馬連學(xué) 李艷菊 魏巍

化學(xué)發(fā)光微粒免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝表面抗原的結(jié)果對比分析

馬連學(xué) 李艷菊 魏巍

探討化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法(CMIA)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法測定乙肝表面抗原的靈敏度及特異性, 并對其相關(guān)檢測結(jié)果進(jìn)行分析 。用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法(CMIA)對本院2112年3月~2012年12月住院患者2686人, 進(jìn)行乙肝表面抗原檢測, 陽性113例。對113例陽性結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)并進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法試驗(yàn), 比對各試驗(yàn)結(jié)果間的差異?；瘜W(xué)發(fā)光微粒子免疫法(CMIA)檢測乙肝表面抗原和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)相比, 靈敏度和特異性較高, 有很好的臨床價值,能有效地避免漏檢、錯檢, 但兩種方法都有一定比例的假陽性, 建議對弱陽性標(biāo)本采用確認(rèn)試驗(yàn)以提高檢測的正確性。

乙肝表面抗原；ELISA；化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法；抗體確認(rèn)試驗(yàn)

我國是肝炎大國, 據(jù)2006年的調(diào)查,我國乙肝表面抗原總攜帶率為7.18%［1］, 乙肝的實(shí)驗(yàn)室診斷對于乙肝的診斷治療有著很重要的臨床意義。隨著檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展, 檢驗(yàn)方法更加科學(xué)準(zhǔn)確, 目前酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法(CMIA)是檢驗(yàn)科應(yīng)用最廣的檢測乙肝表面抗原的方法, 本文就兩種方法對乙肝表面抗原檢測進(jìn)行比較, 報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2112年3月~2012 年12月住院檢測乙肝表面抗原患者2686人, 其中男1324, 女1362。

1.2 試劑與方法 ①酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：試劑由廈門新創(chuàng)科技有限公司提供。嚴(yán)格按說明書要求操作。HBsAg檢測以S/CO>1.0為陽性。②化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法(CMIA)：檢測試劑和抗體中和確認(rèn)試劑以及校準(zhǔn)品均由美國Abbott公司提供?；瘜W(xué)反光反應(yīng)的判讀標(biāo)準(zhǔn)為>0.05 IU/ml為陽性。確認(rèn)試驗(yàn)以抑制率>50%為陽性。儀器為美國Abbott公司生產(chǎn)的i2000化學(xué)發(fā)光分析儀。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析, 計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn), P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 所用標(biāo)準(zhǔn)物由Abbott公司提供, 兩種方法靈敏度見表1。

表1 CMIA和ELISA法測定 HBsAg靈敏度比較

2.2 CMIA法所測得113例陽性標(biāo)本, 經(jīng)確認(rèn)試驗(yàn)陽性數(shù)為103例, 確認(rèn)陽性率91.2%。ELISA法陽性率為83.2%。兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)果見表2。

表2 ELISA結(jié)果與抗體中和確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果的比較(n)

3 討論

乙肝表面抗原檢測是判斷乙型肝炎病毒感染的重要依據(jù), 我國是乙肝病毒高發(fā)區(qū), 準(zhǔn)確、及時診斷對于乙肝的治療和預(yù)后尤為重要。

對于HBV檢查, 實(shí)驗(yàn)室有多種方法, 最常見的是金標(biāo)法、ELISA法、化學(xué)發(fā)光法。

膠體金法對于急診是一種較好的方法, 其優(yōu)點(diǎn)是速度快, 但是和其他方法相比, 對于弱陽性結(jié)果易造成 漏檢和誤讀。ELISA法是目前最廣泛應(yīng)用的乙肝表面抗原的檢測方法, ELISA法由于操作的影響因素較多, 臨界值附近的樣本易出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果, 易引起誤診或漏診［2］。化學(xué)發(fā)光技術(shù)是近二十年來發(fā)展起來的免疫分析技術(shù), 化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法(CMIA)以其全自動儀器、封閉式操作和配套試劑, 使人為因素減到最低, 該方法以其很好的特異性、較高的靈敏度和重復(fù)性被譽(yù)為當(dāng)今免疫檢測的金標(biāo)準(zhǔn)［3］。

本研究中, 以HBsAg確認(rèn)試驗(yàn)為判斷標(biāo)準(zhǔn), 113例微粒子化學(xué)發(fā)光結(jié)果中, 103例HbsAg確認(rèn)為陽性, 陽性率91.2%,其中ELISA法敏感性為88.3%(91/103), 特異性為70.0%(7/10), ELISA法有較大比例的誤診和漏診。有人建議對于對于初篩弱陽性的檢驗(yàn)標(biāo)本, 需要做確認(rèn)試驗(yàn)這樣才能盡可能避免結(jié)果的誤報、漏報, 為臨床診斷提供更好的服務(wù)［4］。

化學(xué)反光反應(yīng)的判讀標(biāo)準(zhǔn)為>0.05 IU/ml為陽性, 從表1看化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法(CMIA)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法測定 HBsAg靈敏度比較, 其靈敏性度遠(yuǎn)高于ELISA方法。本試驗(yàn)CMIA陽性的113例標(biāo)本中 , 經(jīng)抗體中和確認(rèn)試驗(yàn)后103例陽性,假陽性結(jié)果10例, 假陽性率為8.85%(10/113), 這10例標(biāo)本表面抗原值在0.05~0.12 IU/ml之間, 提示我們對于弱陽性結(jié)果需要做確認(rèn)試驗(yàn)以保證試驗(yàn)正確性。李金明［5］也提出由于灰區(qū)的存在, 有必要對采用免疫測定, 如 ELISA, 免疫化學(xué)發(fā)光、免疫膠體金試劑條等初篩方法檢測反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn), 但由于確認(rèn)試驗(yàn)試劑目前絕大部分還是依賴進(jìn)口, 價格昂貴, 因此可考慮只對弱陽性反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行確認(rèn)。

［1］ 衛(wèi)生部.全國人群乙肝血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果.我國乙肝免疫預(yù)防工作取得顯著成績, 2008, 4: 21.

［2］ 王克波,楊波,楊志俊.ELISA試驗(yàn)的質(zhì)量控制.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2005,15(1):112.

［3］ 劉冀瓏,喬惠理,鄧澤沛.化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù).化學(xué)通報, 2000, 7:49-53.

［4］ 劉文琴,張雄,董明國,等.確認(rèn)試驗(yàn)在乙型肝炎表面抗原弱陽性標(biāo)本中的臨床應(yīng)用.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2011,21(10): 2152-2153.

［5］ 李金明.感染性疾病血清學(xué)檢驗(yàn)中應(yīng)重視對弱方應(yīng)性標(biāo)本的確認(rèn).中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2006, 29(7):577-580.

撫順礦業(yè)集團(tuán)總醫(yī)院檢驗(yàn)科(馬連學(xué))；大連開發(fā)區(qū)醫(yī)院(李艷菊)；大連醫(yī)科大學(xué)(魏巍)

魏巍