姜 鳴，張雅林，呂淑敏

(西北農(nóng)林科技大學植保資源與病蟲害治理教育部重點實驗室，陜西楊凌 712100)

乙酰膽堿受體(acetylcholine receptor，AchR)是昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)中一種十分重要的神經(jīng)遞質(zhì)受體，參與昆蟲各種神經(jīng)生理活動。與脊椎動物類似，在昆蟲體內(nèi)亦存在煙堿型(N 型)受體(nicotine acetylcholine receptor，nAchR)和毒蕈堿型 (M型) 受 體 (muscarinic acetylcholine receptor，mAchR)兩種受體。20 世紀90年代初，新煙堿型殺蟲劑成功研發(fā)，其作用靶標N 型受體成為昆蟲分子生物學研究的一個熱點領(lǐng)域，學者們從藥理學和分子水平對其進行了廣泛而深入的研究(Barbara et al.，2008;尚慶利等，2009;趙宇等，2009)。但昆蟲M 型受體的研究遠遠落后于N 型受體。早在1981年Breer 提出昆蟲體內(nèi)存在M 型受體，1989年首次從果蠅Drosophilia melanogaster 體內(nèi)克隆獲得昆蟲第一個M 型受體基因序列(Onai et al.，1989)，隨后通過蟲體藥理學和免疫組織化學方法研究發(fā)現(xiàn)M 型受體參與昆蟲神經(jīng)元軸突的延伸、表皮的形成(Clark et al.，2005)，調(diào)節(jié)昆蟲的遷飛 (Oliveira et al.，2010)、鳴聲、求偶(Hoffmann et al.，2007;Heck et al.，2009)及學習記憶等行為 (Ismail et al.，2006;Guez et al.，2010)，是農(nóng)藥開發(fā)的一個潛在靶標，具有很大的開發(fā)和應(yīng)用價值(Honda et al.，2007)。本文就國內(nèi)外對昆蟲M 型受體的研究進展作一簡要綜述，并對GenBank 中已上傳的昆蟲M 型受體序列進行分子進化分析。

1 毒蕈堿型乙酰膽堿受體概述

M 型受體是一種單鏈跨膜糖蛋白，分子量大約在51-66 kDa，由460-590 個氨基酸殘基組成(王昊等，2002)，通過與異三聚體鳥苷酸結(jié)合蛋白(G 蛋白)偶聯(lián)介導信號轉(zhuǎn)導過程，屬于G 蛋白偶聯(lián)受體(G Protein Coupled Receptor，GPCR)超家族。此類受體的基本結(jié)構(gòu)特征是具有七個跨膜螺旋結(jié)構(gòu)，其中七個跨膜區(qū)(TMI-TMVII)由三個胞外環(huán)(O1-O3)和三個胞內(nèi)環(huán)(I1-I3)連接而成，其氨基端位于細胞外側(cè)，羧基端位于細胞內(nèi)側(cè)。隨著分子生物學的發(fā)展，目前已經(jīng)從脊椎動物體內(nèi)克隆獲得5種M 型受體亞型(Eglen et al.，1999;Richards，1991)，這五個亞型之間氨基酸序列很相似，其中7 個跨膜區(qū)的氨基酸序列相似性最高，3 個胞外環(huán)和I1、I2 胞內(nèi)環(huán)也比較保守，變異較大的區(qū)域主要在N 末端、C 末端及第3 個胞內(nèi)環(huán)，其中以第3 個胞內(nèi)環(huán)的變異最大，該區(qū)域是M 型受體與G 蛋白結(jié)合并引起生物學效應(yīng)的主要部位。根據(jù)這五個亞型所轉(zhuǎn)導的信號途徑不同又可分為兩大類即Ⅰ類(M1/M3/M5)和Ⅱ類(M2/M4):Ⅰ類是激活Gq，通過磷脂酸肌醇系統(tǒng)，激活磷脂酶C (PLC)，生成肌醇1，3，4，三磷酸(IP3)和甘油二酯(DAG)，最終使細胞內(nèi)Ca2+濃度升高而發(fā)揮作用。Ⅱ類是激活Gi，抑制腺苷酸環(huán)化酶，從而降低胞內(nèi)cAMP 水平(Kohn et al.，1996;Eglen et al.，2001;Stefan et al.，2001)。而且這5種M 型受體亞型都可以被毒蕈堿激動劑激活，被阿托品所拮抗(Tobin et al.，2009;Harvey，2012)。有研究認為脊椎動物的第6 個M 型受體已被克隆 (Goodearl et al.，1999)，但目前尚無M6 亞型的藥理學及生理功能方面的報道。于海龍等2007年通過生物信息學方法，從進化、序列相似性、表達相關(guān)性、蛋白互作等多個角度對M 型受體亞型之間的關(guān)系進行了研究，結(jié)果認為，脊椎動物M 型受體的5種亞型在某些組織中正表達相關(guān)，呈現(xiàn)共表達趨勢，這提示著不同受體亞型在執(zhí)行不同的生理功能，并彼此相互調(diào)節(jié)。最近在脊椎動物的研究中發(fā)現(xiàn)膽堿能系統(tǒng)不僅參與神經(jīng)生理活動，而且還與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育及突觸結(jié)構(gòu)的維持密切相關(guān)(Wright et al.，2009;Abreu-Villaca et al.，2011)，并參與細胞的增殖、程序性死亡及神經(jīng)細胞的分化(Resende and Adhikari，2009)。

昆蟲中，在果蠅全基因組序列獲得之前，藥理學研究認為昆蟲體內(nèi)亦存在多種M 型受體亞型，并提出昆蟲M 型受體的分型與脊椎動物M 型受體的分型不一定完全吻合(Hannan and Hall et al.，1993)。從1989年昆蟲的第一個M 型受體基因克隆，一直未從分子水平驗證昆蟲中存在其他M 受體亞型，直到2013年3月才發(fā)現(xiàn)昆蟲中存在兩種M 型受體，根據(jù)藥理學特征分為A 亞型和B 亞型，其中A 亞型受體與脊椎動物M 型藥理學特征類似，可被乙酰膽堿、毒蕈堿激動劑所激活，被經(jīng)典的拮抗劑阿托品、東莨菪堿 及二苯乙醇酸-3-奎寧環(huán)酯(QNB)所拮抗;而B 亞型受體藥理學特征與脊椎動物M 型受體差別較大，其可被乙酰膽堿激活，但對毒蕈堿敏感性要比乙酰膽堿低1000 倍，而上述經(jīng)典的拮抗劑對其不起作用(Collin et al.，2013)。因此，Collin 等將脊椎動物M 型受體的5個亞型歸于A 亞型受體。昆蟲A 亞型受體主要存在于神經(jīng)系統(tǒng)，主要功能是參與神經(jīng)生理活動，是殺蟲劑的潛在靶標。由于昆蟲B 亞型受體剛發(fā)現(xiàn)，對其功能研究甚少。

2 昆蟲M 型受體的克隆與表達

2.1 昆蟲M 型受體基因的克隆與分子進化

Onai 等1989年首次通過分子克隆方法從果蠅體內(nèi)獲得昆蟲的第一個M 型受體基因序列，命名為DM1，定位在果蠅第二條染色體的右臂，該受體與脊椎動物M3 受體序列的相似度最高。隨著分子生物學的發(fā)展，更多的昆蟲基因組序列被測序，通過電子克隆方法獲得了多個已知全基因組序列的昆蟲物種M 型受體序列A 亞型，隨著今年B 亞型受體的發(fā)現(xiàn)，Collin 等(2013)對已知基因組的昆蟲及其他節(jié)肢動物B 亞型受體進行了電子克隆，發(fā)現(xiàn)在原口動物中存在多種B 亞型受體現(xiàn)象，但僅有1種A 亞型受體;而后口動物中僅存在A 亞型，未發(fā)現(xiàn)B 亞型存在。為了確定已知的昆蟲M型受體序列A 亞型及B 亞型與脊椎動物5 個亞型(同屬于A 型)之間的關(guān)系，我們選取GenBank 中收錄的12種昆蟲和3種蜱螨類A 亞型受體、5種昆蟲及1種蜱螨類B 亞型受體以及大鼠Rattus norvegicus 5 個M 受體亞型的氨基酸序列，利用Mega 5.0 軟件基于NJ 法構(gòu)建了分子進化樹如圖1所示。分子進化樹分析結(jié)果，恰與Collin 等對其藥理學分析一致。即具有相似藥理學特征的無脊椎動物A 亞型與脊椎動物M 型受體5種亞型聚為一支，而具有獨特藥理學特征的無脊椎動物B 亞型單獨聚為一支。在脊椎動物中，M 型受體各亞型分成的兩大分支剛好與藥理學的Ⅰ類和Ⅱ類相吻合。在無脊椎動物A 亞型中，昆蟲綱Insecta 與蛛形綱Arachnida 各聚為一支。昆蟲中，同翅目的豌豆蚜Acyrthosiphon pisum A 亞型從雙翅目和膜翅目中分離出來作為單獨一支，另一分支自上而下分別為膜翅目、鞘翅目和雙翅目A 亞型，并以物種間的親緣關(guān)系而聚類。相對于B 亞型來說，無脊椎動物與脊椎動物A 亞型受體在進化上是相對保守的，推測A 亞型可能是M 受體較古老的亞型，B 亞型可能是在A 亞型的基礎(chǔ)上突變進化而來，而脊椎動物A 亞型中的5 個亞型可能是A 亞型在進化中通過復制進化而來(Collin et al.，2013)。因此，無脊椎動物與脊椎動物的M 型受體分子可能在很早以前就已經(jīng)分化出來。但無脊椎動物M型受體除了A 亞型和B 亞型外是否還存在其他亞型?有關(guān)其分型問題有待于從分子生物學、藥理學及其他角度進一步探討。

2.2 昆蟲M 型受體的組織分布與功能

對昆蟲M 型受體的功能研究主要集中于A 亞型，B 亞型2013年才發(fā)現(xiàn)，對其研究甚少。昆蟲第一個M 型受體基因被克隆后，有關(guān)其組織分布及功能研究受到廣泛關(guān)注。目前已經(jīng)對雙翅目、鱗翅目、膜翅目等多種昆蟲的M 型受體A 亞型進行了免疫組織化學定位研究?；诠塂M1 多克隆抗體的免疫細胞化學研究發(fā)現(xiàn)，果蠅DM1 受體蛋白僅表達于神經(jīng)系統(tǒng)，肌肉系統(tǒng)內(nèi)不表達，而神經(jīng)系統(tǒng)中以觸角葉位置表達量最高，說明果蠅DM1 與嗅覺信息的神經(jīng)傳遞相關(guān)(Blake et al.，1993;Harrison et al.，1995)。Aizono 等 (1997)對家蠶Bombyx mori 腦部A 亞型受體和促前胸腺激素PTTH 共定位研究發(fā)現(xiàn)，A 亞型受體在家蠶腦部神經(jīng)系統(tǒng)廣泛表達，而且其與PTTH 在兩簇背神經(jīng)分泌細胞及多處神經(jīng)纖維中呈現(xiàn)共表達模式，推測家蠶A 亞型可能調(diào)節(jié)PTTH 神經(jīng)分泌細胞中PTTH 激素的釋放。Clark 等(2005)利用商品化單克隆抗體m35 (Argene，Varilhes，F(xiàn)rance 10-217)對煙草天蛾Manduca sexta 觸角發(fā)育過程中M型受體的表達進行了組織學定位研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)M 型受體蛋白不僅限于神經(jīng)元表達，而且在神經(jīng)膠質(zhì)細胞和表皮細胞均有表達。發(fā)育了4-5 d 的成蟲該受體主要分布于觸角神經(jīng)的軸突位置，發(fā)育4-9 d，上皮細胞基部的感覺神經(jīng)元胞體具有較強的陽性反應(yīng)，說明神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞間膽堿的通訊可能調(diào)節(jié)著軸突的延伸。而即將分化為表皮細胞的上皮細胞上存在膽堿能系統(tǒng)可能與表皮的形成相關(guān)。擬黑多刺蟻P.vicina mAchR mRNA 不僅表達于成蟲的腦部神經(jīng)系統(tǒng)，而且在卵期及幼蟲整個發(fā)育階段均有表達，說明mAchR可能參與了昆蟲發(fā)育行為(呂淑敏等，2010)。對腦部的mAchR mRNA 原位雜交定位研究發(fā)現(xiàn)，其在各個品級螞蟻腦部廣泛表達。除了蕈形體萼部和領(lǐng)部陽性反應(yīng)比較弱外，其他部位均有陽性神經(jīng)元胞體和神經(jīng)纖維存在，并呈現(xiàn)不同的表達模式，其中以腦部蕈形體、視葉和嗅葉的陽性反應(yīng)最強，推測M 型受體可能參與視覺和嗅覺信息的獲取與整合(Lü et al.，2011)。以上結(jié)果說明，M型受體A 亞型廣泛存在于昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)，不僅于神經(jīng)元表達，而且在神經(jīng)膠質(zhì)細胞和上皮細胞中均有表達，生理功能除了調(diào)節(jié)神經(jīng)生理活動，還參與神經(jīng)元軸突的延伸，表皮的形成及激素的釋放，昆蟲發(fā)育等，但其具體調(diào)節(jié)機制還需深入研究。RNAi 技術(shù)在昆蟲基因功能研究中已經(jīng)很成熟，今后結(jié)合RNAi 技術(shù)進一步開展昆蟲M 型受體功能研究將是一個重要的方向。

3 昆蟲M 型受體的藥理學分析及信號轉(zhuǎn)導途徑

圖1 昆蟲mAchR 分子進化樹(Mega 5.0)Fig.1 Phylogenetic tree of insects mAchR (Mega 5.0)

關(guān)于昆蟲M 型受體的藥理學分析主要從以下兩個方面展開，一是蟲體藥理學方法，即給蟲體注射M 型受體通路的激動劑或拮抗劑，觀察對蟲體的影響，進而分析功能。二是細胞藥理學方法，將M 型受體通過表達載體導入細胞，通過M 型受體的激動劑和拮抗劑檢測其胞內(nèi)的信號通路。目前僅有果蠅和T.castaneum A 亞型及B 亞型細胞藥理學研究報導。藥理學分析認為果蠅DM1 的藥理學特征與脊椎動物M1 和M3 相似(Blake et al.，1993;Millar et al.，1995;Aizono et al.，1997;Collin et al.，2013)，將DM1 基因異源表達于不同的脊椎動物細胞及果蠅S2 細胞系，被激動劑激活后可以促進胞內(nèi)Ca2+和IP3 的積累 (Reaper et al.，1998;Cordova et al.，2003;Collin et al.，2013)。氨甲酰膽堿 (Carbamylcholine，CCh)和氧化震顫素oxotremorine 是果蠅DM1 的潛在激動劑，而適用于脊椎動物M1 受體的激動劑McN-A-343 反應(yīng)很弱。當S2-DM1 受體被CCh 激活后，胞內(nèi)Ca2+濃度上升(Cordova et al.，2003)。說明果蠅DM1 的信號轉(zhuǎn)導途徑與脊椎動物M 型受體Ⅰ類相似，通過磷脂酸肌醇系統(tǒng)，最終使胞內(nèi)第二信使Ca2+濃度上升。而昆蟲B 亞型可被乙酰膽堿激活并使胞內(nèi)Ca2+濃度上升，但不被M 受體通用拮抗劑所拮抗(Collin et al.，2013)。有關(guān)B 亞型的藥理學研究還需進一步開展，通過計算機輔助藥物設(shè)計進行高通量篩選將是一個重要方向。

對蜜蜂蟲體藥理學研究發(fā)現(xiàn)，給蜜蜂食用毛果蕓香堿和毒蕈堿將導致腦部神經(jīng)纖維網(wǎng)體積增大，其效果與已訓練一周具有覓食經(jīng)驗的工蜂類似，該效果可被一種毒蕈堿拮抗劑東莨菪鹼scopolamine 所抵消。結(jié)合行為訓練和組織學分析表明，M 型受體的激活與蜜蜂腦部的可塑性相關(guān)，可以誘導神經(jīng)元細胞內(nèi)基因的表達從而影響經(jīng)驗依賴性的學習記憶行為(Ismail et al.，2006;Guez et al.，2010)。雄性蝗蟲腦部中央復合體內(nèi)小劑量注射毒蕈堿激動劑時，將導致其鳴聲更尖銳且持續(xù)時間更長，而伴隨這發(fā)聲的間隔縮短，而且毒蕈堿誘導的發(fā)聲可被腺苷酸環(huán)化酶的兩種抑制劑2-5-dideoxyadenonsine、SQ22536 和PKA 的兩種抑制劑U-73122、neomycin 所抑制。在注射毒蕈堿有效的腦部部位注射3-isobuty-1-methylxanthine、腺苷酸環(huán)化酶和PKA 的催化劑forskolin 時，同樣也能激起鳴聲 (Heinrich et al.，2001;Wenzel et al.，2002;Hoffmann et al.，2007;)。說明昆蟲M 型受體可以調(diào)節(jié)蝗蟲的鳴聲，而且AC/cAMP/PKA 和PLC/IP3/diacylglycerine 傳導通路是M 型受體興奮傳導所必需的，與果蠅DM1 受體信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)研究結(jié)果一致。

昆蟲膽堿能神經(jīng)傳遞是當前殺蟲劑的一個主要靶標，其機理是抑制乙酰膽堿酯酶或異常激活/抑制N 型受體起到殺蟲效果。學者們對果蠅和家蠅M 型受體的研究中發(fā)現(xiàn)存在一些激動劑或抑制劑可以中強度的殺滅昆蟲(Miller et al.，1991;Reaper et al.，1998)，并提出毒蕈堿型乙酰膽堿受體是殺蟲劑的一個潛在靶標。Honda 等 (2007)等利用哺乳動物M 型受體信號通路的8種激動劑和11種拮抗劑對果蠅和家蠅進行藥理學篩選研究，發(fā)現(xiàn)有部分激動劑和拮抗劑可以明顯影響家蠅和果蠅的行為，并提出以M 型受體為靶標的殺蟲劑可以避免已有殺蟲劑所帶來的交叉抗藥性。但目前市場上還沒有商業(yè)化的以M 型受體為靶標的殺蟲劑，有關(guān)昆蟲M 型受體在殺蟲劑方面的應(yīng)用還有待于進一步研究。

4 小結(jié)與展望

M 型受體是昆蟲膽堿能受體研究中的一個薄弱環(huán)節(jié)。前人基于已克隆獲得的果蠅DM1 序列，主要展開以下兩個方面的研究:一是根據(jù)果蠅DM1 序列制備多克隆抗體，在多種昆蟲中進行組織定位即生理學功能方面的研究;二是根據(jù)脊椎動物M 型受體的激動劑和拮抗劑，進行藥理學特性方面的研究。這些研究證實昆蟲M 型受體與其體內(nèi)的N 型受體類似，在昆蟲體內(nèi)起著重要作用，調(diào)節(jié)昆蟲的多種行為活動;從藥理學角度驗證昆蟲體內(nèi)也存在多種亞型的M 受體，目前從分子方面已驗證昆蟲中存在A 亞型和B 亞型兩種受體，但B 亞型2013年剛發(fā)現(xiàn)，對其研究甚少。昆蟲M 型受體的研究遠遠落后于N 型受體，主要體現(xiàn)在:(1)GenBank 中實驗驗證獲得M 型受體的基因數(shù)據(jù)缺乏;(2)M 型受體的分型情況尚未了解清楚;(3)生理功能研究認為M 型受體參與昆蟲多種行為活動，但其作用機理及信號轉(zhuǎn)導途徑還需進一步研究;(4)M 型受體作為殺蟲劑的一個潛在靶標，目前市場上還未有商品化的以此為靶標的農(nóng)藥存在。因此，加強對昆蟲M 型受體分子機制、信號轉(zhuǎn)導途徑及藥理學方面的研究，有助于全面深入地了解昆蟲膽堿的神經(jīng)傳遞機制，特別是無脊椎動物中獨有的B 亞型，對其功能研究將為發(fā)現(xiàn)新的殺蟲作用靶標，創(chuàng)制新的殺蟲劑提供新思路。

References)

Abreu-Villa?a Y，F(xiàn)ilgueiras CC，Manh?es AC.Developmental aspects of the cholinergic system ［J］.Behav.Brain.Res.，2011，221:367-378.

Aizono Y，Endo Y，Sattelle DB，et al.Prothoracicotropic hormone-producing neurosecretory cells in the silkworm，Bombyx mori，express a muscarinic acetylcholine receptor ［J］.Brain Res.，1997，763:131-136.

Barbara GS，Grünewald B，Paute S，et al.Study of nicotinic acetylcholine receptors on cultured antennal lobe neurones from adult honeybee brains ［J］.Invert.Neurosci.，2008，8:19-29.

Blake AD，Anthony NM，Chen HH，et al.Drosophila nervous system muscarinic acetylcholine receptor:transient functional expression and localization by immunocytochemistry ［J］.Mol.Pharmacol.1993，44:716-724.

Breer H.Properties of putative nicotinic and muscarinic cholinergic receptors in the central nervous system of Locusta Migratoria ［J］.Neurochem.Int.，1981，3:43-52.

Clark J，Meisner S，Torkkeli PH.Immunocytochemical localization of cholineacety transferase and muscarinic Ach receptors in the antenna during development of the sphinx moth Manduca sexta ［J］.Cell Tissue Res.，2005，320:163-173.

Collin C，Hauser F，de Valdivia EG，et al.Two types of muscarinic acetylcholine receptors in Drosophila and other arthropods ［J］.Cell Mol.Life Sci.，2013，DOI 10.1007/s00018-013-1334-0.

Cordova D，Raymond DV，Sattelle DB，et al.Spatiotemporal calcium signal in a Drosophila melanogaster cell line stably expressing a Drosophila muscarinic acetylcholine receptor ［J］.Invert.Neurosci.，2003，5:19-28.

Eglen RM，Chopin A，Dillon MP，et al.Muscarinic receptor ligands and their therapeutic potential ［J］.Curr.Opin.Chem.Biol.，1999，4:426-432.

Eglen RM，Choppin A，Watson N，Therapeutic opportunities from muscarinic receptor research ［J］.Trends Pharmacol.Sci.，2001，22:409-414.

Goodearl，Andrew DJ.Nucleic acids encoding muscarinic receptors and uses therefor ［P］.United States Patent，5882893.March 16，1999.

Guez D，Zhu H，Zhang SW，et al.Enhanced cholinergic transmission promotes recall in honeybees ［J］.J.Insect Physiol.，2010，56:1341-1348.

Hannan F，Hall LM.Muscarinic acetylcholine receptors in invertebrates:comparison with homologous receptors from vertebrates ［C］.In:Comparative Molecular Neurobiology.1993，Basel:Birkh¨auser，pp:98-145.

Harrison JB，Sattelle DB，Schaffer S，et al.Immunocyto-chemical localization of muscarinic acetylcholine receptors in antenal lobe glomeruli of Drosophila and Apis mellifera ［J］.J.Physiol.，1995，6:485-311.

Harvey RD.Muscarinic receptor agonists and antagonists:effects on cardiovascular function ［J］.Hanb.Exp.Pharmacol.，2012，208:299-316.

Heck C，Kunst M，H?rtel K，et al.In vivo labeling and in vitro characterisation of central complex neurons involved in the control of sound production ［J］.J.Neurosci.Methods.，2009，183:202-212.

Heinrich R，Wenzel B，Elsner N.A role for muscarinic excitation:control of specific singing behavior by activation of the adenylate cyclase pathway in the brain of grasshoppers ［J］.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，2001，98:9919-9923

Honda H，Tomizawa M，Casida JE.Insect muscarinic acetylcholine receptor:pharmacological and toxicological profiles of antagonists and agonists ［J］.J.Agric.Food Chem.，2007，55:2276-2281.

Hoffmann K，Wirmer A，Kunst M，et al.Muscarinic excitation in grasshopper song control circuits is limited by acetylcholinesterase activity ［J］.Zoolog.Sci.，2007，24:1028-1035.

Ismail N，Robinson GE，F(xiàn)ahrbach SE.Stimulation of muscarinic receptors mimics experience-dependent plasticity in the honey bee brain ［J］.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，2006，103:207-211.

Kohn EC，Alessandro R，Probst J，et al.Identification and molecular characterization of a M5 muscarinic receptor in A2058 human melanoma cells.coupling to inhibition of adenylyl cyclase and stimulation of phospholiase A2 ［J］.J.Biol.Chem.，1996，271:17476-17484.

Lü SM，Jiang M，Pu CP，et al.Real-time quantitative RT-PCR detection for developmental expression of a muscarinic cholinergic receptor gene in the ant Polyrhachis vicina ［J］.Journal of Northwest A ＆ F University (Nat.Sci.Ed.)，2010，38:161-166.［呂淑敏，姜鳴，卜翠萍，等.擬黑多刺蟻mAchR 基因發(fā)育表達的熒光實時定量RT-PCR 檢測［J］.西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版)，2010，38:161-166］

Lü SM，Zhao Z，Zhang YL，et al.Cloning and expression analysis of a muscarinic cholinergic receptor from the brain of ant，Polyrhachis vicina ［J］.Arch.Insect Biochem.Phys.，2011，78:46-60.

Millar NS，Baylis HA，Reaper C，et al.Functional expression of a clonedDrosophila muscarini acetylcholine receptor in a stable Drosophila cell line ［J］.J.Exp.Biol.，1995，198:1843-1850.

Miller JH，Gibson VA，McKinney M.Binding of［3H］-AF-DX 384 to cloned and native muscarinic receptors ［J］.J.Pharmacol.Exp.Ther.，1991，259:601-607.

Oliveira EE，Pippow A，Salgado VL，et al.Cholinergic currents in leg motoneurons of Carausius morosus ［J］.J.Neurophysiol，2010，103:2770-2782.

Onai T，F(xiàn)itzgerald MG，Arakawas S，et al.Cloning，sequence and chromosomal localization of a Drosophila muscarinic acetylcholine receptor ［J］.FEBS Lett.，1989，255:219-225.

Reaper CM，F(xiàn)anelli F，Buckingham SD，et al.Antagonist profile and molecular dynamic simulation of a Drosophila melanogaster muscarinic acetylcholine receptor ［J］.Receptors Channels.，1998，5:331-345.

Resende RR，Adhikari A，Cholinergic receptor pathways involved in apoptosis，cell proliferation and neuronal differentiation ［J］.Cell Commun.Signal.，2009，7:20.

Richards MH.Pharmacology and second messenger interactions of cloned muscarinic receptors ［J］.Biochem.Pharmacol.，1999，42:1645-1653.

Shang QL，Liang P，Gao XW.Molecular cloning and sequence analysis of nicotinic acetylcholine receptor β1 subunit from Spodoptera exigua(Hübner)［J］.Journal of Environmental Entomology，2009，31:197-202.［尚慶利，梁沛，高希武.甜菜夜蛾煙堿型乙酰膽堿受體β1 亞基基因的克隆與序列分析［J］.環(huán)境昆蟲學報，2009，31:197-202］

Stefan D，Chris J，Van K.Muscarinicreceptor in mammalian heart ［J］.Pharmacol.Res.，2001，44:161-182.

Tobin G，Giglio D，Lundgren O.Muscarinic receptor subtypes in the alimentary tract ［J］.J.Physiol.Pharmacol.，2009，60:3-21.

Yu HL，Xiao Y，Ai J，et al.Relationship between muscarinic acetylcholine receptor subtypes ［J］.Hereditas，2007，29 (10):1280-1288.［于海龍，肖云，艾靜，等.毒蕈乙酰膽堿受體亞型關(guān)系的研究［J］.遺傳，2007，29 (10):1280-1288］

Wang H，Guo ZD，Li Z.Signal transduction between muscarinic acetylcholine receptors and GTP-binding proteins ［J］.Progress in Physiological Sciences，2002，33:230-234.［王昊，郭政東，李智.毒蕈堿樣乙酰膽堿受體及其信號轉(zhuǎn)導［J］.生理昆蟲進展，2002，33:230-234］

Wenzel B，Elsner N，Heinrich R.mAChRs in the grasshopper brain mediate excitation by activation of the AC/PKA and the PLC second-messenger pathways ［J］.J.Neurophysiol.，2002，87:876-888.

Wright MC，Potluri S，Wang X，et al.Distinct muscarinic acetylcholine receptor subtypes contribute to stability and growth，but not compensatory plasticity，of neuromuscular synapses ［J］.J.Neurosci.，2009，29:14942-14955.9

Zhao Y，Yang YH，Wu SW，et al.Cloning sequence analysis and developmental expression of a cDNA encoding nicotinic acetylcholine receptor α subunit from Plutella xylostella (L.)(Lepidoptera:plutellidae)［J］.Acta Entomologica Sinica，2009，52:17-26.［趙宇，楊亦樺，武淑文，等.小菜蛾煙堿型乙酰膽堿受體α 亞基cDNA 的克隆、序列分析與不同發(fā)育階段表達分析［J］.昆蟲學報，2009，52:17-26］