孫 昕，楊雪萍，張 強(qiáng)，谷媛媛，呂泰省，劉 衛(wèi)

咽炎寧含片是在筆者所在醫(yī)院協(xié)定處方元參甘橘湯的基礎(chǔ)上添加木蝴蝶精制而成。原處方經(jīng)多年臨床驗(yàn)證，在陰虛火旺，虛火上浮，口鼻干燥，咽喉腫痛等癥的治療中取得了顯著的療效。添加木蝴蝶可增強(qiáng)清肺、利咽、止咳作用，減少對(duì)胃腸道的刺激。咽炎寧含片使用方便，生物利用度高，可克服原制劑的劑量不準(zhǔn)確、口感欠佳、生物利用度低等缺點(diǎn)。本研究采用單因素考察、正交優(yōu)化法，以哈巴苷、哈巴俄苷為指標(biāo)性成分，對(duì)提取、濃縮；以崩解時(shí)限、含片口感為指標(biāo)對(duì)成型工藝進(jìn)行考察。優(yōu)化了咽炎寧含片的制備工藝。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀（安捷倫1200，四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣），電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司 BT124S），超聲儀（HS3120），轉(zhuǎn)籃式壓片機(jī)（山東青州市精誠(chéng)機(jī)械有限制造公司 THP-4T），真空泵（鞏義市英峪予華儀器廠），2B-1B智能崩解儀（天津大學(xué)精密儀器廠）。

1.2 材料和試劑 哈巴苷、哈巴俄苷（中國(guó)藥品生物制品檢定所，化學(xué)對(duì)照品），甲醇（色譜純，天津市四通化工廠），乙腈（色譜純，天津市四通化工廠），醋酸（分析純，天津市巴斯夫化工有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 哈巴苷、哈巴俄苷的含量測(cè)定方法的建立［1］

2.1.1 色譜條件 色譜柱 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相由乙腈和0.03%磷酸溶液組成，梯度洗脫（乙腈的體積變化為 0～7 min，3→10%；10～20 min，10→33%；20～25 min，33→50%；25～30 min，50→80%；30～35 min，80%；35～37 min，80→3%；流速 1.0 ml／min；檢測(cè)波長(zhǎng)為 210 nm；進(jìn)樣量 10 μl。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 取哈巴苷對(duì)照品、哈巴俄苷對(duì)照品適量，精密稱定，加 30%甲醇制成含哈巴苷 60 μg／ml，哈巴俄苷 20 μg／ml的混合溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液制備 取樣品約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，密塞，稱重，超聲（500 w，40 kHz）處理45 min，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。如圖1。

2.1.5 線性關(guān)系考察 取哈巴苷、哈巴俄苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成含哈巴苷0.12 mg／ml、哈巴俄苷0.04 mg／ml的溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液 1、2、4、6、8、10 ml至10 ml量瓶，加甲醇至刻度搖勻。分別精密吸取上述溶液10 μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值，計(jì)算回歸方程。哈巴苷 Y=8.0589X-1.1283，r=0.9999，在 12～120 μg／ml范圍內(nèi)線性良好；哈巴俄苷Y=49.7304X-3.8475，r=0.9999，在4～40 μg／ml范圍內(nèi)線性良好。

圖1 哈巴苷、哈巴俄苷及樣品高效液相色譜圖

2.1.6 精密度試驗(yàn) 吸取哈巴苷、哈巴俄苷對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積積分值，結(jié)果哈巴苷RSD為1.074%，哈巴俄苷RSD為1.261%。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品溶液， 分別在0、2、4、8、12、24 h測(cè)定，測(cè)得哈巴苷、哈巴俄苷峰面積積分值，哈巴苷RSD為1.374%，哈巴俄苷RSD為1.823%。

2.1.8 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批次樣品6份，按供試品溶液制備方法制備。按色譜條件測(cè)定哈巴苷、哈巴俄苷的含量，計(jì)算RSD分別為哈巴苷1.508%、哈巴俄苷1.669%。

2.1.9 加樣回收率試驗(yàn) 分別精密稱取已知含量的樣品6份，各1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入哈巴苷（1.1 mg／ml）、哈巴俄苷（0.38 mg／ml）的對(duì)照品溶液 4 ml，按供試品溶液制備法制備，按擬定方法測(cè)定哈巴苷、哈巴俄苷含量，計(jì)算回收率，哈巴苷平均回收率為99.54，RSD為1.62%；哈巴俄苷平均回收率為98.71，RSD為1.85%。

2.2 提取工藝考察

2.2.1 提取物中哈巴苷、哈巴俄苷含量測(cè)定 稱取干燥后的各試驗(yàn)號(hào)提取物2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇 50 ml，密塞，稱重，超聲（500 w，40 kHz）處理 45 min，再稱重，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，按上述色譜條件測(cè)定。

2.2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，考察提取次數(shù)、提取時(shí)間、溶劑倍量、浸泡時(shí)間對(duì)提取工藝的影響。以哈巴苷、哈巴俄苷的提取量為指標(biāo)，建立L9（34）正交試驗(yàn)表，因素與水平見(jiàn)表1，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.3 結(jié)果 以上試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析后發(fā)現(xiàn)，A因素的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），B、C、D因素的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），各因素對(duì)咽炎寧含片藥材提取工藝的影響程度為：A>C>B>D，即因素A對(duì)提取工藝影響最大，因素C次之，因素D影響最小。因素D的極差最小，數(shù)據(jù)處理時(shí)作為最小誤差項(xiàng)。雖然加10倍量水提取得率較高，但與加8倍量水提取相差不大，為了節(jié)省能源，將提取加水倍量定位8倍。最佳工藝為條件為A3B1C2D2，即加8倍量水，浸泡1.5 h，提取次數(shù)3次，提取時(shí)間1 h／次。

表1 提取工藝因素和水平

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

2.3 成型工藝考察 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，確定主藥投料量為50%；選取糊精、甜菊苷、薄荷腦、硬脂酸鎂為輔料［2］。

2.3.1 潤(rùn)滑劑選擇及用量的考察 咽炎寧含片主藥為中藥提取物，壓片前顆粒流動(dòng)性不好。為增加顆粒的流動(dòng)性，減少與模孔壁的摩擦，防止粘沖，保證含片表面光滑美觀，需在顆粒中添加一定潤(rùn)滑劑。硬脂酸鎂為常用的潤(rùn)滑劑，具有質(zhì)地輕，比表面積大，易與顆?；靹?，用量較少（其常規(guī)劑量為0.3%～1.0%）等優(yōu)點(diǎn)。故選擇硬脂酸鎂為含片的潤(rùn)滑劑，并設(shè)計(jì)試驗(yàn)，考察不同用量硬脂酸鎂對(duì)顆粒流動(dòng)性、壓片時(shí)粘沖情況及片劑質(zhì)量的影響。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 硬脂酸鎂用量對(duì)制劑工藝的影響

以上結(jié)果表明，1%的硬脂酸鎂制得片劑各項(xiàng)指標(biāo)均較優(yōu)。

2.3.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 以糊精、薄荷腦、甜菊苷為考察因素，每個(gè)因素選取3個(gè)水平，采用正交試驗(yàn)考察處方中糊精、薄荷腦、甜菊苷的用量對(duì)含片口感的影響。因素水平見(jiàn)表4。

表4 制備工藝因素與水平

以口感為指標(biāo)，確定評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。0分為口感過(guò)苦或過(guò)甜，清涼感過(guò)重；1～6分為甜度適中，清涼感差或甜度差，清涼感適中；7～10分為甜度適中，清涼感適中。按以上標(biāo)準(zhǔn)分別進(jìn)行評(píng)分，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 制備工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

以上試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析后發(fā)現(xiàn)，C因素的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），A、B、D因素的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），各因素對(duì)咽炎寧含片口感的影響程度為：C>B>A>D，即因素C對(duì)口感影響最大，因素B次之，因素D影響最小。因素D的極差最小，數(shù)據(jù)處理時(shí)作為最小誤差項(xiàng)。由此確定輔料的最佳組合為：C3B2A2，即糊精用量為0.7 g，薄荷腦用量0.01 g，甜菊苷用量 0.03 g。

3 討 論

3.1 提取工藝 提取溶劑用量對(duì)咽炎寧含片的提取有一定的影響。加10倍量水提取哈巴苷、哈巴俄苷的量稍高，但與加8倍量水相差不大。為了節(jié)省能源，將溶劑倍量定為8倍量。正交試驗(yàn)結(jié)果表明，最佳工藝為條件為A3B1C2D2，即加8倍量水，浸泡1.5 h，提取次數(shù)3次，提取時(shí)間1 h／次。

3.2 制備工藝 在處方篩選中，曾對(duì)輔料的選用進(jìn)行了考察，以甜菊苷代替葡萄糖進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)甜度和黏度較合適，具有高甜度、低熱量、口味好、防齲齒等特點(diǎn)，對(duì)糖尿病和高脂血癥也同樣適用，是一種較為理想的甜味劑。

口含片對(duì)口感要求較高，因此對(duì)這個(gè)指標(biāo)進(jìn)行重點(diǎn)考察。此外，還對(duì)該含片的片重差異進(jìn)行的考察，結(jié)果按該工藝條件所制得的含片各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求。且其制備工藝簡(jiǎn)單，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)，具有良好的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。

3.3 含量測(cè)定方法 咽炎寧含片以玄參為君藥，而玄參中哈巴苷、哈巴俄苷為其指標(biāo)成分，故以哈巴苷、哈巴俄苷的含量作為控制制劑質(zhì)量的指標(biāo)。樣品處理方法簡(jiǎn)單，精密度高、重現(xiàn)性好。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版一部［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］劉石林，向建南，呂守本.從甜菊葉中提取和精制甜菊苷的方法［J］. 蚌埠醫(yī)學(xué)院雜志，1995，20（6）：425.