林民貴 肖彥燊

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)在疾病發(fā)展和治療過程中會(huì)并發(fā)骨質(zhì)疏松, 骨關(guān)節(jié)的破壞和骨質(zhì)疏松是其致殘的主要原因。新的研究表明［1］, 骨礦密度減少在RA病程早期就已經(jīng)出現(xiàn),抗骨質(zhì)疏松的治療在疾病早期即應(yīng)考慮。此外, RA引起骨質(zhì)疏松跟激素療法有關(guān), 糖皮質(zhì)激素治療RA過程中會(huì)誘發(fā)或加重骨質(zhì)疏松。選擇有效的治療方法, 治療RA致骨質(zhì)疏松成為臨床科室研究的重點(diǎn)問題［2］。本研究通過對(duì)丹參酚酸抗RA致骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行觀察和分析, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 首先建立RA的大鼠模型, 1月齡雌性SD大鼠每只于左后足跖皮內(nèi)注射濃度為2.5 mg/ml的Ⅱ型膠原蛋白(collagen Ⅱ, CⅡ)0.1 ml(將酸可溶性CⅡ用弗氏完全佐劑配成于CⅡ濃度為2.5 mg/ml乳劑)。1周后以相同劑量于每只大鼠尾部及左后足跖部加強(qiáng)注射1次。2周后把上述成功建立RA模型的大鼠篩選出40只, 隨機(jī)分為生理鹽水組、丹參骨寶高劑量組、丹參骨寶中劑量組、丹參骨寶低劑量組, 每組10支。灌胃1次/d, 連續(xù)給藥12周。給藥12周后處死取材。

1.2 方法

1.2.1 制備丹參總酚酸 稱取干燥至恒質(zhì)量的丹參飲片適量, 以80% 的乙醇溶液為溶劑, 按體積比1：5加入, 置錐形瓶中, 混勻, 放入超聲清洗器中超聲提取30 min, 冷卻至室溫,過濾取濾液, 濾渣再進(jìn)行二次超聲振蕩提取, 合并濾液, 密閉冷藏保存, 備用。采用Folin-Ciocalteu 法測定總酚酸含量。

1.2.2 通過ELISA法對(duì)三種類風(fēng)濕因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽性率、抗CCP抗體和OPG、RNAKL進(jìn)行測定。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察研究對(duì)象三種類風(fēng)濕因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽性率、抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體(抗CCP抗體)、骨保護(hù)素(OPG)、核因子κB受體激活配體(RNAKL)指標(biāo)變化情況：IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽性率判定標(biāo)準(zhǔn)是≥20 RU/ml。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0建立數(shù)據(jù)庫。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究對(duì)象IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽性率、抗CCP抗體、OPG、RNAKL情況, 見表1。丹參骨寶高、中、低劑量組 IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽 性 素、 抗 CCP抗 體、OPG、RNAKL均優(yōu)于生理鹽水組, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 研究對(duì)象IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽性率、抗CCP抗體、OPG、RNAKL情況

3 討論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)及RA性骨質(zhì)疏松是一種老年性、疑難性重癥疾病, 對(duì)人類和社會(huì)危害極大［3］。RA患者的骨丟失有三種類型：關(guān)節(jié)軟骨下骨和關(guān)節(jié)邊緣骨丟失、受累關(guān)節(jié)周圍骨丟失、軀干和四肢骨骼廣泛骨丟失。研究證實(shí)［4］,在各關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞的環(huán)境中, 破骨細(xì)胞是骨侵蝕和骨質(zhì)疏松的主要因素。此外, 炎癥因子作用下的成骨細(xì)胞加速凋亡和成骨細(xì)胞的功能下降, 使RA中的成骨細(xì)胞數(shù)量不足, 功能不佳；在加上過度活化的破骨細(xì)胞系統(tǒng), 這就使得骨重建的平衡大大偏向骨丟失的一端。而治療RA過程中, 大量使用糖皮質(zhì)激素藥物, 會(huì)誘發(fā)或加重骨質(zhì)疏松, 因此糖皮質(zhì)激素治療RA受到一定的限制。目前國內(nèi)約有400萬RA患者,如能尋找到一種低毒有效的藥物將大有市場［5］。因此, 將丹參酚酸開發(fā)成防治RA性骨質(zhì)疏松的新藥, 將造福于廣大RA患者, 具有良好的市場前景和具有廣闊的發(fā)展前景。丹參是著名抗衰老中藥, 為唇形科植物丹參(salvia miltiorrhiza bge)的干燥根, 是著名的傳統(tǒng)中藥, 具有抗氧化、改善微循環(huán)防止血栓形成等多種功能［6］。丹參可促進(jìn)骨愈合, 預(yù)防股骨頭壞死, 有效降低絕經(jīng)期婦女骨質(zhì)疏松血中骨吸收生物指標(biāo),還具有抗炎和增強(qiáng)免疫的調(diào)節(jié)作用［7］。近代已從中分離得多種化學(xué)成分, 包括脂溶性成分和水溶性成分, 水溶性成分有原兒茶醛、丹參素(丹參酸甲)、丹參酸乙等。丹參富含丹參素,丹參酚酸等具有抗脂質(zhì)氧化、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)作用,也具有抗炎和增強(qiáng)免疫的調(diào)節(jié)作用的活性成分［8］。但丹參酚酸是否對(duì)RA性骨質(zhì)疏松有預(yù)防作用未見有相關(guān)報(bào)道, 本研究通過成功建立RA模型的大鼠篩選出40只, 隨機(jī)分為生理鹽水組10只、丹參骨寶高劑量組10只、丹參骨寶中劑量組10只、丹參骨寶低劑量組10只。結(jié)果：丹參骨寶高劑量組、中劑量組、低劑量組IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽性率、抗CCP抗體、OPG、RNAKL均優(yōu)于生理鹽水組, 提示丹參酚酸可以有效的改善風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎并骨質(zhì)疏松的各項(xiàng)因子陽性率和因子水平。

綜上所述, 丹參酚酸開發(fā)成治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎致骨質(zhì)疏松的相關(guān)藥品或食品具有重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

［1］周晟芳,李艷,劉梅潔.無比山藥丸對(duì)去卵巢所致骨質(zhì)疏松癥大鼠脛骨骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)的影響.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志, 2012,18(11):1211-1212.

［2］陳健,黃禮群,胡裕君,等.低頻脈沖電磁場對(duì)去勢骨質(zhì)疏松大鼠腰椎骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響.中國修復(fù)重建外科雜志, 2011,25(12):1455-1458.

［3］陳海嘯,梁軍波,伍海昭.骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)去卵巢大鼠腰椎松質(zhì)骨骨形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)的影響.中醫(yī)正骨, 2011,23(4):18-20.

［4］劉易軍,孟廣偉,宮赫,等.人工加載對(duì)懸吊大鼠骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究.中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào), 2008, 27(6):838-841.

［5］史曉林,吳連國,徐建春.強(qiáng)骨飲對(duì)去卵巢大鼠腰椎骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響.中國骨傷, 2008,21(4):287-288.

［6］薛冬英,陳一奕,葉軍.丹參酚酸B山楂黃酮聯(lián)用對(duì)大鼠非酒精性脂肪性肝病相關(guān)因素的干預(yù)作用.中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志, 2012,20(6):245-248.

［7］羅朵生,何偉,郭姣,等.大孔吸附樹脂純化丹參酚酸的研究.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2010,16(6):14-16.

［8］黃繼漢,王鯤,許羚,等.丹參酚酸B在健康人群個(gè)體內(nèi)暴露程度的生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn).中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué), 2011,16(5):510-517.