劉敏，劉帥英，余樂，李水福

(麗水市食品藥品檢驗所，浙江 麗水 323000)

干燥溫度和采收時間對畬藥地稔中沒食子酸及槲皮素含量的影響△

劉敏，劉帥英，余樂，李水福*

(麗水市食品藥品檢驗所，浙江 麗水 323000)

目的比較不同干燥溫度和采收時間對畬藥地稔中沒食子酸、槲皮素含量的影響，確定地稔最佳干燥溫度和最佳采收時間。方法應(yīng)用高效液相色譜法測定，色譜柱為Agilent-SB C18(4.6 mm×250 mm，5μm)；流動相為甲醇-0.4%磷酸溶液，梯度洗脫；流速為1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃；檢測波長254 nm。結(jié)果畬藥地稔中沒食子酸、槲皮素含量隨干燥溫度降低而顯著升高，以室內(nèi)陰干效果為最好。5月份初采收的地稔兩成分總含量最高。結(jié)論干燥溫度和采收時間是影響地稔沒食子酸和槲皮素含量的重要因素。以兩成分含量為指標，最佳采收時間在5月初，花未開時。

地稔；沒食子酸；槲皮素；干燥溫度；采收時間

畬藥地稔，為野牡丹科植物地稔MelastomadodecandrumLour.的全草，畬民多稱“嘎狗?！被颉凹S桶板”，又名山地稔、地葡萄、金頭石榴、鋪地錦、落地稔、地茄等，分布于長江以南的江西、福建、浙江、廣西、廣東、貴州、云南等省區(qū)，漢族、瑤族、畬族等各少數(shù)民族民間使用較廣泛[1-2]。臨床用于治療高熱、腫痛、咽喉腫痛、牙痛、赤白血痢疾、黃疸、水腫、痛經(jīng)、崩漏、帶下、疔瘡、毒蛇咬傷等癥[3]。地稔含有多糖、黃酮類、氨基酸、酚類、常量和微量元素、色素等多種化學(xué)成分，具有止血、抗氧化、抑制糖基化佟末產(chǎn)物(AGE)的生成、鎮(zhèn)痛抗炎、降糖、抗炎、抗病毒等作用[4-6]。地稔中的沒食子酸具有抗菌、抗病毒等作用，槲皮素具有較好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用，此外還有降血壓、增強毛細血管抵抗力、減少毛細血管脆性、降血脂、擴張冠狀動脈，增加冠脈血流量等作用。因此，以此兩種成分同時控制其藥材、飲片、提取物及其制劑的質(zhì)量有較大的意義。初步研究發(fā)現(xiàn)，干燥溫度、采收時間對地稔中這兩種活性成分含量影響較大，目前市場上的地稔飲片顏色泛黃，含量低，多為陽光下暴曬所致。本試驗采用高效液相色譜法(HPLC)測定不同采收時間地稔經(jīng)不同溫度干燥后，其沒食子酸和槲皮素含量，為確定地稔最佳干燥溫度及采收時間提供參考，為藥材的儲存、飲片的制備、制劑的工藝提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；電子天平(XS104，上海恒剛衡器天平有限公司)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(DHG-9140A，上海賀德實驗設(shè)備有限公司)地稔藥材(采自麗水市蓮都區(qū)，經(jīng)我所李水福主任中藥師鑒定為野牡丹科植物地稔MelastomadodeccandrumLour，根據(jù)采集時間確定批號分別為130501，130617，130720，130825，130925，131015，131116)；沒食子酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110831-201204，含量為89.9%)、槲皮素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100081-200907，含量為96.5%)。甲醇為色譜純，磷酸為色譜純，水為哇哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材的干燥

研究發(fā)現(xiàn)，地稔不同部位沒食子酸和槲皮素成分含量差別顯著，而畬民多以全草入藥，因此取不同月份、不同部位地稔按以下不同干燥方法處理后測定兩成分含量[7-10]。

陰干：取新鮮、洗凈的地稔藥材，置于室內(nèi)通風(fēng)陰涼處，待其自然干燥。

60 ℃烘干：取新鮮、洗凈的地稔藥材，置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，恒溫60 ℃烘烤至干燥。

80 ℃烘干：取新鮮、洗凈的地稔藥材，置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，恒溫80 ℃烘烤至干燥。

所得各干燥藥材樣品在進行分析前置于干燥器中貯存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 沒食子酸、槲皮素的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent-SB C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為甲醇-0.4%磷酸溶液，梯度洗脫；流速為1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃；檢測波長為254 nm。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸和槲皮素對照品適量，加80%甲醇制成每1 mL含沒食子酸234.8 μg、槲皮素151.1 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取經(jīng)不同干燥方法處理后，粉碎，過3號篩的地稔葉、莖、根藥材粉末各4.0 g(同時另取本品測定水分)置錐形瓶中，精密加入50 mL甲醇-15%鹽酸(4∶1)，密塞，稱定重量，加熱回流提取3 h，放冷至室溫，再稱定重量，用提取溶劑補足減失的重量，搖勻，過濾，分別精密量取5 mL濾液置20 mL容量瓶(葉)、10 mL容量瓶(莖)、10 mL容量瓶(根)中，用提取溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，濾液即為供試品溶液。

2.2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 分別精密吸取2.2.2、2.2.3項下溶液，按2.2.1項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖1。

由圖1可見，在該色譜條件下，沒食子酸、槲皮素與其他成分可達到基線分離，分離度均大于1.5。對照品色譜峰與供試品色譜峰中相對應(yīng)色譜峰的紫外光譜吸收均一致。結(jié)果表明在上述色譜條件下沒食子酸和槲皮素具有良好的分離效果。

2.2.5 線性關(guān)系考察 取沒食子酸和槲皮素對照品適量，精密稱定，分別置50 mL量瓶中，加80%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含沒食子酸234.8 μg·mL-1、槲皮素151.1 μg·mL-1的對照品溶液。分別精密吸取兩對照品溶液適量于同一25 mL量瓶中，制成沒食子酸濃度為18.786、28.178、37.571、46.964、56.357 μg·mL-1，槲皮素濃度為3.022、9.067、15.110、21.157、27.201 μg·mL-1的對照品溶液，準確吸取5 μL，按上述確定的色譜條件進行測定，分別以對照品的含量(X)為橫坐標，峰面積積分值(Y)為縱坐標，得沒食子酸回歸方程為Y=1 724.7X+2.574 5，r=0.999 9，槲皮素回歸方程為Y=4 256.7X-2.054 8，r=1.000。結(jié)果表明：沒食子酸和槲皮素分別在0.093 9～0.282 μg、0.015 1～0.136 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

1.沒食子酸 2.槲皮素 A.對照品 B.葉 C.莖 D.根 圖1 地稔不同部位中沒食子酸、槲皮素含量測定HPLC圖譜

2.2.6 方法學(xué)考察 經(jīng)重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性及加樣回收率試驗，結(jié)果均符合要求。

2.3 結(jié)果

按2.2.3項下方法制備供試品溶液，分別測定含量，并按葉、莖、根折算比例(1∶1∶1)計算總含量(按干燥品計算)。結(jié)果見表1、圖2。

采用Friedman M法統(tǒng)計分析不同采收時間地稔經(jīng)不同溫度干燥后沒食子酸及槲皮素的含量，由結(jié)果可知地稔經(jīng)不同溫度干燥處理后兩成分含量有差別(P﹤0.05，α=0.05)，室內(nèi)陰干樣品兩成分含量均高于經(jīng)不同溫度烘干的樣品，均具統(tǒng)計學(xué)意義。兩成分含量隨著干燥溫度降低而顯著升高，5月初采收的地稔兩成分總含量最高。

表1 地稔(經(jīng)不同溫度干燥)中沒食子酸和槲皮素的含量測定結(jié)果(n=2)

圖2 干燥溫度和采收時間對地稔中沒食子酸、 槲皮素含量的影響曲線圖

3 討論

3.1 地稔最佳干燥溫度

2010年版《中國藥典》第二增補本中規(guī)定，飲片水分通常不得過13%，按照此標準要求，以沒食子酸、槲皮素含量為指標，結(jié)合實際生產(chǎn)條件，考察不同干燥溫度對地稔中兩活性成分含量的影響。課題研究中發(fā)現(xiàn)，曬干和60 ℃烘干無顯著差別，而且受天氣影響、難以控制曬干的程度，因而選擇室內(nèi)陰干、低溫烘干(60 ℃)、高溫烘干(80 ℃)三個因素進行研究。由試驗結(jié)果可知，陰干的地稔藥材沒食子酸及槲皮素含量均高于低溫烘干(60 ℃)、高溫烘干(80 ℃)的樣品，且陰干藥材的水分含量均在12%以內(nèi)，符合《中國藥典》要求。目前，市場上地稔飲片質(zhì)量參差不齊，多為葉黃、數(shù)量少，莖、根數(shù)量多，樣品中沒食子酸、槲皮素含量不高，而畬民一般在夏季挖取地稔全草，洗凈，除去雜質(zhì)，曬干或鮮用。本研究的結(jié)果對提高地稔飲片質(zhì)量、提高藥效具有一定的意義。

3.2 地稔最佳采收期

研究發(fā)現(xiàn)，以活性成分沒食子酸及槲皮素為指標，沒食子酸以陰干、6月中旬采收的地稔含量最高，槲皮素以陰干、5月初采收的地稔含量最高，其兩者總量以5月初為高，故最佳采收期為5月初、花未開時。地稔最佳采收期的確定還應(yīng)考慮產(chǎn)量和其他因素，實際大規(guī)模生產(chǎn)中地稔最佳采收期還有待進一步研究。

[1] 覃迅云，羅金裕，高志剛.中國瑤藥學(xué)[M].南寧：廣西民族出版社，2002：712.

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[3] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999.

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Study on the Influence of the Content of Gallic Acid and Quercetin in Traditional She Medicine-Melastoma dodecandrum by Drying Temperature and Harvest Time

LIU Min，LIU Shuaiying，YU Le，LI Shuifu*

(LishuiInstituteforFoodandDrugControl，Lishui323000，China)

Objective：Through comparing the influence of the contents of gallic acid and quercetin in Traditional She MedicineMelastomadodecandrumby different drying temperature and harvest time，to determine the optimal drying temperature and the best harvest time.MethodsHPLC was applied with the chromatographic condition as follows：the chromatographic column was Agilent-SB C18(4.6 mm×250 mm，5μm)at 30 ℃；methanol-0.4% phosphoric acid as the mobile phrase，gradient elution，flow rate 1.0 mL·min-1，the detection wavelength was 254 nm.ResultsThe contents of gallic acid and quercetin inM.dodecandrumobviously elevated along with the reduce of dry temperature，and the best of them is dried in shade.The contents of total two components were higher in early May than other months.ConclusionDrying temperature and harvest time appeared to be the key factor to the contents of gallic acid and quercetin inM.dodecandrum.Taking the contents gallic acid and quercetin as the index，the optimal harvest time is in early May，when flowers are not open.

Melastomadodecandrum；Gallic acid；Quercetin；Drying temperature；Harvest time

浙江省常用畬藥質(zhì)量評價技術(shù)與規(guī)范化研究(20100410)

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李水福，主任中藥師，研究方向：中藥/畬藥質(zhì)量控制及分析；Tel：(0578)2155989，E-mail：lsf6789@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.07.010

2014-02-24)