鄭肖蘭+易克賢+吳偉懷+習(xí)金根+鄭金龍+袁鸞英+梁艷瓊+賀春萍

摘 要 采用室內(nèi)生長速率法，研究戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑混配對橡膠樹炭疽病菌的增效作用。結(jié)果表明，不同配比的戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑?qū)ο鹉z炭疽病菌的聯(lián)合作用表現(xiàn)為拮抗性、加和性及增效性3種不同作用，不同的炭疽病菌株對同種配比的藥劑表現(xiàn)出不同的敏感性。戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑以1∶3混配對膠孢炭疽菌RC178的增效最明顯；1∶3和2∶5混配時，對尖孢炭疽菌RC169增效最佳；2∶5混配時，對膠孢炭疽菌RC227增效最優(yōu)。

關(guān)鍵詞 炭疽菌 ；戊唑醇 ；苯醚甲環(huán)唑 ；聯(lián)合作用

分類號 S763.7

Co-toxicity of Tebuconazole and Difenoconazole against

Colletotrichum sp. on Rubber Tree

ZHENG Xiaolan1） YI Kexian1） WU Weihuai1） XI Jingen1） ZHENG Jinlong1）

YUAN Luanying2） LIANG Yanqiong1） HE Chunping1）

（1 Institute of Environment and Plant Protection， CATAS， Haikou，Hainan 571101， China

2 College of Environment and Plant Protection， Hainan University， Haikou， Hainan 570228，China）

Abstract The synergistic activity of tebuconazole/ difenoconazole complex against the Colletotrichum of rubber tree was studied based on the mycelial growth method. The result showed that the combined effect of different proportions of tebuconazole and difenoconazole on Colletotrichum of rubber tree performance for three different effects of antagonistic， additive and synergistic. The strains of Colletotrichum agents on the same proportion showed different sensitivity. The mixtures with the ratio of tebuconazole and difenoconazole as 1：3 for C. gloeosporioides RC178 synergistic most obvious； when the ratio with 1：3 and 2：5 for C. oxysporum RC169 were best efficiency ； and the ratio of 2：5 for C. gloeosporioides RC227 was optimal efficiency.

Keywords Colletotrichum ； ebuconazole ； difenoconazole ； joint action

橡膠樹炭疽病是橡膠生產(chǎn)上的重要葉部病害之一，具有來勢猛、流行快、落葉迅速等特點[1]。該病在亞非橡膠種植國家廣泛發(fā)生，其中馬來西亞、斯里蘭卡、印度、中國和西非等國家發(fā)病較嚴重[2]。其主要為害橡膠樹的嫩葉、嫩梢，引起橡膠樹的反復(fù)落葉和嫩梢回枯，嚴重時可導(dǎo)致橡膠樹莖干腐爛甚至整株死亡。20世紀80～90年代，該病在廣東和海南2個墾區(qū)連續(xù)暴發(fā)流行，造成干膠損失分別為1 300和5 000 t以上[2]。進入21世紀以來，橡膠樹炭疽病在這2植膠區(qū)呈逐年上升趨勢。

一直以來，膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）都被認為是橡膠樹炭疽病的唯一病原物。 1997年，Jayasinghe等在對斯里蘭卡橡膠樹炭疽病菌的研究中首次發(fā)現(xiàn)尖孢炭疽菌（C. acutatum）的為害[3]。相關(guān)研究表明，在中國侵染橡膠樹的炭疽病菌為膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）[4-5]。2008年，在中國云南西雙版納植膠區(qū)首次發(fā)現(xiàn)尖孢炭疽菌的為害[6]。尖孢炭疽菌原來被描述作為果實采后的一種病害[7-8]，近年對橡膠樹生產(chǎn)導(dǎo)致嚴重損失[9-11]。2009年5月，海南省東方市廣壩農(nóng)場有1 200 hm2開割橡膠樹發(fā)生“尖孢炭疽菌”為害[12]。隨后通過大田病害發(fā)展及農(nóng)藥毒力測定研究發(fā)現(xiàn)，膠孢炭疽菌對農(nóng)藥的敏感性較尖孢炭疽菌敏感，尖孢炭疽菌有較強的耐藥性。C. acutatum和C. gloeosporioides還?；旌锨秩鞠鹉z樹，為防治該類病害帶來更大的困難。目前該病的防治主要以咪鮮胺、多菌靈和甲基托布津為主[2]，但橡膠樹炭疽病菌的抗藥性不斷增強，田間防治效果下降，因此尋求新的農(nóng)藥成分及探索科學(xué)有效的混配農(nóng)藥是解決問題的有效途徑。

戊唑醇（Tebuconazole）和苯醚甲環(huán)唑（Difenoconazole）均屬三唑類殺菌劑，三唑類殺菌劑是一類麥角甾醇抑制劑，主要作用機理是抑制麥角甾醇中間體的氧化脫甲基反應(yīng)，特別是對2，4-亞甲基-二氫羊毛甾醇結(jié)構(gòu)中14位碳原子上脫甲基反應(yīng)的抑制[13]。戊唑醇可作為葉面噴霧劑和種子處理劑來使用，其殺菌譜廣、活性高、持效期長、對許多作物包括單子葉植物和雙子葉植物安全。一般對白粉菌屬（Oidium）、柄銹菌屬（Puccinia Persoon）、喙孢屬（Rhynchosporium Heinsen ex Frank）、核腔菌屬（Pyrenophora Fries）和殼針孢屬（Septoria Sacc.）引起的病害均能有效防治[14]。苯醚甲環(huán)唑?qū)ψ幽揖?（Ascomycotina）、擔子菌（Basidiomycotina）和包括殼二孢屬（Ascochyta Lid）、尾孢屬（Cercospora Fresenius）、刺盤孢屬（Colletotrichum Corda）、球座菌屬（Guignardia Viala et Revaz）、莖點霉屬（Phoma Sacc）、殼針孢屬（Septoria Sacc.）、黑星菌屬（Venturia de Not.）在內(nèi)的半知菌有較好的防治效果[15]。戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑?qū)δ竟夏z孢炭疽菌有較好的防治效果[16]。本研究通過室內(nèi)菌絲生長速率法，測定戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑單劑和不同配比對橡膠樹炭疽病菌菌株的生物活性，旨在明確不同比例混配對橡膠樹炭疽病菌2種不同炭疽菌的增效作用，篩選出最佳配比，為2種藥劑的實際混配應(yīng)用提供理論依據(jù)。endprint

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 參試菌株

橡膠樹炭疽病病原菌RC178（膠孢炭疽菌）、RC227（膠孢炭疽菌）、RC169（尖孢炭疽菌）3個菌株，均由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物研究所提供。

1.1.2 參試藥劑

試驗藥劑A：戊唑醇原藥（山東東泰農(nóng)化有限公司），含量97%。

試驗藥劑B：苯醚甲環(huán)唑原藥（山東東泰農(nóng)化有限公司），含量95%。

1.1.3 其他試劑

用二甲基甲酰胺（DMF）溶解戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑原藥，配制高濃度母液和進一步配置系列濃度。

1.1.4 供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基，用于制備含藥培養(yǎng)基，參照方中達[17]的方法配制。

1.2 方法

1.2.1 單劑抑制作用測定

采用生長速率法進行測定。在戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑原藥分別配成100、200、400、800、1 600、3 200和6 400 μg/mL。將分裝于三角瓶中的PDA（每瓶含117 mL PDA）熔化，冷卻至約45℃時，每瓶分別加入上述系列濃度藥液。每瓶PDA加入對應(yīng)的藥液3 mL，這樣每一種藥劑在PDA中的最終濃度均為0.039 1、0.156 3、0.625 0、2.500 0、10.000 0、40.000 0、160.000 0 μg/mL。對照為不含藥培養(yǎng)基。加入藥液或滅菌去離子水后馬上將PDA搖動均勻，并倒入Ф 90 mm的培養(yǎng)皿，每皿16 mL。每個處理4個重復(fù)。于培養(yǎng)基平面接種直徑為5 mm的菌餅（有菌絲一面朝下），置于28 ℃恒溫培養(yǎng)。待菌絲長至15 mm，用十字交叉法測量菌落直徑，并計算生長抑制率，并利用Excel求出毒力回歸曲線、EC90值及相關(guān)系數(shù)r。

1.2.2 混劑聯(lián)合毒力測定

根據(jù)單劑毒力測定結(jié)果，以單劑戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑的有效中濃度為基礎(chǔ)，按1∶1，1∶2，1∶3，2∶1，2∶3，2∶5，3∶1，3∶2，3∶5質(zhì)量比例進行藥劑配比，每個配比設(shè)定8個濃度梯度，按生長速率法進行測定并求出毒力回歸方程、EC90觀察值（EC90ab）及相關(guān)系數(shù)r。EC90的理論值（EC90th）公式為：EC90th=（A+B）÷[A÷EC90as+B÷EC90bs]。式中：EC90th--混合藥物的EC90理論值；A--A藥劑在混合藥物中的比例；B--B藥劑在混合藥物中的比例；EC90as--A藥單劑的EC90觀察值；EC90bs--B藥單劑的EC90觀察值。依據(jù)單劑和混劑的EC90計算共毒系數(shù)（CTC），共毒系數(shù)>1.5，表示有增效作用；共毒系數(shù)<1，表示有拮抗作用；1<共毒系數(shù)<1.5，表示有加和作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑?qū)ο鹉z樹膠孢炭疽菌RC178的增效作用

由表1可知，戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑?qū)ο鹉z樹膠孢炭疽菌RC178的EC90值分別為98.661 2和63.453 8 μg/mL。當A∶B=1∶1，2∶1，3∶1，3∶2時，共毒系數(shù)分別為0.9、0.6、0.5、0.8，表明2藥劑混配對膠孢炭疽菌RC178是拮抗作用；當A∶B=2∶3、2∶5、3∶5，表現(xiàn)加和作用；當A∶B=1∶2、1∶3時，共毒系數(shù)分別為1.6和3.7，表明戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑按該比例混配時表現(xiàn)增效作用，尤其1∶3時，共毒系數(shù)最大，表明戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑以比例A∶B=1∶3時混配對RC178的增效最明顯。

2.2 戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑?qū)ο鹉z樹膠孢炭疽菌RC169的增效作用

由圖2可知，戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑?qū)ο鹉z樹膠孢炭疽菌RC178的EC90值分別為6.174 2和5.886 4 μg/mL。當A∶B=2∶1時，共毒系數(shù)為0.9，表現(xiàn)拮抗作用；當A∶B=3∶1、3∶2時，共毒系數(shù)分別為1.4和1.2，表現(xiàn)加和作用。當A∶B=1∶1、1∶2、1∶3、2∶3、2∶5和3∶5時，共毒系數(shù)分別為1.5、2.9、3.0、2.2、3.0、1.6，表現(xiàn)出增效作用。而當A∶B=1∶3、2∶5時，共毒系數(shù)最大，為3.0，表明2種藥劑以1∶3和2∶5混配時，對尖孢炭疽菌RC169增效最明顯。

2.3 戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑?qū)ο鹉z樹膠孢炭疽菌RC227的增效作用

由表3可知，戊唑醇（A）與苯醚甲環(huán)唑（B）對膠孢炭疽菌RC227的EC90分別是5.296 0和4.026 7 μg/mL。當A∶B=1∶1、2∶1、3∶1、3∶2時，共毒系數(shù)均<1，表現(xiàn)拮抗作用；A∶B=2∶3比例混配時，共毒系數(shù)為1.3，表現(xiàn)出加和作用；A∶B=1∶2、1∶3、2∶5和3∶5時，共毒系數(shù)均>1.5；當A∶B=2∶5時，共毒系數(shù)最大，達到4.1，表明增效明顯。

3 討論與結(jié)論

炭疽病是橡膠樹上一種最常見的病害，已成為影響天然橡膠產(chǎn)量的主要限制因素。該病最主要的防治措施是化學(xué)防治。本研究結(jié)果表明，戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑單劑對橡膠樹炭疽病菌膠孢和尖孢2種不同炭疽菌的毒力較低，而當戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑按一定的比例混配后，對橡膠樹炭疽病菌的聯(lián)合作用表現(xiàn)為拮抗性、加和性及增效性3種不同作用。戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑以比例1∶3混配時對膠孢炭疽菌RC178的增效最明顯；以1∶3和2∶5混配時，對尖孢炭疽菌RC169增效最佳；以2∶5的比例混配時，對膠孢炭疽菌RC227增效最優(yōu)。2種藥劑的同一配比對不同菌株的抑制作用不同，表現(xiàn)效果也不完全統(tǒng)一；聯(lián)合毒力的效果與2種藥劑的配比量之間的相關(guān)性主要隨著苯醚甲環(huán)唑的比例增加而防效增強，配比低的時候還出現(xiàn)拮抗現(xiàn)象；而菌株RC178對參試藥劑的敏感性明顯比其他2個菌株低，表現(xiàn)耐藥性很強。畢秋艷[18]等通過福美雙和戊唑醇復(fù)配對小麥赤霉病菌作用也發(fā)現(xiàn)，不同配比間出現(xiàn)增效與拮抗現(xiàn)象，進一步通過增效與拮抗組合對小麥赤霉病菌細胞膜透性及內(nèi)含物滲漏的影響測定，結(jié)果顯示增效組合處理菌絲細胞后，存在著菌絲細胞內(nèi)含物不斷外滲的現(xiàn)象；而拮抗組合處理的菌絲細胞滲透性比對照較弱。測定菌絲細胞滲漏的還原糖、幾丁質(zhì)酶、可溶性蛋白等3種細胞內(nèi)含物含量，發(fā)現(xiàn)其隨時間變化趨勢不同：增效組合使還原糖含量在25 h時，下降為對照的18.91%；幾丁質(zhì)酶活性在5～20 h之間增加；可溶性蛋白含量短期內(nèi)上升隨后下降。而在拮抗組合條件下，菌絲細胞內(nèi)含物含量隨時間的變化與對照或某一單劑趨勢相同。藥劑組合協(xié)同增效作用測定和增效與拮抗組合的作用機理值得深入探討，并應(yīng)成為篩選和評價藥劑增效組合的依據(jù)。endprint

殺菌劑混配使用比殺菌劑單用防治效果更優(yōu)，不僅延緩病原菌產(chǎn)生抗藥性，還可降低殺菌劑開發(fā)的難度。目前關(guān)于苯醚甲環(huán)唑與其他殺菌劑的復(fù)配報道不少。朱衛(wèi)剛等[19]研究了丙環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑復(fù)配對水稻紋枯病的聯(lián)合毒力；梁春浩等[20]研究發(fā)現(xiàn)，多菌靈與苯醚甲環(huán)唑混用對葡萄褐斑病有明顯增效作用；范子耀等[21]發(fā)現(xiàn)，苯醚甲環(huán)唑與嘧菌酯聯(lián)合使用可顯著提高其對馬鈴薯早疫病菌的防治效果；宋根苗等[22]研究了噻霉酮和苯醚甲環(huán)唑?qū)?種不同病原菌的增效作用；張帥等[23]研究發(fā)現(xiàn)，苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯混合物對山藥炭疽病菌具有增效作用。目前，關(guān)于戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑聯(lián)合使用防治橡膠樹炭疽病的研究報道少見。

三唑類殺菌劑的主要作用機制是抑制細胞的麥角甾醇的生物合成，具有廣譜、保護、治療及內(nèi)吸作用，由于其作用位點多，病原菌抗藥性的產(chǎn)生較緩慢。戊唑醇與傳統(tǒng)的三唑類殺菌劑相比，還存在其他作用位點，但同樣存在于麥角甾醇生物合成過程中。二者混配使之增加了作用位點和作用途徑，一段時期內(nèi)病原菌的簡單變異不足于適應(yīng)全部作用位點，從而提高了對病菌的毒力。劉學(xué)敏等[24]指出，不同殺菌劑混合后能否產(chǎn)生增效作用取決于混劑中各個成分的比例及其作用方式和機制。戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑的合理復(fù)配使用，可明顯提高藥劑的毒力，從而可降低戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑的生產(chǎn)成本，還可以在防治炭疽病上提供一種新的選擇，避免長期單一大量的使用同一種藥劑加速橡膠樹炭疽病菌抗藥性的產(chǎn)生，延長2藥劑的使用壽命。二者混配對橡膠樹炭疽病實際防治效果，還有待進一步的深入研究。

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殺菌劑混配使用比殺菌劑單用防治效果更優(yōu)，不僅延緩病原菌產(chǎn)生抗藥性，還可降低殺菌劑開發(fā)的難度。目前關(guān)于苯醚甲環(huán)唑與其他殺菌劑的復(fù)配報道不少。朱衛(wèi)剛等[19]研究了丙環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑復(fù)配對水稻紋枯病的聯(lián)合毒力；梁春浩等[20]研究發(fā)現(xiàn)，多菌靈與苯醚甲環(huán)唑混用對葡萄褐斑病有明顯增效作用；范子耀等[21]發(fā)現(xiàn)，苯醚甲環(huán)唑與嘧菌酯聯(lián)合使用可顯著提高其對馬鈴薯早疫病菌的防治效果；宋根苗等[22]研究了噻霉酮和苯醚甲環(huán)唑?qū)?種不同病原菌的增效作用；張帥等[23]研究發(fā)現(xiàn)，苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯混合物對山藥炭疽病菌具有增效作用。目前，關(guān)于戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑聯(lián)合使用防治橡膠樹炭疽病的研究報道少見。

三唑類殺菌劑的主要作用機制是抑制細胞的麥角甾醇的生物合成，具有廣譜、保護、治療及內(nèi)吸作用，由于其作用位點多，病原菌抗藥性的產(chǎn)生較緩慢。戊唑醇與傳統(tǒng)的三唑類殺菌劑相比，還存在其他作用位點，但同樣存在于麥角甾醇生物合成過程中。二者混配使之增加了作用位點和作用途徑，一段時期內(nèi)病原菌的簡單變異不足于適應(yīng)全部作用位點，從而提高了對病菌的毒力。劉學(xué)敏等[24]指出，不同殺菌劑混合后能否產(chǎn)生增效作用取決于混劑中各個成分的比例及其作用方式和機制。戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑的合理復(fù)配使用，可明顯提高藥劑的毒力，從而可降低戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑的生產(chǎn)成本，還可以在防治炭疽病上提供一種新的選擇，避免長期單一大量的使用同一種藥劑加速橡膠樹炭疽病菌抗藥性的產(chǎn)生，延長2藥劑的使用壽命。二者混配對橡膠樹炭疽病實際防治效果，還有待進一步的深入研究。

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殺菌劑混配使用比殺菌劑單用防治效果更優(yōu)，不僅延緩病原菌產(chǎn)生抗藥性，還可降低殺菌劑開發(fā)的難度。目前關(guān)于苯醚甲環(huán)唑與其他殺菌劑的復(fù)配報道不少。朱衛(wèi)剛等[19]研究了丙環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑復(fù)配對水稻紋枯病的聯(lián)合毒力；梁春浩等[20]研究發(fā)現(xiàn)，多菌靈與苯醚甲環(huán)唑混用對葡萄褐斑病有明顯增效作用；范子耀等[21]發(fā)現(xiàn)，苯醚甲環(huán)唑與嘧菌酯聯(lián)合使用可顯著提高其對馬鈴薯早疫病菌的防治效果；宋根苗等[22]研究了噻霉酮和苯醚甲環(huán)唑?qū)?種不同病原菌的增效作用；張帥等[23]研究發(fā)現(xiàn)，苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯混合物對山藥炭疽病菌具有增效作用。目前，關(guān)于戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑聯(lián)合使用防治橡膠樹炭疽病的研究報道少見。

三唑類殺菌劑的主要作用機制是抑制細胞的麥角甾醇的生物合成，具有廣譜、保護、治療及內(nèi)吸作用，由于其作用位點多，病原菌抗藥性的產(chǎn)生較緩慢。戊唑醇與傳統(tǒng)的三唑類殺菌劑相比，還存在其他作用位點，但同樣存在于麥角甾醇生物合成過程中。二者混配使之增加了作用位點和作用途徑，一段時期內(nèi)病原菌的簡單變異不足于適應(yīng)全部作用位點，從而提高了對病菌的毒力。劉學(xué)敏等[24]指出，不同殺菌劑混合后能否產(chǎn)生增效作用取決于混劑中各個成分的比例及其作用方式和機制。戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑的合理復(fù)配使用，可明顯提高藥劑的毒力，從而可降低戊唑醇與苯醚甲環(huán)唑的生產(chǎn)成本，還可以在防治炭疽病上提供一種新的選擇，避免長期單一大量的使用同一種藥劑加速橡膠樹炭疽病菌抗藥性的產(chǎn)生，延長2藥劑的使用壽命。二者混配對橡膠樹炭疽病實際防治效果，還有待進一步的深入研究。

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