劉長(zhǎng)姣，于徊萍，孟憲梅

（吉林工商學(xué)院糧油食品深加工吉林省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林長(zhǎng)春130062）

五味子 Schisandra chinensis（Turcz.）Baill為木蘭科多年生落葉植物，因果實(shí)具有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名，具有斂肺生津、益胃養(yǎng)心、收斂固澀、滋補(bǔ)、強(qiáng)壯等功效，是常用中藥之一。五味子中含有木脂素，多糖和三萜酸等多種有效成分，其中木脂素類(lèi)具有保肝，降酶，抗艾滋病等多種活性[1]。本文對(duì)近些年來(lái)五味子及其制劑中有效成分測(cè)定方法的研究進(jìn)展做一綜述，以利于五味子有效成分研究與開(kāi)發(fā)利用。

1 五味子中木脂素成分的測(cè)定方法

五味子中木脂素成分大多具有聯(lián)苯環(huán)辛二烯母核，是一類(lèi)低極性小分子化合物，如五味子甲素、五味子乙素，五味子醇甲等。近些年來(lái)常用的測(cè)定方法有分光光度法、高效液相色譜法、薄層掃描法等，現(xiàn)分別加以介紹。

1.1 分光光度法

分光光度法是藥物成分分析常用方法之一，主要用于目標(biāo)成分的鑒別和含量測(cè)定，具有簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)。五味子木脂素分光光度法測(cè)定有直接測(cè)定法和變色劑顯色法。馬平勃[2]應(yīng)用直接測(cè)定法測(cè)定五味子糖漿中五味子醇甲含量，以五味子醇甲為對(duì)照品，甲醇為空白，在234 nm處測(cè)定吸光度，平均回收率為100.25%，RSD為0.68%。田明[3]以五味子乙素為對(duì)照品，應(yīng)用變色酸比色法測(cè)定五味子中總木脂素的含量，于570 nm處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，據(jù)此計(jì)算總木脂素得率。

上述方法適合測(cè)定五味子總木脂素含量，但難于定量測(cè)定某一組分。張立慶等[4]利用信息提取技術(shù)進(jìn)行數(shù)學(xué)建模，利用嶺回歸（RR）分光光度法測(cè)定五味子提取液中五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲的含量，運(yùn)用計(jì)算機(jī)VB語(yǔ)言對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行RR分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明RR分光光度法對(duì)樣品中各組分的平均回收率在92.35%～108.69%之間，樣品不經(jīng)分離即可同時(shí)測(cè)定，是一種很有實(shí)用價(jià)值的方法。

1.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）是色譜法中應(yīng)用最廣泛的方法，具有分離效能高、分析速度快、準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)，廣泛用于天然產(chǎn)物的定性、定量和雜質(zhì)分析。王彥涵等[5]應(yīng)用HPLC法對(duì)五味子屬14個(gè)種（變種）18個(gè)樣品（果實(shí)、莖藤和根）中，五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素、表-加巴辛和安五脂素等成分進(jìn)行了測(cè)定，證明五味子屬植物果實(shí)的木脂素含量高于根和莖。馮雪松等[6]采用HPLC/UV測(cè)定不同產(chǎn)地五味子藥材甲醇提取液的指紋圖譜并進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)指紋圖譜中有22個(gè)共有峰，確定了其中五味子甲素、乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲6個(gè)成分。施祖勇等[7]建立HPLC法測(cè)定復(fù)方益肝靈片中五味子醇甲、醇乙和甲素的含量，平均回收率分別為97.8%、98.1%和97.3%，RSD分別為1.2%、1.9%和0.82%。張林林等[8]建立UFLC同時(shí)測(cè)定護(hù)肝膠囊中五味子醇甲、甲素和乙素的方法，平均回收率分別為99.7%、98.5%、99.2%，RSD分別為1.1%、2.3%、1.6%（n=5）。上述測(cè)定方法見(jiàn)表1。

表1 HPLC法檢測(cè)木脂素的測(cè)定條件Table 1 HPLC analysis condition of lignans

1.3 薄層掃描法

薄層掃描法具有靈敏、準(zhǔn)確、專屬性好的特點(diǎn)，可用于目標(biāo)成分定性和定量分析。施虹[9]應(yīng)用雙波長(zhǎng)掃描法測(cè)定補(bǔ)腎益精丸中五味子甲素含量，展開(kāi)劑為石油醚（60℃～90℃）和乙酸乙酯（8∶1），平均回收率為99.40%，RSD為3.40%。程?hào)|巖等[10]以薄層掃描法測(cè)定鹿心寧膠囊中五味子乙素的含量，展開(kāi)劑為正己烷和醋酸乙酯（8∶3），平均回收率為100.9%，RSD為2.96%。韓正洲等[11]采用薄層色譜法鑒別南、北五味子，并對(duì)南、北五味子中五味子甲、乙素的含量進(jìn)行測(cè)定。從薄層定性結(jié)果可看出南五味子中五味子甲素含量較高，但不含五味子乙素；北五味子中五味子甲素含量較低，但五味子乙素含量較高，故可據(jù)此鑒別南、北五味子。

1.4 毛細(xì)管色譜法

1.4.1 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法

膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法是把一些離子型表面活性劑加到電解液中，當(dāng)其濃度超過(guò)臨界濃度后就形成有一疏水內(nèi)核、外部帶電荷的膠束。在此法中，被分離物質(zhì)在水相中進(jìn)行分配，溶質(zhì)在水相中的遷移受電滲流和本身電泳遷移率的支配，而在膠束相中的遷移是電滲流和膠束電遷移共同作用的結(jié)果，不同物質(zhì)根據(jù)其電遷移率及分配系數(shù)的不同而被分離。劉海興等[12]建立了膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法測(cè)定生脈注射液中五味子酯甲含量的新方法，確定的最佳緩沖溶液為25 mmol/LNa2B4O7，表面活性劑SDS的濃度為30 mmol/L，15%乙醇溶液（pH9.82）為有機(jī)添加劑，測(cè)定時(shí)運(yùn)行電壓為18 kV，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，在此條件下，20 min內(nèi)分離出9個(gè)峰，且各組分之間分離度較好；測(cè)得生脈注射液中五味子酯甲的平均含量為0.228 g/L，回收率為97%，RSD為3.7%。Kan Tian[13]等應(yīng)用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法分離測(cè)定五味子種子中木脂素成分，證明只應(yīng)用表面活性劑SDS不能達(dá)到分離所有組分的效果，在其中加入離子液體1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽可使所有的化合物分開(kāi)，得到較好的分離效果，測(cè)得北五味子和南五味中五味子醇甲、酯甲、甲素和乙素的回收率分別為：103.70%和97.01%，97.46%和102.79%，98.23%和105.87%，102.91%和104.83%。

1.4.2 毛細(xì)管電色譜法

毛細(xì)管電色譜法（CEC）是一種集毛細(xì)管電泳和液相色譜兩者優(yōu)點(diǎn)于一體新型的高效微分離技術(shù)。它采用熔融石英毛細(xì)管柱，柱內(nèi)填充高效液相色譜用的固定相，用高壓直流電源代替高壓泵，既能分離中性物質(zhì)，又能分析帶電物質(zhì)，具有高效、微量、快速等特點(diǎn)。LeonaK等[14]應(yīng)用CEC法測(cè)定五味子種子中木脂素，采用大孔聚丙烯酰胺填充毛細(xì)管柱，測(cè)定條件為：進(jìn)樣電壓5 kV（2.0 s），分離電壓22.5 kV，柱溫 25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)200 nm（帶寬10 nm），流動(dòng)相為30%乙腈的10 mmoL/L Tris-15 mmoL/L硼酸鹽緩沖液（pH 8.2）。在此條件下，CEC對(duì)五味子醇甲、醇乙、丙素和戈米辛N的定量分析結(jié)果與HPLC測(cè)定結(jié)果一致，分析時(shí)間不超過(guò)35min。

2 五味子其他成分的測(cè)定

2.1 五味子多糖的測(cè)定

多糖具有調(diào)節(jié)免疫功能、抗腫瘤、抗病毒病菌、降血糖等作用，在抗腫瘤、抗病毒等藥物的研究中占有一定的地位。五味子多糖成分的測(cè)定方法與天然產(chǎn)物中多糖常用測(cè)定方法相同，主要為分光光度法。韓學(xué)忠[15]采用硫酸-酚法測(cè)定五味子多糖含量。李巧云等[16]采用蒽酮—硫酸法測(cè)定五味子粗多糖含量。

2.2 五味子揮發(fā)油的測(cè)定

五味子種子中揮發(fā)性成分約占種子的2.34%，有明顯的辛辣、芳香氣味。五味子揮發(fā)油的測(cè)定方法主要是氣相-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用法。該方法具有準(zhǔn)確度高，快速靈敏等優(yōu)點(diǎn)。劉風(fēng)雷等[17]應(yīng)用超臨界CO2法提取五味子精油，用氣相色譜法測(cè)定北五味子油中亞油酸的含量，回收率為98.75%，RSD為1.21%。李曉寧等[18]對(duì)遼五味子的揮發(fā)油成分進(jìn)行鑒定，利用色質(zhì)聯(lián)用儀GC/MS產(chǎn)生的雙線性數(shù)據(jù)，及化學(xué)計(jì)量學(xué)發(fā)展的二維色譜/質(zhì)譜數(shù)據(jù)解析方法，得到了各組分的純色譜曲線和質(zhì)譜；共檢出56個(gè)組分，鑒定了其中49個(gè)化合物，占揮發(fā)油總量的98.27%。上述方法測(cè)定條件見(jiàn)表2。

表2 揮發(fā)油CG-MS分析條件Table 2 Analysis condition of essential oil with GC-MS

2.3 微量元素的測(cè)定

五味子是可以應(yīng)用于保健食品中的中草藥之一，因此其微量元素的研究也得到一定發(fā)展。李承范[19]等用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）法測(cè)定汪清、和龍、龍井、琿春、安圖、敦化6個(gè)縣市種植五味子樣品中微量元素含量。樣品采用硝酸-過(guò)氧化氫消解體系消化后，用ICP-MS法進(jìn)行微量元素的測(cè)定。方法的檢出限為 0.002 ng/mL～0.092 ng/mL，RSD 在 1.87%～4.96%之間，標(biāo)準(zhǔn)加入回收率在94.0%～104.5%之間，并證明五味子對(duì)各元素的吸收、富集具有一定的平衡關(guān)系，而且重金屬含量比較低。譚曉虹等[20]建立南、北五味子中微量元素的火焰原子吸收光譜測(cè)定法。結(jié)果表明南、北五味子中均含有 Fe、Cu、Zn、Mn，平均回收率分別為101.7%、99.68%、102.9%和96.18%，RSD分別為：0.383%、1.06%、0.630%和0.177%。

2.4 原兒茶酸的測(cè)定

五味子中的原兒茶酸能降低心肌耗氧量，拮抗腎上腺素所致的耗氧量增加，提高心肌耐氧能力，縮小心肌梗死范圍。許育海等[21]采用RP-HPLC法測(cè)定五味子中原兒茶酸的含量。確定乙腈-水-酸系統(tǒng)的分離效果更好，并發(fā)現(xiàn)在流動(dòng)相中加入醋酸銨可使原兒茶酸保留時(shí)間縮短，改善原兒茶酸和相鄰組分的分離。最終確定的色譜條件為L(zhǎng)unaC18（2）色譜柱（150 mm×4.60 mm，5 μm），檢測(cè)波長(zhǎng)為 258 nm，流動(dòng)相為乙腈-5 mmol/L醋酸銨溶液-冰醋酸（6∶94∶1），流速為1.0 mL/min，柱溫為35℃，經(jīng)測(cè)定4批南五味子藥材中原兒茶酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.15 mg/g～0.4 mg/g的范圍內(nèi)。

2.5 五味子其他部位有效成分的測(cè)定

除了五味子果實(shí)以外，針對(duì)五味子植株的莖、葉和嫩芽中的活性成的研究也取得了一定的研究進(jìn)展。

Radek Sladkovsky等[22]以反相液相色譜法測(cè)定了不同年份（1997-1999）歐洲中部地區(qū)五味子莖葉提取物中槲皮素、山奈酚和（E）-苯乙烯酸的含量。劉俊霞[23]等應(yīng)用苯酚-硫酸法測(cè)定不同品種的北五味子藤莖中多糖含量，證明不同品種的北五味子藤莖多糖的含量有一定的差異。丁璞[24]等應(yīng)用HPLC法比較五味子根莖葉6種木脂素含量，證明野生五味子根莖葉總木脂素含量高于栽培品種，其根莖葉總木脂素含量順序?yàn)楦局髦Γ緜?cè)枝＞葉。李貞霞[25]等采用微波消解電感耦合等離子體-原子發(fā)射光譜法測(cè)定了五味子嫩芽中的礦質(zhì)元素 Ca、Cr、Cu、K、Fe、Mg和 Pb 的含量。證明五味子嫩芽中含有豐富的礦質(zhì)元素，RSD為0.245%～4.130%。該方法簡(jiǎn)單、快速、可靠、靈敏度高，且多元素可以同時(shí)測(cè)定，能滿足實(shí)際樣品分析需要.

3 結(jié)語(yǔ)

五味子是我國(guó)常用中藥材之一，由于其具有護(hù)肝，抗衰老等功能，對(duì)其中有效成分的研究也得到不斷的深入，不僅僅只局限于木脂素。對(duì)其有效成分的深入研究和準(zhǔn)確測(cè)定，可以有效的控制五味子及其加工產(chǎn)品的質(zhì)量，促進(jìn)五味子的深加工，提高我國(guó)五味子加工利用水平，擴(kuò)大五味子需求量。

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