周海燕，趙潤懷*，付建國

(1.中國藥材公司，北京 102600；2.黑龍江東度參業(yè)科技發(fā)展有限公司，黑龍江 海林 157100)

國家公益性行業(yè)科研專項基金項目(200807020)

*

趙潤懷，研究員，研究方向：中藥資源與中藥材生產(chǎn)加工；Tel：(010)88468257，E-mail：zhaorunhuai@sina.com

基于人參皂苷含量的西洋參等級規(guī)格標準研究△

周海燕1，趙潤懷1*，付建國2

(1.中國藥材公司，北京 102600；2.黑龍江東度參業(yè)科技發(fā)展有限公司，黑龍江 海林 157100)

目的分析不同產(chǎn)地、不同等級規(guī)格西洋參中人參皂苷的含量，評價西洋參的化學(xué)信息，為其行業(yè)標準的制定提供實驗依據(jù)。方法采用UPLC測定主要活性成分人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg2含量，用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計分析。結(jié)果建立了不同產(chǎn)地西洋參樣品人參皂苷分布特征圖譜；西洋參中Rg1、Re、Rb1的含量之和符合《中國藥典》標準；方差分析表明產(chǎn)地、長度對同一個規(guī)格的西洋參中人參皂苷的含量影響具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論由于西洋參中人參皂苷含量受產(chǎn)地、長度、重量等多因素影響，在等級規(guī)格評價中，符合《中國藥典》標準基礎(chǔ)上不宜采用人參皂苷含量為指標進行等級規(guī)格劃分。

西洋參；等級規(guī)格；人參皂苷

西洋參PanaxquinquefoliumL.為五加科植物，味甘、微苦，性涼；入心、肺、腎經(jīng)；具有補氣養(yǎng)陰、清熱生津的功能[1]，原產(chǎn)于美國東部和加拿大，我國已有大面積栽培[2]，現(xiàn)國產(chǎn)栽培西洋參主產(chǎn)于吉林、黑龍江、北京、山東等地。根據(jù)目前西洋參市場狀況、消費者的習慣及國產(chǎn)栽培西洋參精加工后的形態(tài)特征，依據(jù)長度、單支重量可將西洋參商品劃分成不同規(guī)格，例如8 g長支、8 g中支、15 g短支。人參皂苷(ginsenosides)是西洋參的主要活性成分和重要質(zhì)量控制指標[3]，其含量是人參的3～4倍，具有抗腫瘤、抗癌、降血壓、降血脂、抗疲勞等多方面的藥理活性[4]。本文應(yīng)用UPLC測定主要活性成分人參皂苷含量，詳細分析了不同產(chǎn)地、同一等級規(guī)格西洋參以及同一產(chǎn)地、不同等級規(guī)格西洋參中人參皂苷的含量，為全面系統(tǒng)評價不同產(chǎn)地、不同等級規(guī)格西洋參的質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料

人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rb3對照品(中國食品藥品檢定研究院)。人參皂苷Rh1、Rg2、Rc、Rb2、Rd、Rg3(上海順勃生物工程技術(shù)有限公司，純度>98%。)。乙腈、甲醇為色譜純；水為蒸餾水，經(jīng)ELGA制水儀得到(英國，ELGA-PURELAB Classic型)，用前經(jīng)0.2 μm微孔濾膜過濾。40批不同產(chǎn)地西洋參樣品信息見表1，均經(jīng)中國藥材公司趙潤懷研究員鑒定為西洋參PanaxquinquefoliumL.的干燥根。

表1 不同產(chǎn)地西洋參樣品信息

1.2 儀器

美國Waters AcquityTMUPLC色譜儀系統(tǒng)(二元超高壓泵系統(tǒng)、樣品管理系統(tǒng)、PDA檢測器、柱溫箱，Waters Empower色譜工作站)，美國Waters高效液相色譜儀(Waters1525型HPLC泵，2487型紫外雙波長檢測器，717型自動進樣器，Waters In-Line脫氣機，Waters Breeze工作站)，Alltech 2000ES型蒸發(fā)光散射檢測器，XWK-Ⅲ型無油空氣泵，2500DE型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

2 方法

2.1 西洋參中人參皂苷測定[5-6]

人參皂苷Rg1、Re、Rh1、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Rg3用UPLC色譜法測定。精密稱量樣品粉末(四號篩，65目)1.0 g，置于具塞三角瓶中，加入甲醇50 mL，密塞，稱重，超聲提取30 min，冷卻至室溫，用甲醇補足減少的重量，濾過。精密吸取續(xù)濾液25 mL，揮去溶劑，殘渣用適量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，用0.2 μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液用于含量測定。

色譜條件：ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(50 mm×2.1 mm，1.7 μm)，柱溫為30 ℃，流速為0.3 mL·min-1，檢測波長為203 nm，進樣量為2 μL，流動相A為乙腈、B為水，梯度洗脫(0→3 min，19% A；3→4min，19%→21% A；4→5 min，21%→26% A；5→9 min，26%→27% A；9→12 min，27%→32% A；12→15 min，32%→43% A；15→18 min，43%→60% A；18→20 min，100% A)。

2.2 數(shù)據(jù)分析

采用軟件SPSS 16.0和Excel 2003對試驗數(shù)據(jù)進行計算處理。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同產(chǎn)地、不同等級規(guī)格西洋參樣品中人參皂苷的含量

按上述方法測定西洋參樣品，UPLC圖見圖1。因人參皂苷Rh1、Rg3含量極低，故忽略不計。另8種人參皂苷質(zhì)量分數(shù)的測定結(jié)果見表2。

1.人參皂苷Rg1 2.人參皂苷Re 3.人參皂苷Rh1 4.人參皂苷Rg2 5.人參皂苷Rb1 6.人參皂苷Rc 7.人參皂苷Rb2 8.人參皂苷Rb3 9.人參皂苷Rd 10.人參皂苷Rg3A.人參皂苷混合對照品 B.7號樣品圖1 各人參皂苷對照品及西洋參樣品UPLC圖

/%

續(xù)表2

3.2 西洋參中人參皂苷分布特征

筆者繪制了9個產(chǎn)地的8 g中支西洋參樣品8種人參皂苷成分的質(zhì)量分數(shù)曲線圖，結(jié)果見圖2。

圖2 不同產(chǎn)地、相同規(guī)格西洋參中各人參皂苷成分質(zhì)量分數(shù)對比圖

從圖2可以看到，不同產(chǎn)地、相同等級規(guī)格西洋參樣品中人參皂苷成分質(zhì)量分數(shù)分布曲線有相似的峰形。主根中的主要成分是人參皂苷Re、Rb1，這與Wang等[7]和Mazza等[8]得到的結(jié)論是一致的。除了人參皂苷Re、Rb1，人參皂苷Rg1也是西洋參中的主要人參皂苷成分。不同產(chǎn)地、相同等級規(guī)格西洋參中8種人參皂苷的總量由高到低分別為：人參皂苷Rb1﹥Re>Rg1>Rd>Rc>Rb3>Rb2>Rg2。

3.3 與《中國藥典》限量標準比較

《中國藥典》2010年版規(guī)定，西洋參含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1的總量應(yīng)≥2.0%。據(jù)此標準，上述40批不同產(chǎn)地、不同等級規(guī)格的西洋參樣品均符合規(guī)定。40批樣品中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的總量在2.507%～5.534%，平均值(3.412±0.659)%。比較不同產(chǎn)地、相同等級規(guī)格的西洋參中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的總量，結(jié)果文登、懷柔兩個產(chǎn)地的西洋參居前三位之中。比較不同產(chǎn)地、相同重量的長、中、短支西洋參的人參皂苷Rg1、Re、Rb1總量，結(jié)果為文登>懷柔>集安>撫松>安圖>靖宇>長白>汪清。

3.4 不同產(chǎn)地、不同長度的西洋參中人參皂苷含量比較

應(yīng)用SPSS 16.0軟件，選擇SNK法，對不同產(chǎn)區(qū)、相同等級規(guī)格西洋參中人參皂苷含量進行多變量方差分析，結(jié)果見表3、4。

從表3可以看出不同產(chǎn)地、相同等級規(guī)格西洋參中人參皂苷Rg1、Re、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd、人參皂苷Rg1+Re+Rb1、總和(人參皂苷Rg1+Re+Rg2+Rb1+Rc+Rb2+Rb3+Rd)的質(zhì)量分數(shù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。文登產(chǎn)西洋參含人參皂苷總和居各產(chǎn)地首位。從表4可以看出不同長度西洋參中各人參皂苷成分質(zhì)量分數(shù)差異同樣具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

表3 不同產(chǎn)地西洋參中各人參皂苷成分質(zhì)量分數(shù)比較 /%

注：**P<0.01，下同

表4 不同長度西洋參中各人參皂苷成分質(zhì)量分數(shù)比較 /%

4 討論

本文測定了不同產(chǎn)地、不同等級規(guī)格西洋參中人參皂苷Rg1、Re、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd的含量，為西洋參中人參皂苷成分的研究提供了參考依據(jù)。建立了不同西洋參樣品人參皂苷分布特征圖譜，表明了西洋參受土壤、氣候、施肥等栽培環(huán)境的影響，其人參皂苷含量有差別；與限量標準比較，西洋參樣品均符合《中國藥典》2010年版規(guī)定；不同產(chǎn)地、不同長度的西洋參中人參皂苷含量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。由于受西洋參枝節(jié)、形狀影響，不同等級規(guī)格西洋參中人參皂苷含量分布規(guī)律不明顯；從粗細不同參節(jié)分析，小節(jié)(d<5 mm)在人參皂苷Rg1、Re、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Rg1+Re+Rb1、Rg1+Re+Rg2+Rb1+Rc+Rb2+Rb3+Rd含量均高于大節(jié)(d>5 mm)，可見西洋參中人參皂苷含量在周皮部位較高。

由于西洋參中人參皂苷含量受產(chǎn)地、形狀、長度、重量等多因素影響，在等級規(guī)格評價中，符合限量標準基礎(chǔ)上不宜采用人參皂苷含量為指標進行等級規(guī)格劃分。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：122-123.

[2] 劉鐵生.中國西洋參[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1995：1-3.

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StudyonGradeSpecificationofAmericanginsengBasedontheContentofGinsenosides

ZHOUHaiyan1，ZHAORunhuai1*，F(xiàn)uJianguo2

(1.ChinaNationalGroupCorp.ofTraditional&HerbalMedicine，Beijing102600，China；2.HeilongjiangDongduGinsengTechnologyDevelopmentCo.Ltd，Hailin157100，China.)

Objective：To analyze the content of ginsenosides in American ginseng，and provide the scientific foundation for the quality control and standard establishment of American ginseng.MethodsThe SPSS 16.0 software was used to analyze the data of eight compounds(ginsenosides Rg1，Re，Rb1，Rb2，Rb3，Rc，Rd and Rg2)determined by means of reversed-phase ultra-performance liquid chromatography(UPLC).ResultsThe ginsenosides chromatogram has been established.The sum of three compounds(ginsenosides Rg1，Re，Rb1)content in American ginseng better meets the national standard ofChinesePharmacopoeia.Two-way ANOVA analysis showed that both length and production regions have significant effects on the contents of ginsenosides.ConclusionThe contents of ginsenosides are influenced by many factors .It is not appropriate to establish the commercial specification of American ginseng based on the content of ginsenosides.

American ginseng；Grade specification；Ginsenoside

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.06.007

2013-12-06)