方圣博 謝湘林 劉 蕾 杜 冰 劉宏雁 (吉林大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室，吉林 長春 130021)

血栓心脈寧是由丹參、川芎、毛冬青、水蛭、槐花、麝香、冰片、牛黃、人參莖葉皂苷、蟾酥等多種中藥材制成的純中藥制劑，具有芳香開竅、活血散瘀的作用，臨床上主要用于治療腦梗死、冠心病、心絞痛等疾病。臨床觀察顯示，血栓心脈寧通過減緩能量代謝、提高腦組織耐缺氧能力、促進(jìn)建立腦血管側(cè)支循環(huán)、改善腦部微循環(huán)，防治局部及全腦缺血所致的腦組織損傷，減少壞死面積，恢復(fù)缺血所致病變的神經(jīng)功能〔1，2〕。血栓心脈寧對血管性癡呆(VD)是否有治療作用，國內(nèi)文獻(xiàn)未見報道。本實驗擬探討血栓心脈寧是否對VD大鼠有治療作用，為擴(kuò)大其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物 清潔級Wistar大鼠，雌雄各半，220～250 g，合格證號SCXK-(吉)2007-0003，由吉林大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2 實驗藥品及儀器 血栓心脈寧(吉林華康藥業(yè)股份有限公司提供，批號:110901);Morris水迷宮裝置:成都泰盟科技有限公司。

1.3 實驗方法 采用永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈法制作VD模型，將術(shù)后14 d大鼠按體重分為假手術(shù)組、模型組及血栓心脈寧組(1.1、2.2 g/kg)。連續(xù)灌胃給藥8 w后進(jìn)行水迷宮實驗，實驗期間繼續(xù)給藥。水迷宮實驗連續(xù)7 d，前6 d在1、2、3、4象限4個不同的入水點，測定大鼠到達(dá)平臺的潛伏期、游程、朝向角及平均速度;第7天撤掉平臺，測定大鼠在2 min內(nèi)經(jīng)過平臺的次數(shù)、經(jīng)過有效區(qū)的次數(shù)、平臺停留時間、平臺停留距離、有效區(qū)停留時間、有效區(qū)停留距離、平臺停留時間占總時間的百分比、平臺停留距離占總路程的百分比、有效區(qū)停留時間占總時間的百分比和有效區(qū)停留距離占總路程的百分比。水迷宮實驗后，快速取鼠腦，甲醛固定，做病理切片，觀察大腦皮層、海馬的病理變化。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS13.7統(tǒng)計學(xué)軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 Morris水迷宮實驗 與模型組比較，血栓心脈寧小劑量組(1.1 g/kg)大鼠第2、5 天到達(dá)平臺的潛伏期縮短(P＜0.01，P＜0.05)、到達(dá)平臺的游程縮短(P＜0.05)，第1 ～6 天到達(dá)平臺的朝向角和游泳速度均無顯著變化。血栓心脈寧大劑量組(2.2 g/kg)大鼠第2～6天到達(dá)平臺的潛伏期縮短(P＜0.05)，第1～6天到達(dá)平臺的游程明顯縮短(P＜0.05)，第1～6天到達(dá)平臺的游泳速度無顯著變化，第3天到達(dá)平臺的朝向角變小(P＜0.05)。血栓心脈寧小、大劑量組大鼠第7天在2 min內(nèi)經(jīng)過平臺的次數(shù)、經(jīng)過有效區(qū)的次數(shù)、平臺停留時間、平臺停留距離、有效區(qū)停留時間、有效區(qū)停留距離、平臺停留時間占總時間的百分比、平臺停留距離占總路程的百分比、有效區(qū)停留時間占總時間的百分比和有效區(qū)停留距離占總路程的百分比均無顯著變化。見表1～表5。

2.2 病理變化 血栓心脈寧小、大劑量組海馬神經(jīng)細(xì)胞數(shù)無明顯減少，細(xì)胞變性、壞死、空泡現(xiàn)象較模型組輕，無明顯核固縮、深染現(xiàn)象;血栓心脈寧小、大劑量組大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞數(shù)無明顯減少，核固縮、深染及嗜神經(jīng)細(xì)胞現(xiàn)象較模型組減少。血栓心脈寧大劑量組效果更為明顯。見圖1。

表1 血栓心脈寧對大鼠水迷宮平臺潛伏期的影響(s，s)

表1 血栓心脈寧對大鼠水迷宮平臺潛伏期的影響(s，s)

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;下表同

組別 n 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天假手術(shù)組 11 58.24±20.701) 25.95±10.392) 19.58±13.571) 9.20±6.042) 7.73±4.442) 7.06±3.102)模型組 11 82.89±27.19 72.22±37.78 49.31±39.53 45.44±38.53 26.36±21.19 15.01±8.42小劑量組 13 68.77±28.94 34.94±23.562) 27.86±20.99 21.90±21.67 11.99±7.181) 13.00±10.73大劑量組 11 61.87±22.18 35.75±21.091) 20.28±10.851) 18.58±15.541) 12.25±5.851) 8.84±4.981)

表2 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗游程的影響(cm，s)

表2 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗游程的影響(cm，s)

組別 n 第1天6天假手術(shù)組 11 1 484.81±453.521)762.57±326.502) 499.63±336.361) 280.00±178.361) 235.00±130.931) 240.35±93.701)模型組 11 2 216.03±1001.72 1 953.00±1257.04 1 481.05±1 199.36 1 246.91±1 223.94 759.84±668.31 558.94±460.92小劑量組 13 1 597.25±665.16 928.49±557.271) 762.03±669.94 641.85±757.85 332.51±183.321) 375.28±341.78大劑量組 11 1 508.72±394.351)835.97±363.611) 518.98±298.381) 416.20±335.041) 305.21±160.461) 253.67±91.471)

表3 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗朝向角的影響(°，s)

表3 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗朝向角的影響(°，s)

組別 n 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天假手術(shù)組 11 32.33±12.49 49.60±16.05 46.21±13.40 51.30±23.44 38.17±19.49 46.35±26.61模型組 11 22.90±10.29 50.61±24.14 56.06±21.22 59.65±20.56 51.05±19.60 50.17±29.91小劑量組 13 26.38±11.35 37.40±20.58 50.91±23.29 50.57±23.04 53.24±24.15 33.81±19.06大劑量組 11 25.35±9.60 52.09±19.39 35.81±20.661) 49.00±18.781)48.07±36.61 48.79±48.68

表4 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗平均速度的影響(cm/s，s)

表4 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗平均速度的影響(cm/s，s)

組別 n 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天假手術(shù)組 11 29.90±6.66 32.94±10.48 31.69±6.83 30.10±6.13 38.17±19.49 46.35±26.61模型組 11 28.04±4.25 29.25±6.83 27.05±3.60 26.69±3.39 51.05±19.60 50.17±29.91小劑量組 13 25.50±5.50 30.87±6.40 29.44±5.12 26.71±5.15 53.24±24.15 33.81±19.06大劑量組 11 26.78±7.14 27.29±6.24 28.88±5.20 27.25±7.06 48.07±36.61 48.79±48.68

表5 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗第7天的影響(s)

表5 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗第7天的影響(s)

組別 n 經(jīng)過平臺次數(shù) 經(jīng)過有效區(qū)次數(shù) 平臺停留距離(cm)平臺停留時間(s)有效區(qū)停留距離(cm)假手術(shù)組 11 6.63±2.761) 10.54±2.58 75.08±40.92 2.86±1.82 797.56±214.45模型組 11 3.90±2.66 9.54±3.72 52.43±38.80 2.13±1.66 653.05±298.00小劑量組 13 4.66±2.67 10.91±4.01 52.27±37.70 2.12±1.54 683.20±269.02大劑量組 11 3.54±2.42 10.00±2.89 42.83±29.79 1.85±1.29 601.49±212.44組別 n 有效區(qū)停留時間(s)平臺停留時間/總時間(100%)有效區(qū)停留時間/總時間(100%)有效區(qū)停留距離/總路程(100%)平臺停留距離/總路程(100%)假手術(shù)組 11 31.43±11.81 2.40±1.53 26.41±9.94 28.53±8.79 2.90±1.53模型組 11 25.94±13.18 1.79±1.41 21.91±11.13 24.09±11.30 2.08±1.67小劑量組 13 28.50±11.11 1.79±1.30 24.10±9.41 26.11±9.99 1.99±1.41大劑量組 11 24.78±8.85 1.56±1.09 20.97±7.42 23.54±7.93 1.68±1.30

圖1 各組大鼠腦組織病理學(xué)改變(HE，×20)

3 討論

VD最重要的癥狀之一是學(xué)習(xí)記憶功能障礙。在行為學(xué)研究方面，Morris水迷宮目前被廣泛地應(yīng)用于檢查動物空間學(xué)習(xí)與記憶能力〔3～5〕。Morris水迷宮測試程序主要分為定位航行試驗和空間探索試驗兩部分〔3，6〕，其中定位航行試驗檢測動物空間學(xué)習(xí)能力，空間探索試驗主要考察大鼠對原平臺的記憶能力。有研究顯示〔6〕，大鼠通過多次訓(xùn)練學(xué)會找到隱蔽平臺，所形成的記憶是一種空間參考記憶，與平臺的位置、大鼠自身所處的位置和狀態(tài)無關(guān)，是一種以異我為參照點的參考認(rèn)知。本實驗結(jié)果明血栓心脈寧可改善VD大鼠空間學(xué)習(xí)能力。

完整的海馬結(jié)構(gòu)對于空間學(xué)習(xí)是至關(guān)重要的。有報道〔5〕稱損害背側(cè)1/3的海馬會導(dǎo)致嚴(yán)重的空間記憶障礙。海馬CA1區(qū)遲發(fā)性神經(jīng)元死亡后動物表現(xiàn)出空間學(xué)習(xí)障礙。缺血缺氧可導(dǎo)致海馬結(jié)構(gòu)的變化，趙霞等〔7〕通過電鏡檢查指出低氧對海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能有一定的損傷作用，導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶下降。本實驗病理結(jié)果顯示，血栓心脈寧可減輕VD大鼠皮層及海馬的病理損害。

腦內(nèi)膽堿系統(tǒng)及自由基與學(xué)習(xí)記憶功能關(guān)系密切。川芎為血栓心脈寧的主要成分，有研究〔8〕報道，阿魏酸(川芎的主要成分)通過抑制缺血性腦損傷后AChE的活性、增加SOD的活性、降低MDA含量，改善VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。丹參也是血栓心脈寧的重要組成成分之一，索國玲等〔9〕發(fā)現(xiàn)復(fù)方丹參注射液可明顯縮短大鼠Morris水迷宮定向航行實驗潛伏期，增加有效區(qū)停留時間，并增加腦內(nèi)AChE、ChAT活性，提示丹參可能通過提高中樞膽堿能系統(tǒng)改善學(xué)習(xí)記憶功能。本研究證實血栓心脈寧對血管性癡呆有一定治療作用，作用機(jī)制可能與減少VD腦組織自由基損傷、提高腦膽堿能系統(tǒng)有關(guān)，其確切機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

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