張文藝，陳 晶，鄧 文，陳 萍，周新程

（常州大學(xué) 環(huán)境與安全工程學(xué)院，江蘇 常州 213164）

反硝化聚磷菌（denitrifying poly－phosphate accumulating microorganisms，DNPAOs）是一類既以氧為電子受體又以硝酸鹽為電子受體聚磷的菌群。在厭氧環(huán)境中DNPAOs釋放體內(nèi)的多聚磷酸鹽顆粒（Poly－P）獲得能量吸收水體中的揮發(fā)性脂肪酸，將其儲存為聚羥基脂肪酸酯（PHA）；在好氧（缺氧）環(huán)境中再消耗PHA，以氧氣或硝酸鹽為電子受體吸收水中的磷，并在菌株體內(nèi)再次合成Poly－P［1］，所以菌株體內(nèi)Poly－P分解與合成在DNPAOs同步脫氮除磷中處于核心地位。針對DNPAOs的富集、分離和除磷特性已有大量研究，如Chaudhry等［2］考察各種碳源和氮源影響，制得一種PAM培養(yǎng)基用于篩選環(huán)境樣品中的聚磷菌，Ahn等［3］在厭氧階段初期投加少量NO3－有利于DNPAOs的富集，且將電子受體由氧氣轉(zhuǎn)變?yōu)镹O3－有利于DNPAOs缺氧吸磷的活力。Weissbrodt等［4］研究了在生物膜中的聚磷菌Accumulibacter和聚糖菌Competibacter富集觸發(fā)因素有pH、溫度和氧化還原電位，當(dāng)pH大于7.3、溫度小于20℃和充分好氧時會使聚磷菌成為優(yōu)勢菌種。而在Lanham［5］研究中指出從抑制聚糖菌生長來富集聚磷菌可能會降低聚磷菌的除磷效能，其原因在于聚磷菌存在代謝系統(tǒng)的易變性，聚磷菌的代謝途徑分為糖酵解和三羧酸循環(huán)，聚糖菌的存在有利于聚磷菌利用糖酵解進(jìn)行代謝從而具有更高的除磷效率。

中國污水處理廠多采用氧化溝和A2／O工藝，在原理上有利于聚磷菌發(fā)揮其效能，但多數(shù)污水處理廠均不同程度存在磷去除率不高的問題，其原因在于聚磷菌與硝化菌、聚糖菌等存在碳源競爭，若聚磷菌在活性污泥中失去種群優(yōu)勢，則活性污泥中的聚磷菌很難大量繁殖。污水處理廠為確保出水達(dá)標(biāo)排放，只得采用投加大量的化學(xué)藥劑［6］，但這又會帶來成本過高和污泥量增加的問題，最終造成運(yùn)行成本過高，尤其是采用BOT模式建造的污水處理廠更是苦不堪言。

目前，對于DNPAOs的研究處于起步階段，中國已篩得大量反硝化聚磷菌的報道，其大多研究［6－10］將富氮磷培養(yǎng)基作為模擬廢水，DNPAOs接種于培養(yǎng)基中改變培養(yǎng)基的pH、溫度、溶解氧等，得到菌株在培養(yǎng)基中攝取氮磷量最高時的處理?xiàng)l件。任世英等［7］提出了利用△OD480及其形成的多聚磷酸鹽菌體比例2項(xiàng)指標(biāo)來描述海洋聚磷菌（Halomonas YSR－3）的除磷特性，但在 DNPAOs菌株P(guān)oly－P培育、菌劑種子液制備以及實(shí)際污水處理應(yīng)用方面的研究鮮有報道。因此，從聚磷菌除磷機(jī)理出發(fā)，以提高反硝化聚磷菌體內(nèi)的Poly－P含量為目標(biāo)，從安徽省天長市污水處理廠具有較高除磷效率（70%～80%）活性污泥中獲取的反硝化聚磷菌進(jìn)行優(yōu)化培養(yǎng)，對菌劑發(fā)酵使用的種子液制備條件做了初步探究，以期為反硝化聚磷菌菌劑制備與發(fā)酵法批量化生產(chǎn)提供技術(shù)參考和理論依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 以BOT方式運(yùn)營的安徽省天長市城市污水處理廠經(jīng)過近3a反復(fù)培養(yǎng)馴化活性污泥和工藝優(yōu)化，其出水TP全年達(dá)到《城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標(biāo)準(zhǔn)》（GB 18918—2002）一級A標(biāo)準(zhǔn)。筆者以該廠采自氧化溝外溝活性污泥為菌源，分離得到具有反硝化功能的聚磷菌B8（本實(shí)驗(yàn)室命名，且已送中國科學(xué)院微生物研究所菌種保藏中心保藏，保藏編號為CGMCC NO.9168），通過生理生化測試和DNA測序鑒定為惡臭假單胞菌屬（Pseudomonas putida）。B8菌株具有多聚磷酸鹽顆粒和聚－β－羥丁酸（PHB）顆粒，同時又具有反硝化產(chǎn)氣功能，在富磷氮培養(yǎng)基中具有明顯同步脫氮除磷性能。對B8平板培養(yǎng)2d后，觀察其生長狀況良好，長成直徑為1.28mm，白色，不透明，邊緣光滑，表面凸起，具有粘性和臭味的圓形菌落，培養(yǎng)48h后菌株變黃。對其進(jìn)行生理生化特性測定，革蘭氏染色、乙酰甲基醇（V.P）、甲基紅（M.R）、淀粉水解和葡萄糖發(fā)酵皆為陰性，接觸酶、明膠水解、葡萄糖氧化和產(chǎn)硫化氫均為陽性。

1.1.2 培養(yǎng)基 PAM高磷含量聚磷菌培養(yǎng)基：（NH4）2SO42.75g／L，Na2HPO430.6g／L，KH2PO43g／L，MgSO4·7H2O 0.25g／L，CaCl20.25g／L，檸檬酸鈉 4.0g／L，NaCl 2.5g／L，蔗糖0.01g／L，瓊脂粉20g／L［2］。聚磷菌種子培養(yǎng)液即為PAM中不加瓊脂，其用于菌劑種子的培養(yǎng)。

PAM－TBO多聚磷酸鹽顆粒染色培養(yǎng)液：1L的聚磷菌種子培養(yǎng)液中加入0.025g甲苯胺藍(lán)。其作用為菌株內(nèi)多聚磷酸鹽顆粒含量的表征，有目的地培育內(nèi)含高含量 Poly－P菌株［2］。

NB培養(yǎng)基：蛋白胨10g／L，牛肉膏3g／L，NaCl 5g／L，pH 7.2～7.4［11］。其作用為監(jiān)測菌株的生長情況，即OD600的測定。

滅菌條件：1.03×105Pa，121℃，20min。

1.2 方法

1.2.1 多聚磷酸鹽顆粒染色培育方法 依據(jù)Vasvi Chaudhry快速鑒定聚磷菌方法［2］，將菌株接種于液體PAM中，設(shè)置3個平行樣，對菌株進(jìn)行不同培養(yǎng)條件下的培養(yǎng)制得反硝化聚磷菌菌劑種子液，再加入發(fā)酵菌液體積2%的PAM－TBO，置于30℃下靜置避光染色24h，按同樣的操作制作空白。對種子液和空白經(jīng)8000r／min離心15min，對上清液分別在625nm處測定其吸光度，以此來表征多聚磷酸鹽顆粒在種子液中的含量。

式中：A0為未接菌菌液在PAM－TBO于625nm處的吸光度，A；A為接菌后菌液在PAM－TBO于625nm處的吸光度，A。

1.2.2 種子液除磷實(shí)驗(yàn) 將用無菌水4000r／min離心15min清洗2～3次后的B8菌劑種子液按10%接菌量投加至高溫蒸汽滅菌后的污水（取自江蘇省常州市馬杭污水處理廠格柵前進(jìn)水口，水質(zhì)為CODCr267.2～274.4mg／L，TP 4.0～4.5mg／L，NO3－—N 35.0～36.5mg／L）后，分別進(jìn)行厭氧－好氧流程和厭氧－缺氧流程處理。厭氧－好氧流程和厭氧－缺氧流程具體操作為：將加了菌的水樣置于密閉容器中充入氮?dú)夂螅糜?0℃中轉(zhuǎn)子30r／min攪拌4h，此為厭氧處理；再將水樣置于敞口容器中預(yù)曝氣充氧后再持續(xù)攪拌12h（30℃、160r／min），相當(dāng)于正常好氧狀態(tài)下溶解氧的79%～95%，此為好氧處理；缺氧處理為將水樣置于敞口容器中進(jìn)行間歇低速攪拌12h（每隔55min低速60r／min、30℃攪拌5min）其中的溶解氧相當(dāng)于正常好氧狀態(tài)下溶解氧的24%～46%［12］，兩流程中的厭氧處理操作相同。處理后每隔1h取水樣，再將水樣離心（8000r／min，15min）取上清液，分別對水樣中的TP、NO3－—N測定來連續(xù)追蹤脫氮除磷進(jìn)程，同時對處理廢水中的菌株生長量OD600進(jìn)行測定。除磷率、硝酸鹽氮去除率的計算式為

式中：P為除磷率或硝酸鹽氮去除率，%；B0為水樣初始的TP或NO3－—N濃度，mg／L；B為處理后水樣的TP或NO3－—N濃度，mg／L。

1.2.3 種子液中菌株胞外聚合物提取方法 取待處理廢水10%的菌劑種子液進(jìn)行4000r／min離心15min，使用無菌水清洗2次后，重懸至原體積后，使用超聲破碎儀（40W、60s）進(jìn)行超聲破碎，再進(jìn)行冷凍離心（20000r／min、4℃）20min，收集上清液，此即含有菌株的胞外聚合物［8］。

1.2.4 分析方法 1）菌株多聚磷酸鹽顆粒PAMTBO染色率（%）：吸光度法，用721分光光度計在光密度為625nm處測定PAM－TBO靜置避光染色24h后上清液的吸光度值，同時對空白樣的PAMTBO染色后的吸光度值進(jìn)行測量，按式（1）計算［2］。

2）水質(zhì)測定方法依據(jù)國家環(huán)保總局編的《水和廢水監(jiān)測分析方法（第4版）》［13］。其中總磷采用過硫酸鉀消解－鉬銻分光光度法；硝酸鹽氮采用酚二磺酸分光光度法。

3）菌體生長量（A）：吸光度法，用721分光光度計在光密度為600nm處測定吸光度值［6］。

2 結(jié)果與分析

2.1 反硝化聚磷菌B8菌劑的種子液制備條件分析

2.1.1 種子液培育時間 培養(yǎng)時間與菌齡緊密相關(guān)，培養(yǎng)時間過短聚磷菌的多聚磷酸鹽顆粒含量偏低，而過長的培養(yǎng)時間又會導(dǎo)致反硝化聚磷菌出現(xiàn)多聚磷酸鹽顆粒分解的現(xiàn)象，所以培養(yǎng)時間是發(fā)揮反硝化聚磷菌除磷效能的關(guān)鍵因素，也是制備反硝化聚磷菌菌劑的核心因素。將B8菌株接入50mL PAM 中搖培（140r／min、30 ℃、pH 6.5）5～35h后，在分別接入1mL的PAM－TBO靜置避光染色24h后進(jìn)行聚磷菌多聚磷酸鹽顆粒含量評價。由圖1可以看出，B8菌株P(guān)AM－TBO染色率是先快速上升于47.57%，短期穩(wěn)定于56%左右后下降，最后下降于2.46%，這是由于在菌株培育25h時有少量菌株死亡，多聚磷酸鹽顆粒含量下降，其后雖又有菌株繼續(xù)繁殖，但其多聚磷酸鹽顆粒含量不再增加，說明菌株合成多聚磷酸鹽顆粒激酶活力已大大降低，所以B8菌株適宜培養(yǎng)時間應(yīng)為15～20h。

圖1 培養(yǎng)時間對反硝化聚磷菌B8生長的影響

2.1.2 種子液培育溫度 在污水生物處理過程中，微生物衰減包括細(xì)胞死亡和功能性微生物活性的喪失［14］，過高或過低的溫度都不利于反硝化聚磷菌的繁殖與其體內(nèi)多聚磷酸鹽顆粒的培育。將B8菌株接入50mL PAM 中搖培（140r／min、pH 6.5）20h后，再分別接入1mL的PAM－TBO靜置避光染色24h后進(jìn)行聚磷菌多聚磷酸鹽顆粒含量評價，其中考察培養(yǎng)溫度范圍為20～40℃，其結(jié)果如圖2所示。由該圖可以看出，B8菌株P(guān)AM－TBO染色率是先快速上升于56.47%，隨后快速下降，最后下降于6.47%，這是由于在菌株培育溫度太低或太高，菌株不易繁殖，菌體內(nèi)多聚磷酸鹽顆粒含量也較低，即B8除磷活性較低。因此，B8菌株適宜的培養(yǎng)溫度應(yīng)為30～32℃。

圖2 溫度對反硝化聚磷菌B8生長的影響

2.1.3 種子液飽和溶解氧（搖床培育轉(zhuǎn)速） 搖床轉(zhuǎn)速反映了培養(yǎng)液中溶解氧含量，有研究表明：當(dāng)培養(yǎng)液為200mL，在培養(yǎng)的0～48h內(nèi)，搖床轉(zhuǎn)速100r／min，相當(dāng)于55%～74%飽和溶解氧；搖床轉(zhuǎn)速160r／min，相當(dāng)于79%～95%飽和溶解氧［12］。同時，搖床轉(zhuǎn)速也會反映菌株機(jī)械承受力水平，由于在大部分菌劑制備工藝中會采用機(jī)械攪拌來增加氧通量，若反硝化聚磷菌的機(jī)械承受力不強(qiáng)則易自溶破裂，將可能會引起菌劑除磷效能降低的結(jié)果。在該研究中將B8菌株接入50mLPAM中搖培（培養(yǎng)溫度30℃、pH 6.5）20h后，在分別接入1mL的PAM－TBO靜置避光染色24h后進(jìn)行聚磷菌多聚磷酸鹽顆粒含量評價，其中考察搖床轉(zhuǎn)速范圍是80～180r／min，得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。由圖3可以看出，B8菌株P(guān)AM－TBO染色率在搖床轉(zhuǎn)速80～180r／min范圍內(nèi)有一次起伏，在120r／min時PAM－TBO染色率最高為64.83%。在一開始搖床轉(zhuǎn)速設(shè)為80r／min時，B8菌株P(guān)AMTBO染色率僅為19.53%，是由于搖床轉(zhuǎn)速過慢導(dǎo)致培養(yǎng)液營養(yǎng)分布不均勻和供氧量不足使B8菌株多聚磷酸鹽顆粒含量較低。隨著搖床轉(zhuǎn)速的增加，B8菌株P(guān)AM－TBO染色率快速增至64.83%。搖床轉(zhuǎn)速大于120r／min后，B8菌株P(guān)AM－TBO染色率平穩(wěn)降至42.15%，這是由于搖床轉(zhuǎn)速過大致使菌株間的碰撞頻率增加從而減少溶解氧向菌株胞內(nèi)的運(yùn)輸，影響B(tài)8菌株的正常生長和其多聚磷酸鹽顆粒的培育。所以50mL B8菌液適宜搖床培養(yǎng)轉(zhuǎn)速為120～140r／min，即70%至88%飽和溶解氧。

圖3 搖床轉(zhuǎn)速對反硝化聚磷菌B8生長的影響

2.1.4 菌劑種子液培育酸堿度（pH條件） 不同微生物均有適合其生長和發(fā)揮其特殊功能的酸堿度，即pH。在該研究中，將B8菌株接入50mL PAM中搖培（培養(yǎng)溫度30℃；搖床轉(zhuǎn)速120r／min）20h后，再分別接入1mL的PAM－TBO靜置避光染色24h后進(jìn)行聚磷菌多聚磷酸鹽顆粒含量評價，其中考察pH范圍是5.5～8.0，得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。由圖4可知，隨著pH的增加，B8菌株P(guān)AM－TBO染色率快速增至61.03%。pH大于6.5后，B8菌株P(guān)AMTBO染色率緩慢降至24.22%，說明偏酸與偏堿都會對種子液中的B8菌株的繁殖和體內(nèi)多聚磷酸鹽顆粒的合成產(chǎn)生不利影響，而pH對B8菌株體內(nèi)的多聚磷酸鹽顆粒合成的影響程度更大。在偏酸條件下，雖菌體生長量較大，但由于Poly－P是多聚陰離子，較低的pH 會促使菌體內(nèi)Poly－P水解［15］，所以圖4中在pH小于6.5時的PAM－TBO染色率較低。由此可得B8菌劑種子液制備pH條件應(yīng)為6.5～7.0。

圖4 pH對反硝化聚磷菌B8生長的影響

2.2 反硝化聚磷菌B8菌劑種子液除磷特性

在培養(yǎng)溫度為30℃；轉(zhuǎn)速為120r／min；pH 6.5條件下培育20h得到高Poly－P含量的反硝化聚磷菌B8菌劑種子液，對處理廢水量10%的反硝化聚磷菌B8菌劑種子液進(jìn)行清洗后，再將其投加入去除雜菌后的待處理污水中，厭氧處理4h再分別進(jìn)行好氧和缺氧處理12h，其中每隔1h取水樣后測TP和NO3－—N，從而便于對反硝化聚磷菌B8菌劑種子液除磷特性進(jìn)行分析。

2.2.1 好氧聚磷特性 由圖5中可以看出B8具有聚磷菌的厭氧釋磷和好氧超量吸磷的特性，進(jìn)水TP 4.40mg／L經(jīng)4h厭氧釋磷為5.80mg／L，經(jīng)5h好氧處理后TP降為0.26mg／L，隨后少量B8除磷能力下降，使水中TP上升至1.22mg／L。而在好氧除磷過程中，NO3－—N濃度并無明顯變化，其硝酸鹽氮去除率在1.32%至2.13%范圍內(nèi)波動。在厭氧階段聚磷菌會釋磷吸收碳源形成PHA用于菌體儲存能量，在好氧階段會消耗PHA吸收處理水中的磷到菌體內(nèi)形成多聚磷酸鹽顆粒［16］，在B8處理第13h有菌體死亡溶解在水中，菌體的死體增加了水中的碳源，促進(jìn)了其剩下菌體的聚磷活力和繁殖能力，使處理水中的TP有3個小范圍的波動，平均循環(huán)時間為4h，第1個循環(huán)的除磷效率最高，這也可間接證明聚磷菌在先厭氧再好氧條件下的聚磷率高于單純好氧條件下的聚磷率［17］。B8菌株可以在較短的時間內(nèi)發(fā)揮高聚磷能力，且在補(bǔ)給少量碳源后會刺激B8持續(xù)發(fā)揮其聚磷能力，其聚磷率保持在80%左右。綜上所述，所制得的反硝化聚磷菌B8菌劑種子液具有高效的好氧除磷能力，經(jīng)厭氧4h和好氧5h后除磷可達(dá)94.09%，但未見好氧反硝化現(xiàn)象。

圖5 出水總磷濃度及脫氮除磷率的變化

2.2.2 缺氧反硝化脫氮聚磷特性 由圖6中可以看出B8具有反硝化聚磷菌的厭氧釋磷和缺氧超量吸磷的特性，進(jìn)水TP 4.38mg／L經(jīng)4h厭氧釋磷為5.87mg／L，經(jīng)12h缺氧處理后TP降為0.45mg／L，同時進(jìn)水NO3－—N 35.94mg／L也降為16.72mg／L。在缺氧處理前5h硝酸鹽氮去除率與除磷率基本相近，而在此之后由于間歇攪拌使處理廢水中溶解氧逐漸增高，超過了菌株繁殖所需氧量，使菌株吸收水中的磷開始繁殖，所以除磷率開始明顯超過硝酸鹽氮去除率，同時OD600也開始上升。彭趙旭等［9］發(fā)現(xiàn)與水中溶氧相比，NO3－—N作為吸磷過程電子受體時效率偏低。將缺氧除磷與好氧除磷進(jìn)行對比，可以看出缺氧除磷的效率確實(shí)較低，但其具有減少曝氣成本和產(chǎn)泥量少的優(yōu)點(diǎn)。綜上所述，所制得的反硝化聚磷菌B8菌劑種子液具有高效的反硝化除磷能力，經(jīng)厭氧4h和缺氧12h后硝酸鹽氮去除率可達(dá)53.48%、除磷率可達(dá)89.73%。

圖6 出水總磷濃度及脫氮除磷率的變化

2.3 反硝化聚磷菌B8菌劑種子液的同步脫氮、除磷機(jī)理分析

目前普遍認(rèn)可“聚合磷酸鹽累積微生物”（簡稱為聚磷菌）的攝／放磷原理，即聚磷菌先在厭氧環(huán)境中水解體內(nèi)的ATP用于形成ADP和能量并分解菌株內(nèi)的Poly－P，然后以PO43－的形式釋放。同時聚磷菌利用糖酵解產(chǎn)物（NADH2）和能量吸收碳源儲存形成PHA（其中包括PHB）于菌體內(nèi)。繼而聚磷菌在好氧環(huán)境中以O(shè)2為電子受體氧化分解PHB產(chǎn)生能量完成繁殖代謝，同時吸收外部環(huán)境中的磷酸鹽再次于體內(nèi)形成Poly－P，而菌株厭氧放磷量遠(yuǎn)大于好氧攝磷量，所以通過聚磷菌的生長代謝就可以去除外環(huán)境中的磷。而聚磷菌中又存在反硝化聚磷菌，這種菌種可以在聚磷階段以NO3－為電子受體進(jìn)行吸磷。

胞外聚合物（extracellular polymeric substances，EPS）是微生物聚集體重要組成部分，其具有生物吸附作用［18］，而PO43－在堿性環(huán)境中易與菌株胞外中的蛋白質(zhì)、多糖形成沉淀，馬放等［10］發(fā)現(xiàn)反硝化聚磷菌H16、H19、H24和Xg菌懸液在pH大于8時會出現(xiàn)磷酸鹽沉淀物。由圖7和圖8可以看出B8菌劑種子液有明顯的厭氧釋磷和好氧（缺氧）除磷的反硝化聚磷菌特征。為了深入研究B8菌的除磷機(jī)理，先在溫度30℃；培養(yǎng)轉(zhuǎn)速120r／min；pH 6.5條件下培育20h得到高Poly－P含量的B8菌劑種子液，對處理廢水量10%的菌液EPS進(jìn)行提取，再將其投加至待處理廢水中，在厭氧－好氧流程和厭氧－缺氧流程處理的16h連續(xù)跟蹤檢測發(fā)現(xiàn)處理水中的TP與NO3－—N并無變化，由此可推測出B8菌株對磷的去除能力源于胞內(nèi)的吸收，而非胞外的生物吸附，而這也符合反硝化聚磷菌的以O(shè)2或NO3－為電子受體的攝／放磷原理。

3 結(jié)論

1）影響反硝化聚磷菌B8菌劑種子液的多聚磷酸鹽顆粒含量的顯著培養(yǎng)因素有：時間、溫度、搖床轉(zhuǎn)速和pH。在適宜的培養(yǎng)條件（時間15～20h、溫度30～32℃、溶解氧相當(dāng)于70%～88%飽和溶解氧（搖床轉(zhuǎn)速120～140r／min）；pH 6.5～7.0下制得反硝化聚磷菌B8菌劑種子液中的菌株體內(nèi)的Poly－P的含量較高。將在溫度30℃、pH 6.5和搖床培養(yǎng)轉(zhuǎn)速120r／min下培養(yǎng)20h后的B8菌劑種子液以1：10處理實(shí)際城市污水，經(jīng)4h厭氧5h好氧處理除磷率達(dá)到94.09%，而經(jīng)4h厭氧12h缺氧處理除磷率達(dá)到89.73%、硝酸鹽氮去除率達(dá)到53.48%，且出水總磷均降至0.5mg／L以下，達(dá)到《城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標(biāo)準(zhǔn)》（GB 18918—2002）一級A要求。

2）用提取B8菌劑種子液中菌株胞外聚合物進(jìn)行1∶10處理城市污水，廢水中的TP與NO3－—N在處理過程中濃度并無變化，推測B8對磷的去除主要源于菌株胞內(nèi)的Poly－P的合成，而不是胞外聚合物的生物吸附作用。此對進(jìn)一步研究反硝化聚磷菌對磷的去除機(jī)理有重要的理論意義，但菌株胞內(nèi)物質(zhì)等生物學(xué)特征還有待于研究。

［1］Liu Y，Maite P J，Zhi G Y.The effect of free nitrous acid on key anaerobic processes in enhanced biological phosphorus removal systems ［J］.Bioresource Technology，2013，130：382－389.

［2］Chaudhry V，Nautiyal C S.A high throughput method and culture medium for rapid screening of phosphate accumulating microorganisms［J］.Bioresource Technology，2011，102（17）：8057－8062.

［3］Ahn J，Daidou T，Tsuneda S，et al.Selection and dominance mechanisms of denitrifying phosphateaccumulating organisms in biological phosphate removal process［J］.Biotechnology Letters，2001，23（24）：2005－2008.

［4］Weissbrodt D G，Schneiter G S，F(xiàn)uerbringer J M，et al.Identification of trigger factors selecting for polyphosphate－and glycogen－accumulating organisms in aerobic granular sludge sequencing batch reactors［J］.Water Research，2013，47（19）：7006－7018.

［5］Lanham A B，Oehmen A，Saunders A M，et al.Metabolic versatility in full－scale wastewater treatment plants performing enhanced biological Phosphorus removal［J］.Water Research，2013，47（19）：7032－7041.

［6］任麗平，張智，唐赟.以Fe（III）為電子受體的聚磷菌篩選，鑒定及聚磷特性［J］.土木建筑與環(huán)境工程，2012，34（3）：146－150.Ren L P， Zhang Z， Tang Y. Screening and identification of phosphate accumulating bacteria with Fe（Ⅲ）as electronic acceptor and its effects on Phosphorus－Accumulating characteristics ［J］.Journal of Civil，Architectural ＆ Environmental Engineering，2012，34（3）：146－150.

［7］任世英，張宇紅，張武昌，等.海洋聚磷菌 Halomonas YSR－3的除磷特性研究［J］.高技術(shù)通訊，2008，18（7）：743－747.Ren S Y，Zhang Y H，Zhang W C，et al.Phosphateabsorbing characterization of a marine polyphosphateaccumulating bacterium Halomonas YSR－3 ［J］.High Technology Letters，2008，18（7）：743－747.

［8］馬放，楊菲菲，李昂，等.1株高效反硝化聚磷菌的生物學(xué)特性研究［J］.環(huán)境科學(xué)，2011，32（9）：2710－2715.Ma F，Yang F F，Li A，et al.Biological characteristics of denitrifying polyphosphate－accumulating organisms［J］.Environmental Science，2011，32（9）：2710－2715.

［9］彭趙旭，彭永臻，劉旭亮，等.吸磷過程中電子受體峰值濃度探討［J］.土木建筑與環(huán)境工程，2011，33（4）：162－166.Peng Z X，Peng Y Z，Liu X L，et al.Analysis of peak concentrations of electron acceptor during Phosphorus uptaken process［J］.Journal of Civil，Architectural ＆Environmental Engineering，2011，33（4）：162－166.

［10］馬放，王春麗，王立立.高效反硝化聚磷菌的篩選及其生物學(xué)特性［J］.哈爾濱工程大學(xué)學(xué)報，2007，28（6）：631－635.Ma F，Wang C L，Wang L L.Screening of denitrifying polyphosphate－accumulating organisms and their biological characteristics ［J］.Journal of Harbin Engineering University，2007，28（6）：631－635.

［11］張文藝，羅鑫，韓有法，等.下向流曝氣生物濾池工藝處理藻漿壓濾夜特性及微生物種屬分析［J］.土木建筑與環(huán)境工程，2013，35（5）：55－61.Zhang W Y，Luo X，Han Y F，et al.Biological aerated filter for algae pulp filtrate treatment and the analysis of microbial species［J］.Journal of Civil，Architectural ＆Environmental Engineering，2013，35（5）：55－61.

［12］王娟，汪蘋，項(xiàng)慕飛，等.2株好氧反硝化菌還原能力測定及菌種鑒定［J］.環(huán)境與健康雜志，2008，25（6）：525－528.Wang J，Wang P，Xiang M F，et al.Study on reducing capacity and identification of aerobic denitrifiers ［J］.Journal of Environment and Health，2008，25（6）：525－528.

［13］國家環(huán)境保護(hù)總局.水和廢水檢測分析方法［M］.4版.北京：中國環(huán)境科學(xué)出版社，2002.

［14］苗志加，薛桂松，翁冬晨，等.不同溫度及厭氧／好氧運(yùn)行條件對聚磷菌衰減特性的影響［J］.土木建筑與環(huán)境工程，2013，35（2）：113－117.Miao Z J，Xu G S，Weng D C，et al.Effect of different temperature and anaerobic／aerobic conditions on the decay characteristics of PAOs ［J］.Journal of Civil，Architectural ＆ Environmental Engineering，2013，35（2）：113－117.

［15］Lopez－Vazquez C M，Oehmen A，Hooijmans C M，et al.Modeling the PAO－GAO competition：Effects of Carbon source，pH and temperature［J］.Water Research，2009，43（2）：450－462.

［16］Taya C，Garlapati V K，Guisasola A A.The selective role of nitrite in the PAO／GAO competition ［J］.Chemosphere，2013，93（4）：612－618.

［17］Hirota R， Kuroda A， Kato J，et al. Bacterial phosphate metabolism and its application to Phosphorus recovery and industrial bioprocesses ［J］.Journal of Bioscience and Bioengineering，2010，109（5）：423－432.

［18］Zhang P，Chen Y P，Guo J S，et al.Adsorption behavior of tightly bound extracellular polymeric substances on model organic surfaces under different pH and cations with surface plasmon resonance ［J］.Water Research，2014，57：31－39.