★ 王利國 唐燦 劉艷 李梅 雷燕 黃麗萍 (.瀘州醫(yī)學院附屬中醫(yī)醫(yī)院 四川 瀘州646000;.瀘州醫(yī)學院藥學院 四川瀘州646000)

梔子為茜草科植物梔子的干燥成熟果實，主產(chǎn)于四川、湖北、江西、重慶、浙江、湖南、福建等?。?］，具有瀉火除煩、清熱涼血解毒之功效，適用于熱病心煩，黃疸尿赤、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒瘡瘍等證［2］，現(xiàn)代藥理研究證明梔子具有顯著的保肝降酶、利膽退黃、解熱抗炎、抗菌等藥理作用。有報道表明巴中產(chǎn)梔子主要有效成分——梔子苷、西紅花苷－Ⅰ、熊果酸含量均遠遠高于其它產(chǎn)地(四川樂山、青川、納溪、宜賓，重慶江津、湖北棗陽等)梔子相應有效成分含量，從主要有效成分的含量優(yōu)勢初步證明巴中產(chǎn)梔子品質(zhì)優(yōu)異、質(zhì)量穩(wěn)定［3］。建立一個品質(zhì)優(yōu)異的川產(chǎn)道地藥材——巴中產(chǎn)梔子，除上述報道檢測主要有效成分的含量外，還必須通過主要藥效學指標與江西、江津、湖北等地產(chǎn)梔子的藥理效應橫向比較，進一步從藥理效應這個方面再證明巴中產(chǎn)梔子的優(yōu)異品質(zhì)。本課題對梔子主要藥效學利膽退黃作用進行以下研究［4］。

1 材料

1.1 藥物與試劑 巴中產(chǎn)30年生梔子成熟果實采自巴中市巴州區(qū)平梁鄉(xiāng)青包山村－－四川省梔子產(chǎn)業(yè)科技示范園區(qū)(四川省巴中市百順中藥飲片有限公司);湖北產(chǎn)梔子成熟果實(采自湖北省棗陽市新市鎮(zhèn));江西產(chǎn)梔子成熟果實(采自江西省撫州市金溪具黃梔子GAP種植基地);江津產(chǎn)梔子(采自重慶市江津區(qū)賈嗣鎮(zhèn)紅陽村)。經(jīng)課題組鑒定均為茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實。梔子水溶性有效部位0.3g/mL，梔子70%乙醇溶性有效部位0.3g/mL(提取物中乙醇已除盡)?？偰懠t素(TBIL)測定試劑盒、總膽固醇(CHOL)測定試劑盒(均購于浙江夸克生物科技有限公司)。生理鹽水(購于四川科倫有限責任公司)。戊巴比妥鈉(購于瀘州天根生化科技有限責任公司)。

1.2 儀器 電子天平(上海民橋精密儀器有限公司生產(chǎn)，型號:FA1104W);超聲波清洗機(北京東西儀科技有限公司生產(chǎn)，型號:WH96/800);電熱真空干燥箱(上海實驗儀器廠生產(chǎn)，型號:OK072);高速離心機(華辰樂天生物實驗設備有限公司生產(chǎn)，型號:HC－2062);BECKMAN全自動生化測定儀(美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)，型號:DXC800)。

1.3 動物 家兔，雌雄兼用，1.5～2.5kg(由瀘州醫(yī)學院實驗動物中心提供)。

1.4統(tǒng)計學處理 實驗數(shù)據(jù)均以xˉ±s表示，兩組數(shù)據(jù)間比較采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗，以P＜0.05表示顯著性差異、以P＜0.01表示非常顯著性差異、以P＜0.001表示極顯著性差異。

2 方法與結果

2.1 提取方法

2.1.1 水溶性有效部位提取方法 稱取干燥梔子粗30g加7倍量水浸泡30min后超聲提取15min過濾，濾渣再加4倍量水超聲提取15min過濾，最后再加4倍量水超聲提取15min過濾，合并3次提取液加入1‰苯甲酸鈉于55℃烘箱中濃縮至100mL。

2.1.2 70%醇溶性有效部位提取方法 稱取干燥梔子水提藥渣30g加入5倍量70%乙醇浸泡30min后超聲提取20min過濾，再加4倍量70%乙醇超聲提取20min過濾，最后再加入3倍量70%乙醇超聲提取20min過濾，合并3次提取液于55℃烘箱中濃縮至100mL，加入1‰苯甲酸鈉。

2.2 試驗方法 實驗動物分為9組:正常對照組(Normal)、巴中產(chǎn)梔子水溶性有效部位組(BZZZW)、江西產(chǎn)梔子水溶性有效部位組(JXZZW)、江津產(chǎn)梔子水溶性有效部位組(JJZZW)、湖北產(chǎn)梔子水溶性有效部位組(HBZZW);巴中產(chǎn)梔子70%醇溶性有效部位組(BZZZA)、江西產(chǎn)梔子70%醇溶性有效部位組(JXZZA)、江津產(chǎn)梔子70%醇溶性有效部位組(JJZZA)、湖北產(chǎn)梔子70%醇溶性有效部位組(HBZZA)。每組動物數(shù)均為5只。于試驗第一日開始，給藥8個組分別插管灌胃給予相應藥物，劑量均為2.1g/kg;Normal組插管灌胃給予等量生理鹽水。每日灌胃1次，連續(xù)3天。實驗第四天灌胃給藥一次后30min，于家兔耳緣靜脈注射戊巴比妥鈉30mg/kg(即3%戊巴比妥鈉溶液1mL/kg)，麻醉后將動物背位固定于手術上，去毛后開腹，于家兔膽囊中抽取膽汁［5］，測定膽汁中TBIL和CHOL含量。

2.3 檢測原理 肝膽疾病和溶血性疾病膽汁中CHOL和TBIL含量都有一定程度變化，本試劑盒能定量測定人體膽汁中二者的含量，所采用的反應原理:TBIL 反應原理(化學氧化法)［6］。

2.4 試驗結果 見表1。結果可知，四個產(chǎn)地梔子無論是水溶性有效部位，還是70%醇溶性有效部位均具有非常顯著降低正常家兔膽汁中總膽紅素TBIL和總膽固醇CHOL含量的作用，尤其是醇溶性有效部位。

巴中產(chǎn)梔子水溶性有效部位BZZZW對正常家兔膽汁中TBIL和CHOL的含量降低作用比江西、湖北、江津產(chǎn)梔子水溶性有效部位更有優(yōu)勢，但無顯著性差異(P ＞0.05)。

巴中產(chǎn)梔子70%醇溶性有效部位BZZZA對正常家兔膽汁中TBIL和CHOL的含量降低作用比江西、湖北、江津產(chǎn)梔子70%醇溶性有效部位更有優(yōu)勢，但無顯著性差異(P＞0.05)。

梔子70%醇溶性有效部位對正常家兔膽汁中TBIL和CHOL的含量降低作用優(yōu)于梔子水溶性有效部位，但是無顯著性差異(P＞0.05)。總之從梔子對正常家兔膽汁中總膽紅素TBIL和總膽固醇CHOL含量降低作用的研究結果證明:巴中產(chǎn)梔子品質(zhì)更優(yōu)，治療黃疸產(chǎn)生的效果更佳。巴中產(chǎn)梔子在川產(chǎn)藥材中的臨床開發(fā)和利用方面占具優(yōu)勢。

表1 梔子提取物利膽作用結果(±s，n=5)

表1 梔子提取物利膽作用結果(±s，n=5)

注:與 Normal組比較※P ＜0.05，※※P ＜0.01，※※※P ＜0.001。

組別 給藥劑量g/kg TBIL CHOL Normal － 73.17 ±11.09 1.03 ±0.49 BZZZW 2.1 37.90 ±25.27※ 0.43 ±0.34※JXZZW 2.1 65.62 ±46.76 0.54 ±0.16※JJZZW 2.1 46.50 ±25.96※ 0.55 ±0.15※HBZZW 2.1 72.07 ±53.89 0.55 ±0.18※BZZZA 2.1 30.00 ±10.07※※※ 0.34 ±0.22※JXZZA 2.1 33.98 ±20.20※※ 0.52 ±0.20※JJZZA 2.1 45.90 ±15.99※ 0.42 ±0.39※HBZZA 2.1 32.15 ±30.19※ 0.35 ±0.14※

3 討論

3.1 研究結果表明，巴中產(chǎn)梔子提取物降低正常家兔膽汁中TBIL、CHOL的效應與江西、江津、湖北產(chǎn)梔子的比較有進一步降低趨勢，提示巴中梔子提取物具有明顯利膽退黃作用，在臨床上黃疸發(fā)生時，可優(yōu)選巴中產(chǎn)梔子，以達到更好的治療效果。另根據(jù)傳統(tǒng)的炮制經(jīng)驗，臨床配方用梔子多采用烘干、麩炒、清炒等方法進行炮制后才能入藥。故其炮制品對藥效的研究有待深入。

3.2 本研究只采用梔子提取物對正常家兔膽汁中TBIL、CHOL含量的作用進行研究，而對梔子如何利膽退黃的機制還不夠深入。下一步有待制備溶血性黃疸、肝細胞細胞性黃疸、阻塞性黃疸、膽汁淤積型黃疸等模型，再給家兔膽總管插管形成瘺管引流膽汁，觀察梔子提取物對家兔膽汁分泌量的影響，測定家兔膽汁以及血清成分，觀察梔子提取物對黃疸模型組家兔利膽退黃的效果。

3.3 梔子本身味苦、性寒，臨床上不能大劑量長時間給藥，但劑量太少給藥時間太短都會影響治療效果。本研究連續(xù)同劑量給藥四天，最后各給藥組之間結果無顯著性差異，可能與給藥時間相對過短有關。有待進一步研究給藥劑量和給藥時間對療效的影響。

［1］徐國鈞.中草藥彩色圖譜［M］.福州:福建科學技術出版社，1989:44.

［2］國家藥典委員會.中國藥典·一部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:231.

［3］唐燦，王子雯，孫嘉婧.多指標綜合評價巴中產(chǎn)梔子的品質(zhì)［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18(24):115.

［4］陳明，龍子江，王靚.梔子提取物保肝利膽作用的實驗研究［J］.中醫(yī)藥臨床雜志，2006，18(6):610 －612.

［5］陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1994:451－454.

［6］中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗操作規(guī)程·第3版［S］.南京:東南大學出版社，2006.