施國明 蔡加彬 俞靜嫻 柯愛武 董兆如 張弛 張鵬飛 邱雙健 孫惠川 周儉 樊嘉

(復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院肝外科，上海 200032)

UHRF1(Ubiquitin-like，containing PHD and RING finger domains 1)作為表觀基因組的重要調(diào)控因子，與DNA甲基化的維持有關(guān)，參與多種生理和病理過程[1-2]。近來文獻(xiàn)報告，UHRF1在乳腺癌[3]、膀胱癌[4]、前列腺癌[5-7]、非小細(xì)胞肺癌[8]等多種腫瘤組織和細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)患者癌組織及癌旁組織中UHRF1的表達(dá)水平，并分析了UHRF1與HCC臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2005—2008年在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院肝外科行腫瘤根治性切除術(shù)且隨訪資料完整的556例HCC患者的腫瘤標(biāo)本，經(jīng)病理學(xué)證實診斷。556例中男性473例，女性83例。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療；標(biāo)本均在手術(shù)切除后15 min內(nèi)采集。

1.2 試劑 鼠抗人UHRF1單克隆抗體(美國BD公司)；辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗、免疫組織化學(xué)SP試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺(3,3′-diaminobenzidine，DAB)試劑盒均購自上海長島生物技術(shù)公司。

1.3 免疫組織化學(xué)方法檢測UHRF1蛋白的表達(dá) 參照免疫組織化學(xué)SP試劑盒說明書進(jìn)行。細(xì)胞核內(nèi)見棕褐色顆粒定義為UHRF1表達(dá)陽性，細(xì)胞核無棕褐色顆粒為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件處理，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 UHRF1蛋白在HCC組織中的表達(dá) 經(jīng)HE染色確定HCC診斷(圖1A～D)。免疫組織化學(xué)SP法結(jié)果顯示，HCC患者UHRF1蛋白陽性表達(dá)主要定位于癌細(xì)胞的細(xì)胞核，呈棕黃色或棕褐色，染色均一，不同患者個體間UHRF1蛋白陽性表達(dá)情況差異較大(圖1 E、G)；HCC患者癌組織中UHRF1蛋白表達(dá)陽性率為59%，癌旁組織中UHRF1呈陰性表達(dá)(圖1 F、H)。

圖1A～D為病例1(A為癌、B為癌旁)、病例2(C為癌、D為癌旁)的HE染色，×200；E、F為病例1，UHRF1蛋白在HCC組織陽性表達(dá)(E)，在癌旁組織陰性表達(dá)(F)，DAB染色，×200；G～H為病例2，UHRF1蛋白在HCC組織(G)及癌旁組織(H)陰性表達(dá)，DAB染色，×200

2.2 UHRF1蛋白表達(dá)與HCC臨床病理特征的關(guān)系 UHRF1蛋白表達(dá)與HCC患者腫瘤大小(P<0.01)、分化程度(P<0.05)、微血管侵犯(P<0.01)相關(guān)，而與年齡、性別、血清甲胎蛋白水平、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平、有無肝硬化、腫瘤數(shù)目、腫瘤是否有包膜無關(guān)(P>0.05)，見表1。

表1 UHRF1蛋白表達(dá)與HCC臨床病理特征的關(guān)系

續(xù)表

3 討 論

UHRF1是目前在哺乳動物細(xì)胞中已知的唯一能特異性結(jié)合甲基化H3和甲基化CpG的蛋白，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程，與細(xì)胞增殖密切相關(guān)[1-2,9-10]。UHRF1編碼蛋白與特定的DNA序列結(jié)合后，進(jìn)一步招募組蛋白泛素化酶，影響染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)，從而發(fā)揮調(diào)控基因表達(dá)的作用[9]。UHRF1的SRA域在DNA復(fù)制過程中識別半甲基化的DNA子鏈，并使DNMT1聚合在DNA鏈上，將半甲基化DNA雙鏈轉(zhuǎn)變成完全甲基化DNA，從而使得DNA甲基化狀態(tài)在復(fù)制和傳代過程中得以維持[1-2]。

多項研究[3-7]表明，UHRF1在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào)，UHRF1過表達(dá)通過影響細(xì)胞的細(xì)胞周期、凋亡、抑癌基因失活等多種方式影響腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展。本研究發(fā)現(xiàn)，UHRF1蛋白在HCC癌組織中的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織，這提示UHRF1可能與HCC的發(fā)生相關(guān)；且UHRF1蛋白過表達(dá)與HCC的惡性表型如腫瘤大小、分化程度和微血管侵犯有關(guān)，說明UHRF1過表達(dá)可能參與HCC的進(jìn)展，但確切的分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本研究提示UHRF1過表達(dá)在HCC發(fā)生發(fā)展中起重要作用，進(jìn)一步闡述其在HCC發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，有望為HCC的防治提供新的思路。

[1]Ma H,Chen H,Guo X,et al.M phase phosphorylation of the epigenetic regulator UHRF1 regulates its physical association with the deubiquitylase USP7 and stability[J].Proc Natl Acad Sci USA,2012,109(13):4828-4833.

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