹ADH（還原型輔酶Ⅰ），NADH與NAD比值的升高可抑制線粒體三羧酸循環(huán)，使肝內(nèi)脂肪酸代謝發(fā)生障礙，脂肪在肝細胞中堆積，最終導(dǎo)致脂肪肝的形成。ALT和AST是存在肝細胞漿和線粒體中的轉(zhuǎn)氨酶，其活性的升高反映了肝細胞損傷的嚴(yán)重程度［9-10］。研究［11］發(fā)現(xiàn)，靈須護肝片可以顯著降低血清中ALT和AST的活性，從而對肝細胞起到一定的保護作用，減輕肝細胞的損傷程度，靈須護肝片同時又可以升高肝臟中GSH含量。GSH是存在于肝細胞中的一種具有解毒功能的肽類，能清除體內(nèi)的氧自由基，保護肝臟的合成。靈須護肝片對肝臟TG、MDA含量的調(diào)節(jié)作用，提示其可以減少脂肪在肝臟內(nèi)的堆積，減輕細胞膜的損傷。上述研究表明，靈須護肝片對酒精性肝損傷能起到一定的保護作用。

Protective effect of Lingxu liver-protecting tablets on alcohol-induced liver injury

QIFei，CHEN Liyan，SUN Yinling，WANGWeiming*
（TCM Institute，Heilongjiang Traditional Chinese Medcine Academy of Sciences，Harbin 150036，China）

Objective To investigate the protective effectof Lingxu liver-protecting tablets on alcohol-induced acute liver injury inmice.M ethods The acute liver injury animalmodel was established in mice by 50％alcohol gavage.Activities of serum of alanine aminotransferase（ALT），aspartate aminotrans-ferase（AST），contentof triglyceride（TG），malondialdehyde （MDA），glutathione（GSH）in liver homogenatewere all studied.Results Compared with themodel control group，the positive control group，middle and high dosage of Lingxu liver-protecting tablets significantly decreased the activities of serum ALT and AST and the content of liver TG and MDA（P＜0.05），increased the content of liver GSH（P＜0.05）.Conclusion Lingxu liver-protecting tablets showed protective effects against acute liver injury induced by alcohol in mice.It can significantly reduce the activity of ALT and AST，increase the content of GSH，and regulate the content of TG and MDA.

Lingxu liver-protecting tablets；alcoholic liver injury；mice

book=232,ebook=18

R285.5

A

2095－6258（2015）02－0232－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2015.02.005

綦 菲（1986－），女，碩士研究生，助理研究員，主要從事中藥新藥及保健食品的研究與開發(fā)。