陳寶芳，劉政波，畢研文，楊永恒，宮俊華

(泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院 山東 泰安 271000)

泰山四葉參不同品種總黃酮含量測(cè)定與比較△

陳寶芳*，劉政波，畢研文，楊永恒，宮俊華

(泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院 山東 泰安 271000)

目的：比較泰山四葉參不同品種總黃酮含量，為品種質(zhì)量評(píng)價(jià)及合理利用提供依據(jù)。方法：采用紫外分光光度法測(cè)定總黃酮含量，以蘆丁為對(duì)照品，測(cè)定波長(zhǎng)510 nm。結(jié)果：泰山四葉參三個(gè)參試品種總黃酮含量分別為1.32%、1.59%、1.38%，對(duì)照泰參1號(hào)總黃酮含量1.11%。結(jié)論：泰山四葉參品種之間總黃酮含量有差異，3個(gè)參試品種與對(duì)照總黃酮含量差異皆達(dá)到極顯著水平，泰參3號(hào)雜交種總黃酮含量極顯著高于泰參2號(hào)和泰參4號(hào)，表現(xiàn)雜交優(yōu)勢(shì)明顯。

四葉參；泰山；不同品種；總黃酮

四葉參CodonopsislanceolataBenth.et hook.F.系桔?？艭ampanulaceae黨參屬多年生藤蔓草本植物，泰安當(dāng)?shù)厮追Q泰山四葉參[1]。以根入藥，有清熱解毒、祛痰鎮(zhèn)咳、強(qiáng)壯滋補(bǔ)的作用，用于治療肺癰咳嗽、病后虛弱、產(chǎn)后缺乳等癥；浸泡白酒，常飲能舒筋活血 健身補(bǔ)氣，被譽(yù)為“泰山之寶”[2]。四葉參含有總黃酮、多糖、生物堿等多種成分，其中黃酮類化合物廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分；具有抗炎、抗過(guò)敏、抑制細(xì)菌、抗病毒、抗腫瘤、治療心血管疾病等作用，在人類的營(yíng)養(yǎng)健康和疾病防治上有著廣闊的應(yīng)用前景。王德才等[3]測(cè)定了泰山四葉參中總黃酮和多糖的含量，目前對(duì)四葉參不同品種的總黃酮含量比較未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)參照四葉參、黨參、虎杖、砂仁總黃酮的測(cè)定方法[3-6]，以二年生泰山四葉參不同品種為研究對(duì)象，對(duì)總黃酮進(jìn)行提取與測(cè)定，明確泰山四葉參不同品種的總黃酮含量，為四葉參不同品種合理的開(kāi)發(fā)利用及質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材來(lái)源

四葉參采自泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院育種基地自主育成品種泰參2號(hào)、泰參3號(hào)(雜交種)、泰參4號(hào)新品系，審定品種泰參1號(hào)為對(duì)照品種，參試品種均采用生長(zhǎng)2年的四葉參鮮根，收獲時(shí)間為2013年10月28日，采集樣本首先洗凈，臺(tái)式調(diào)節(jié)式切片機(jī)(型號(hào)DXQ-130B)切片、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(型號(hào)DHG-9143B5-111)，在80 ℃下烘干至水分含量10%，稱重，粉碎后過(guò)4號(hào)篩，冷藏備用。

1.2 試劑與儀器

蘆丁對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。島津UV-2450型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；RE-5205型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；JAl2003B型電子分析天平(上海精天儀器有限公司)。

1.3 總黃酮含量測(cè)定方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 蘆丁于120 ℃下干燥至質(zhì)量恒定，準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品30 mg，溶于100 mL甲醇溶液中。得質(zhì)量濃度為0.3 g·L-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密量取蘆丁對(duì)照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分別置于25 mL容量瓶中，加甲醇至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加1 mol·L-1的氫氧化鈉溶液10 mL，再加甲醇至刻度，搖勻，靜置15 min，以相應(yīng)試劑為空白，在510 nm測(cè)定吸光度，以對(duì)照品蘆丁濃度(X)為橫坐標(biāo)，測(cè)得的吸光度(Y)為縱坐標(biāo)，得回歸方程為Y=0.010 4X+0.054 8，相關(guān)系數(shù)r=0.999 5。表明樣品溶液在6～60 μg·mL-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

1.3.2 供試品溶液制備 精密稱取取四葉參粉末(過(guò)2號(hào)篩)2 g，至具塞錐形瓶中，加入甲醇50 mL，超聲提取30 min，放冷，補(bǔ)足重量，過(guò)0.45 μm的微孔濾膜，濾液即為供試品溶液，備用。

1.3.3樣品總黃酮含量的測(cè)定 準(zhǔn)確量取1 mL供試品溶液至25 mL容量瓶中，加甲醇至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加1 mol·L-1的氫氧化鈉溶液10 mL，再加甲醇至刻度，搖勻，靜置15 min，以相應(yīng)試劑為空白，在510 nm測(cè)定吸光度。計(jì)算四葉參中總黃酮的含量。黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備見(jiàn)表1、圖1。

表1 四葉參不同濃度下的吸光度

圖1 黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線

2 結(jié)果與分析

2.1 泰山四葉參不同品種總黃酮含量

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用DPS軟件進(jìn)行方差分析，不同品種之間采用Duncan新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。以4個(gè)品種的平均總黃酮含量，用Excel作柱形分析圖。結(jié)果見(jiàn)表2和圖2。

表2和圖2結(jié)果表明，泰山四葉參不同品種之間總黃酮含量有差異，3個(gè)品種總黃酮含量均高于對(duì)照，泰參3號(hào)品種總黃酮含量最高，其次為泰參4號(hào)，泰參2號(hào)。多重比較表明，3個(gè)品種總黃酮含量與對(duì)照差異均達(dá)極顯著水平，泰參3號(hào)與泰參2號(hào)、泰參4號(hào)差異達(dá)極顯著水平，泰參2號(hào)、泰參4號(hào)兩品種之間差異不顯著。

表2 泰山四葉參不同品種總黃酮含量

圖2 泰山四葉參不同品種總黃酮含量比較

3 結(jié)論

紫外分光光度法測(cè)定泰山四葉參總黃酮含量，樣品溶液在6～60 μg·mL-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。結(jié)果表明，泰山四葉參品種之間總黃酮含量有一定差別。本研究結(jié)論與劉偉等[7-8]不同丹參品種其活性成分含量存在差異一致。

3個(gè)參試品種在根的外觀質(zhì)量與內(nèi)在品質(zhì)上都優(yōu)于對(duì)照品種泰參1號(hào)，與對(duì)照品種比較總黃酮含量差異均達(dá)極顯著水平。生產(chǎn)上應(yīng)根據(jù)不同的應(yīng)用目的在適宜的種植區(qū)選用不同的四葉參品種，從而達(dá)到對(duì)四葉參藥材的最佳利用。

產(chǎn)地、生長(zhǎng)環(huán)境及生長(zhǎng)年限均是影響多年生藥用植物主要成分含量的因素，不同栽培年限和采收季節(jié)，藥材質(zhì)量有較大變化[9-10]。本試驗(yàn)首次比較了泰山四葉參不同品種總黃酮含量，同時(shí)也對(duì)同一品種的不同生長(zhǎng)年限總黃酮含量做了測(cè)定和分析，總

黃酮含量表現(xiàn)隨生長(zhǎng)年限延長(zhǎng)而逐步增加的趨勢(shì)，但年際間總黃酮含量差異沒(méi)有達(dá)到顯著水平，其原因有待進(jìn)一步研究。

[1] 陳寶芳，畢研文，楊永恒，等.泰山四葉參新品種泰參2號(hào)的選育[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2013，15(12)，1075-1077.

[2] 畢勝，李桂蘭，于崇田.泰山四大名藥及其保護(hù)[J].中國(guó)林副特產(chǎn)，1999，(2)：62.

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DeterminationandComparisonofTotalFlavonoidsContentinDifferentTaishanCodonopsislanceolataVarieties

CHENBaofang*，LIUZhengbo，BIYanwen，YANGYongheng，GONGJunhua

(TaianAcademyofAgriculturalSciences，Taian271000，China)

Objective：To investigate the total flavonoids content in different varieties of TaishanCodonopsislanceolata，and provide the basis for quality evaluation and reasonable utilization of TaishanC.lanceolatavarieties.Methods：The content of total flavonoids was determined by UV spectrophotometry，with rutin as a standard，the detection wavelength was 510 nm.Results：The content of total flavonoids in three TaishanC.lanceolatatested varieties were 1.32%，1.59%，1.38%，the content of total flavonoids in the Taishen No.1 was 1.11%.Conclusion：The differences between the content of total flavonoids in three varieties of TaishanC.lanceolata，as compared with the total flavonoids content of Taishen No.1，all reached the extremely significant level.Total flavonoids content of Tai Shen No.3 was significantly higher than that of the Taishen No.2 and Taishen No.4 and it shows apparant heterosis.

Codonopsislanceolata；Taishan；Varieties；Total flavonoids

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.08.009

2014-03-07)

泰山四葉參新品種選育及加工利用，泰安市科技計(jì)劃(201340629)；泰安市中草藥科技平臺(tái)建設(shè)項(xiàng)目

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陳寶芳，高級(jí)農(nóng)藝師，研究方向：中草藥育種、加工及質(zhì)量評(píng)價(jià)；E-mail：chenbaofangts@163.com