1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川 成都 610075；2.中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

附子保健品刨附片及炮天雄的急性毒性研究

謝曉芳1,2李夢(mèng)婷1代良萍1張雪1,2彭成1,2饒朝龍1,2

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川 成都 610075；2.中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

目的測(cè)定灌胃炮天雄和刨附片對(duì)小鼠的急性毒性。方法待禁食不禁水12h后，各組24h內(nèi)一次性給藥，其中刨附片、炮天雄組均分別灌胃刨附片水煎液25.2g生藥/kg或炮天雄水煎液27.2g生藥/kg，正常對(duì)照組灌胃蒸餾水，給藥體積均為40ml/kg，給藥后觀察并記錄小鼠一般行為活動(dòng)、體重、飲食及死亡等情況，連續(xù)觀察14d。結(jié)果刨附片組小鼠和炮天雄組小鼠無(wú)死亡，一般狀態(tài)正常，無(wú)明顯異常行為或變化，體重和攝食量逐日增長(zhǎng)，與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論刨附片、炮天雄水煎液灌胃小鼠均無(wú)明顯急性毒性，最大給藥量分別為25.2、27.2g生藥/kg，若按附子臨床人用量為15g/日算，均大于人用量的100倍。

刨附片；炮天雄；急性毒性

附子為毛茛科植物烏頭AconitumcarmichaeliDebx.的子根加工品。自古以來，附子是臨床療效顯著而毒副作用大的中藥，但由于其良好的溫陽(yáng)功效，在我國(guó)陜西、云南、四川等附子產(chǎn)區(qū)自古將其用作藥膳以補(bǔ)陽(yáng)散寒[1]。刨附片和炮天雄是采用現(xiàn)代炮制手段制備的附子保健品，煲湯后服用，具有溫腎壯陽(yáng)、祛寒止痛、扶陽(yáng)補(bǔ)虛的功效，為外貿(mào)保健品。然而，目前暫無(wú)其安全性的研究報(bào)道，因此，本課題研究了其水煎液灌胃小鼠后的急性毒性試驗(yàn)，以初步了解其安全性。

1 材料與方法

1.1 藥物 刨附片，炮天雄，均由四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有限公司提供。水煎液制備工藝：稱取刨附片403 g或炮天雄430 g，用蒸餾水浸泡30 min，按比例分別加入10倍量水，煎煮5 h，將藥液倒出；再加入8倍量水，煎煮3 h，收集水煎液，過濾，濃縮至正好通過12號(hào)灌胃針。實(shí)際試驗(yàn)時(shí)，刨附片、炮天雄的濃度分別為0.63、0.68 g生藥/mL。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，SPF級(jí)，體重(20±2)g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，合格證號(hào)：SCXK(川)2008-11，檢疫后備用。實(shí)驗(yàn)環(huán)境：成都中醫(yī)藥大學(xué)國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥藥理科研三級(jí)實(shí)驗(yàn)室(TCM-2009-315)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 取19～23g健康昆明種小鼠60只，雌雄各半。適應(yīng)環(huán)境后按體重隨機(jī)分為正常組、刨附片組、炮天雄組，每組20只，雌雄各半。參照《中醫(yī)藥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》進(jìn)行試驗(yàn)[2]。禁食不禁水12h后，各組24h內(nèi)一次性給藥，其中刨附片、炮天雄組分別灌胃刨附片水煎液25.2g生藥/kg、炮天雄水煎液27.2g生藥/kg；正常對(duì)照組灌胃去離子水，給藥體積40mL/kg。給藥后觀察并記錄小鼠的行為活動(dòng)、飲食、大便等情況及急性毒性反應(yīng)和死亡數(shù)，連續(xù)觀察14d。于給藥前及給藥后第1、3、7、14天稱體重，并逐日測(cè)定攝食量。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，處死各組小鼠，解剖觀察其內(nèi)臟器的情況。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)一般狀態(tài)的影響 連續(xù)觀察14d，各組小鼠在給藥后的30min內(nèi)活動(dòng)稍有減少，為一次性大劑量給藥所致。隨后，刨附片組和炮天雄組小鼠與空白對(duì)照組小鼠表現(xiàn)無(wú)差異，均發(fā)育健康，肌肉豐滿，眼睛明亮而靈活、無(wú)異常的分泌物，肛周潔凈，攝食正常，四肢健壯，自發(fā)活動(dòng)正常，體重逐漸增加。鼻孔未見異常分泌物，未見呼吸困難、呼吸急促、喘息、紫紺、呼吸暫停等。皮膚無(wú)水腫或紅斑，被毛濃密而有光澤、緊貼其身，正?；顒?dòng)，肌力正常，正常反射、翻正反射存在，運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)，無(wú)痙攣、足尖步態(tài)、踏步、忙碌、低伏、肌束震顫等；無(wú)抽搐、昏厥、角弓反張等驚厥表現(xiàn)；眼睛無(wú)異常分泌物，無(wú)縮瞳、散瞳、眼球突出、眼瞼下垂、血淚、結(jié)膜渾濁、虹膜炎、結(jié)膜炎等，角膜反射、對(duì)光反射正常，無(wú)異常反射；無(wú)皮膚發(fā)紅或蒼白，尾、舌、耳、足墊、結(jié)膜、陰囊無(wú)發(fā)紅；無(wú)體涼、體熱、心動(dòng)過速、心動(dòng)過緩等；無(wú)口周毛潮濕、毛囊豎毛肌收縮等；無(wú)嘔吐及腹瀉，大便正常，不干，無(wú)水樣便，尿量、尿色正常。

2.2 對(duì)體重的影響 刨附片組和炮天雄組雌性小鼠、雄性小鼠體重增長(zhǎng)一致，各組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表1～表3。

2.3 對(duì)攝食量的影響 試驗(yàn)開始后，每日測(cè)定各組小鼠攝食量，制備相應(yīng)曲線；結(jié)果可見，刨附片組、炮天雄組的雌性小鼠、雄性小鼠攝食量變化曲線與空白對(duì)照組變化趨勢(shì)一致，無(wú)明顯異常，表明藥物對(duì)小鼠的攝食無(wú)影響，這與小鼠體重變化一致的結(jié)果相符。結(jié)果見圖1。

表1 炮天雄、刨附片灌胃小鼠急性毒性試驗(yàn)對(duì)小鼠體重的影響

表2 炮天雄、刨附片灌胃小鼠急性毒性試驗(yàn)對(duì)雌性小鼠體重的影響

表3 炮天雄、刨附片灌胃小鼠急性毒性試驗(yàn)對(duì)雄性小鼠體重的影響

3 討論

附子為傳統(tǒng)有毒中藥，但由于其良好的臨床療效而應(yīng)用廣泛，且在常年的應(yīng)用過程中形成了一系列有效的控毒方法[3]。尤其是隨著對(duì)附子毒性物質(zhì)基礎(chǔ)的研究、毒理學(xué)和毒作用機(jī)制研究及控毒方法體系的研究，彭成教授提出了“毒性物質(zhì)基礎(chǔ)-毒作用機(jī)制-控毒方法體系”的有毒中藥安全性評(píng)價(jià)模式，針對(duì)雙酯型生物堿是附子的主要毒性成分和雙酯型生物堿遇熱遇水不穩(wěn)定的特性，建立了控毒方法體系，使烏頭類有毒中藥的毒性控制進(jìn)入到現(xiàn)代方法學(xué)的層面[4]。其中，炮制是控制附子毒性的重要方法之一，在不同炮制方法下目前有數(shù)十種附子炮制品，其中藥用的主要有黑順片和白附片，新型精制飲片有黑順片配方顆粒、白附片配方顆粒、淡附片配方顆粒，保健品有炮天雄和刨附片。炮制可有效降低附子毒性，研究團(tuán)隊(duì)前期研究表明，附子不同炮制品泥附子、黑順片、白附片的醇提物灌胃小鼠的LD50分別為22.169、49.853、42.550g生藥/kg，毒性表現(xiàn)主要在消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)，可見經(jīng)炮制后的黑順片和白附片毒性較泥附子明顯降低[5]。炮制減毒的物質(zhì)基礎(chǔ)是通過炮制減少了附子中雙酯型生物堿的含量[6]。陜西周至縣等地食用附子十分強(qiáng)調(diào)久煎[1]，亦是通用此法。

炮天雄、刨附片是現(xiàn)代附子保健品，其在加工工藝中毒性成分被大量水解而丟失；同時(shí)，本課題在制備其水煎液時(shí)考慮到其食用中久煮的特點(diǎn)，第一次煎煮5h，第二次煎煮3h，使其所含雙酯型生物堿大量水解，因此其毒性明顯降低，在本試驗(yàn)劑量下，刨附片、炮天雄給予灌胃小鼠最大給藥量25.2、27.2g/kg，未引起明顯毒性反應(yīng)和動(dòng)物死亡，分別相當(dāng)于附子人用量的100倍以上，表明食用安全。但值得注意的是，為保證食用安全，首先，炮天雄、刨附片在食用中應(yīng)強(qiáng)調(diào)久煮；其次，根據(jù)中藥“十八反”的認(rèn)識(shí)，不宜與含有半夏、瓜蔞、貝母、白蘞、白及同服；第三，本保健品為溫陽(yáng)之品，素體陰虛或陽(yáng)亢體質(zhì)者不適宜。

[1]考玉萍，張化為.大劑量食用附子安全性和有效性研究[J].陜西中醫(yī)，2013，34(4)：478-480.

[2]彭成.中醫(yī)藥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：183.

[3]陳學(xué)習(xí)，彭成.附子毒性控制的多因互探析[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007，25(4)：680-681.

[4]彭成.中藥毒理學(xué)的構(gòu)建與內(nèi)涵[J].中藥與臨床，2013，4(1)：1-4.

[5]謝曉芳，彭成，易進(jìn)海，等.附子不同炮制品提取物急性毒性的比較研究[J].中藥與臨床，2012，3(3)：29-34.

[6]葉強(qiáng)，郭一平，彭成.炮制方法對(duì)附子生物堿類成分的影響[J].華西藥學(xué)雜志，2013，28(3)：275-277.

AcuteToxicityStudyofHealthProductsofAconitiLateralisRadixPaoTianxiongandBaoFupian

XIE Xiao-fang1,2,LI Meng-ting1,DAI Liang-ping1,ZHANG Xue1,2,PENG Cheng1,2,RAO Chao-Long

1.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Sichuan Province,Chengdu 610075,China;2.State Key Laboratory BreedingBase of Systematic Research,Development and Utilization of Chinese Medicine Resources,Sichuan Province, Chengdu 611137,China

objectiveTo observe the acute toxicity of Pao tianxiong (PTX) and Pao fupian(PFP)with administration by gavage.MethodsAfter fasting for 12h,the mice were given different drugs for once in 24h. The doses of PFP and PTX are 25.2g crude drug/kg(bw) and 27.2g crude drug/kg(bw).Mice in the control group was given distilled water.The given volume was 40ml/kg.Then,all the animals were monitored closely for 14 days on their normal behaviors, body weight, food consumption, death et al.ResultsNo death happened in both PTX-treated group and PFP-treated group; meanwhile,the behaviors,body weight and food consumptions in the drug-treated groups had no difference with the controlled group.ConclusionPFP and PTX don’t induce acute toxicities on mice by gavage and the maximum doses are 25.2,27.2g/kg in crude medicinal, which are more than 100 times dose of Aconiti Lateralis Radix on adult human in clinic.

Pao fupian；Pao tianxion；Acute toxicity

R285

A

1007-8517(2014)20-0018-02

2014.07.03)