李美桃，王波，葛冬梅

(徐州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，江蘇 徐州221000)

0 引 言

嬰幼兒階段是人生中生長發(fā)育最重要的時期，母乳是嬰幼兒最理想的天然食品。但由于職業(yè)、疾病等原因，全球有三分之一的嬰幼兒是由非母乳喂養(yǎng)長大的。我國每年約有340萬的嬰幼兒需要人工喂養(yǎng)[1]。對于母乳不足的嬰幼兒來說，嬰幼兒配方乳粉是其很重要的營養(yǎng)來源，因此，嬰幼兒配方乳粉中的各種營養(yǎng)成分的檢測非常重要[2-3]。磷是人體內(nèi)質(zhì)量分?jǐn)?shù)較多的元素之一，約占人體體質(zhì)量的1%[4-5]。它不僅構(gòu)成人體成分，還參與生命活動中非常重要的代謝過程，是機體很重要的一種元素。因此，本研究以嬰幼兒配方乳粉中磷元素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為測定指標(biāo)，對檢測方法進(jìn)行了詳細(xì)的探討，并對市售的嬰幼兒配方乳粉進(jìn)行了檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

檢測用嬰幼兒配方乳粉為市場隨機抽查樣本。

磷酸二氫鉀標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99.5%)；硝酸、高氯酸和硫酸為優(yōu)級純；其余試劑均為分析純。

釩鉬酸銨試劑：A液（25 g鉬酸銨，溶于400 mL水中），B液（1.25 g偏釩酸銨溶于300 mL沸水中，冷卻后加250 mL硝酸），將A液緩緩傾入B液中，不斷攪勻，并用水稀釋至1 L，貯于棕色瓶中。

磷的標(biāo)準(zhǔn)貯備液（質(zhì)量濃度為50 mg/L）：稱取在105℃±1℃烘干至恒重的磷酸二氫鉀標(biāo)準(zhǔn)品0.2197g，溶于400 mL水中，加8 mL硫酸，定容至1 L。

1.2 儀器與設(shè)備

E12140型電子分析天平；Lambda35紫外-可見分光光度計。

1.3 測定方法

吸取10 mL磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液于50 mL容量瓶中，加入10 mL釩鉬酸銨試劑，用水定容至刻度?？瞻字苯蛹尤?0 mL釩鉬酸銨試劑，用水定容至刻度。在30℃下顯色15 min。用1 cm光徑比色皿，于波長440 nm處測定吸光值[6-7]。

1.4 樣品的制備

稱取嬰幼兒配方乳粉0.6 g(精確至0.1 mg)，于125 mL三角瓶中，放入幾粒玻璃球，加10 mL硝酸，然后放在電熱板上加熱。待劇烈反應(yīng)結(jié)束后取下，稍冷卻，再加入10 mL高氯酸，重新放于電熱板上加熱。若消化液變黑，需取下再加入5 mL硝酸繼續(xù)消化，經(jīng)硝酸、高氯酸消化，直到消化液變成無色或淡黃色，且冒出白煙，在消化液剩下3～5 mL時取下，冷卻，轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中，定容。同時做空白實驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 實驗條件的優(yōu)化[8-10]

表1 實驗條件優(yōu)化的正交實驗結(jié)果

在單因素實驗的基礎(chǔ)上，按正交設(shè)計L9(34)進(jìn)行正交實驗，優(yōu)化實驗方法，結(jié)果如表1所示。由表1可以看出，各因素對吸光度的影響程度依次為反應(yīng)溫度＞釩鉬酸銨量＞反應(yīng)時間。直觀分析最佳實驗方法為10.5 mL釩鉬酸銨、35℃水浴10 min。而對大量實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析后發(fā)現(xiàn)，釩鉬酸銨量的3個水平和反應(yīng)時間的3個水平對吸光度的影響都不存在顯著性差異。為了實驗的易操作性和準(zhǔn)確性，選擇釩鉬酸銨量為10 mL，反應(yīng)時間為15 min。固定這兩個因素，改變反應(yīng)溫度（25，30，35 ℃），分別進(jìn)行實驗，所得吸光度隨時間變化的掃描結(jié)果如圖1所示。

圖1 不同反應(yīng)溫度下吸光度隨時間變化的掃描結(jié)果

由圖1可以看出，吸光度隨著時間的延長先下降，下降到一定值后趨于穩(wěn)定，這是因為溶液反應(yīng)完后未冷卻，直接進(jìn)行測定，初始溶液的溫度較高，隨著時間的延長，溶液的溫度不斷降低，直至室溫，說明溶液溫度對其吸光度有一定的影響，應(yīng)在溶液反應(yīng)完畢后，先冷卻至室溫再進(jìn)行測定。25℃下反應(yīng)的溶液吸光度明顯低于35℃和30℃下反應(yīng)的溶液吸光度，排除溶液溫度對其吸光度的影響，從14分鐘開始35℃和30℃下反應(yīng)的溶液吸光度一致且很穩(wěn)定。因此得出最佳實驗條件為吸取10 mL磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液于50 mL容量瓶中，加入10 mL釩鉬酸銨試劑，用水定容，在30℃下顯色15 min，冷卻至室溫進(jìn)行測定。圖1中，曲線從上往下依次為35℃，30℃，25℃。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

在50 mL容量瓶中分別準(zhǔn)確加入0，2.5，5，7.5，10，12.5，15 mL磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液，各加入10 mL釩鉬酸銨試劑，用水定容至刻度，搖勻，在30℃下顯色15 min，冷卻至室溫，在波長440.0 nm處測定吸光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖2所示。精密度實驗結(jié)果如表2所示。

在50 mL容量瓶中加入10 mL磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液，按2.1節(jié)的最佳實驗條件處理后連續(xù)6次測定其吸光度，結(jié)果見表2。其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.018%，說明精密度良好。

表2 儀器精密度實驗結(jié)果

2.3 穩(wěn)定性實驗

在50 mL容量瓶中加入10 mL磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液，按2.1節(jié)的最佳實驗條件處理后置于室溫，每間隔5 min測定一次吸光度，連續(xù)實驗30 min，結(jié)果見表3。RSD為0.082%，說明該反應(yīng)體系穩(wěn)定性良好。

表3 反應(yīng)產(chǎn)物的穩(wěn)定性實驗結(jié)果

2.4 重現(xiàn)性實驗

準(zhǔn)確稱取同一樣品5份按1.4節(jié)的方法處理，按2.1節(jié)的最佳實驗條件測定嬰兒配方乳粉中磷含量，結(jié)果如表4所示。由表4可以看出，嬰兒配方乳粉中磷平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.959 mg/g，RSD為1.71%，說明該方法重現(xiàn)性良好。

表4 重現(xiàn)性實驗結(jié)果

2.5 加標(biāo)回收率實驗

準(zhǔn)確稱取同一樣品5份，其中4份分別加入30 mL磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液，按1.4節(jié)的方法處理后按2.1節(jié)的最佳實驗條件測定嬰兒配方乳粉中磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)，并按式(1)計算加標(biāo)回收率，結(jié)果如表5所示。由表5可以看出，樣品的平均回收率為98.5%，RSD為0.39%，說明測試結(jié)果準(zhǔn)確度高。因此用本方法測定嬰幼兒配方乳粉中的磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)準(zhǔn)確而可靠。

表5 樣品測定結(jié)果和回收率

2.6 樣品中磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定

由于不同生長期的嬰幼兒所需要的營養(yǎng)成分不同，為了適應(yīng)各個階段孩子的需求，嬰幼兒配方乳粉分為3個階段，即嬰兒（0～12月）配方乳粉、較大嬰兒（6～12月）配方乳粉、幼兒（12～36月）配方乳粉。嬰兒配方乳粉是指以乳類及乳蛋白制品為主要原料，加入適量的維生素、礦物質(zhì)和/或其他成分，僅用物理方法生產(chǎn)加工制成的粉狀產(chǎn)品。適于正常嬰兒食用，其能量和營養(yǎng)成分能夠滿足0～6月齡嬰兒的正常營養(yǎng)需要[11]。較大嬰兒和幼兒配方乳粉是指以乳類及乳蛋白制品為主要原料，加入適量的維生素、礦物質(zhì)和/或其他輔料，僅用物理方法生產(chǎn)加工制成的粉狀產(chǎn)品，適用于較大嬰兒和幼兒食用，其營養(yǎng)成分能滿足正常較大嬰兒和幼兒的部分營養(yǎng)需要[12]。分別對不同品牌不同段號的30批嬰幼兒配方乳粉進(jìn)行檢測，結(jié)果如表6所示。由表6可以看出，不同階段的乳粉磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)不同，幼兒配方乳粉＞較大嬰兒配方乳粉＞嬰兒配方乳粉，幼兒配方乳粉的磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為（448±56）mg/g，較大嬰兒配方乳粉的磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為（382±59）mg/g，嬰兒配方乳粉的磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為（250±58）mg/g。不同品牌的同一種乳粉磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)也存在較大差異，但3個階段乳粉的變化范圍基本一致，分別為±56，±59，±58 mg/g。將實驗結(jié)果跟產(chǎn)品標(biāo)簽明示值進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)30批次乳粉中有2批次不符合產(chǎn)品標(biāo)簽明示值。

表6 嬰幼兒配方乳粉中的磷質(zhì)量分?jǐn)?shù) mg/g

3 結(jié) 論

研究表明，將樣品預(yù)處理后，取樣液10 mL于50 mL容量瓶中，加入10 mL釩鉬酸銨試劑，用水定容，在30℃下顯色15 min，磷與釩鉬酸銨反應(yīng)生成黃色的化合物，將該化合物冷卻至室溫，并在波長440.0 nm進(jìn)行測定，其吸光度與磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈正比。所建立的線性方程為y=0.0372x+0.0039(R2=0.9997)。該方法的平均回收率為98.5%，RSD為0.39%，具有良好的重現(xiàn)性和較高的準(zhǔn)確度。應(yīng)用該方法對市售的30批次嬰幼兒配方乳粉進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)不同階段的乳粉磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)不同，幼兒配方乳粉＞較大嬰兒配方乳粉＞嬰兒配方乳粉，分別為（448±56） mg/g，（382±59）mg/g，（250±58）mg/g，同時說明不同品牌同一階段的乳粉磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)也存在較大差異。

[1]任國譜.嬰幼兒配方乳粉發(fā)展趨勢[J].權(quán)威論壇,2009,25(1):2-6

[2]李巧玲,陳則華.微波消解光度法測定奶粉中的磷 [J].食品科學(xué),2007,28(6):302-305.

[3]劉丁,解楠,段文鋒等.微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜測定嬰幼兒奶粉中磷的質(zhì)量濃度[J].中國乳品工業(yè),2011,39(8):44-46.

[4]劉振波,鞠平,盛沛等.干法灰化—ICP-AES法測定奶粉中的磷[J].魯東大學(xué)學(xué)報,2009,25(1):56-58.

[5]衛(wèi)敏,劉鐘棟.食品中磷的檢測方法 [J].中國科學(xué)：化學(xué),2010,40(7):914-921.

[6]GB 5413.22—2010嬰幼兒食品和乳品中磷的測定[S].

[7]萬軍紅,邵麗華.微波消解:磷鉬藍(lán)分光光度法測定奶粉中的磷[J].衛(wèi)生研究,2009,38(5):617-618.

[8]張勇,林國衛(wèi),夏瑾華等.可見分光光度法測定麥片中的香蘭素含量[J].食品科學(xué),2010,31(4):233-235.

[9]馮彩婷,楊麗霞,李書靜.紫外-可見分光光度法測定奶粉中的香蘭素含量[J].河北化工,2012,35(6):78-80.

[10]李美桃,王波.分光光度法測定嬰幼兒配方乳粉中磷含量的不確定度評定[J].乳業(yè)科學(xué)與技術(shù),2012,35(5):18-20.

[11]GB 10765—2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰兒配方食品[S].

[12]GB 10767—2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 較大嬰兒和幼兒配方食品[S].