蔣 蘋 許 紅 王中彌 于 璐 孫 潔 曹良杰 周亞麗 栗 瓊

PTEN、Survivin蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)的卵巢癌組織中表達(dá)的相關(guān)性及臨床意義

蔣 蘋 許 紅 王中彌 于 璐 孫 潔 曹良杰 周亞麗 栗 瓊

目的 探討卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫、子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)的卵巢癌(卵巢子宮內(nèi)膜樣癌和卵巢透明細(xì)胞癌)中抑癌基因PTEN蛋白和凋亡抑制基因Survivin蛋白表達(dá)及意義。方法 利用免疫組織化學(xué)二步抗法檢測卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫20例、子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)的卵巢癌17例, 正常子宮內(nèi)膜20例中PTEN蛋白、Survivin蛋白的表達(dá)。結(jié)果 PTEN蛋白在正常子宮內(nèi)膜的陽性表達(dá)低于子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)的卵巢癌、卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Survivin蛋白的趨勢與PTEN相反, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。PTEN、Survivin蛋白表達(dá)與分期、分化程度, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。PTEN、Survivin蛋白表達(dá)無明顯相關(guān)性(r=0.143, P＞0.05)。結(jié)論 卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫發(fā)生惡變的過程中可能與PTEN、Survivin蛋白表達(dá)異常有關(guān), 可能PTEN蛋白表達(dá)異常更有意義。

PTEN; Survivin；子宮內(nèi)膜異位癥; 卵巢腫瘤; 基因表達(dá)

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis, EMs) 最常異位于卵巢,是育齡期婦女的常見良性病, 但具有類似惡性腫瘤的行為,并可發(fā)生惡變。卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變的主要細(xì)胞學(xué)類型為子宮內(nèi)膜樣癌和透明細(xì)胞癌, 稱為子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)的卵巢癌(endometriosis associated ovarian cancers, EAOCs)。

目前認(rèn)為細(xì)胞的異常凋亡和腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切。第10號染色體同源丟失性磷酸酶張力蛋白基因(phosphatase and tension homology deleted on chromosome ten, PTEN)是1997年由Li等［1］研究命名, PTEN基因具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡功能。目前研究認(rèn)為人類多種惡性腫瘤中存在PTEN基因缺失或突變［1,2］。凋亡調(diào)節(jié)基因被認(rèn)為是繼原癌基因、抑癌基因之后的第三類癌基因。Survivin是1997年由美國的Ambrosini等［3］發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞凋亡抑制基因, 是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein, IAP)基因家族的成員。Survivin具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的雙重作用［4］。Survivin的異常表達(dá)及其導(dǎo)致的凋亡抑制對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后及抗腫瘤治療都有著極其重要的影響?？傊? PTEN與Survivin均參與細(xì)胞周期調(diào)控和細(xì)胞凋亡, 兩者作用環(huán)節(jié)一致, 但生物學(xué)效應(yīng)相反。作者采用免疫組化二步抗法檢測PTEN與Survivin在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫、EAOCs及正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá),探討之間的關(guān)系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2003~2013年昆明市第一人民醫(yī)院及昆明市延安醫(yī)院病理科臨床資料完整的存檔蠟塊。17例卵巢子宮內(nèi)膜相關(guān)惡性腫瘤(11例卵巢子宮內(nèi)膜樣癌, 6例卵巢透明細(xì)胞癌), 20例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫, 20例正常子宮內(nèi)膜。卵巢癌Ⅰ~Ⅱ期6例, Ⅲ~Ⅳ期11例, 高、中分化8例、低分化9例, 卵巢癌患者中位年齡53歲, 所有患者術(shù)前均未接受放化療。

1.2 試劑與方法 即用型兔抗人PTEN單克隆抗體、即用型兔抗人Survivin多克隆抗體、二步法抗兔/鼠通用型免疫組化檢測試劑盒, 購自基因科技(上海)有限公司。常規(guī)制片,采用DAKO Envision二步法并經(jīng)pH抗兔/鼠9.0之EDTA修復(fù)液高壓修復(fù)。具體染色步驟按試劑盒說明書進(jìn)行, 用試劑公司提供的陽性切片作為對照, 以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 PTEN蛋白抗體陽性均為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色信號顆粒；Survivin蛋白抗體陽性均為細(xì)胞核/漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件, 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn), 頻數(shù)<5的用Fisher精確概率法, 等級相關(guān)檢驗(yàn)采用Spearman相關(guān)檢驗(yàn), P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTEN、Survivin蛋白在不同組織中的表達(dá) PTEN蛋白、Survivin蛋白陽性表達(dá)分別定位于細(xì)胞核和細(xì)胞漿內(nèi),見圖1、2。

圖1 PTEN蛋白在各組織的表達(dá)(免疫組織化染色 ×200)

圖2 Survivin蛋白在各組織的表達(dá)(免疫組織化染色 ×200)

PTEN蛋白在正常子宮內(nèi)膜、卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫和EAOCs的陽性表達(dá)率呈下降趨勢, 而Survivin蛋白的陽性表達(dá)率呈上升趨勢。見表1。

PTEN蛋白表達(dá)中, EAOCs與前兩組比較P＜0.05；Survivin蛋白表達(dá)中, 與正常子宮內(nèi)膜組比較P＜0.05, 與卵巢巧克力囊腫組比較P＞0.05。

2.2 子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)的卵巢癌中PTEN、Survivin蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 PTEN蛋白陽性表達(dá)在Ⅰ-Ⅱ期組織中高于Ⅲ~Ⅳ期, 在高、中分化癌組織中高于低分化組織, 但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；Survivin蛋白與之相反；PTEN、Survivin蛋白與年齡無關(guān)。見表2。

表1 PTEN、Survivin蛋白在不同組織中的陽性表達(dá)(n, %)

表2 PTEN、Survivin蛋白在EAOCs的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系［n(%)］

2.3 PTEN、Survivin蛋白在EAOCs中表達(dá)的關(guān)系 在17例EAOCs中PTEN蛋白陽性表達(dá)的4例中, Survivin蛋白表達(dá)陽性2例、陰性2例；PTEN蛋白陰性表達(dá)的13例中, Survivin蛋白表達(dá)陽性12例, 陰性1例；經(jīng)Spearman相關(guān)分析表明, 二者表達(dá)無明顯相關(guān)(r=0.143, P>0.05)。

3 討論

3.1 PTEN蛋白在EAOCs中的表達(dá)及臨床意義 自1925年Sampson首次報(bào)道Ems惡變以來, Omer等［5］報(bào)道的惡變率為0.7%~1.0%。Ems惡變病例中, 以卵巢子宮內(nèi)膜樣癌和透明細(xì)胞癌為主。本研究結(jié)果PTEN在正常子宮內(nèi)膜、卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫、EAOCs中的陽性表達(dá)逐漸減低, 各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 提示PTEN在卵巢子宮內(nèi)膜囊腫及卵巢子宮內(nèi)膜囊腫惡變相關(guān)腫瘤中失活, 可能在卵巢子宮內(nèi)膜囊腫發(fā)展中起重要作用, 可能是卵巢子宮內(nèi)膜囊腫向卵巢子宮內(nèi)膜囊腫惡變相關(guān)腫瘤發(fā)生過程中的重要原因, 這與Sato等［6］、李淑娟等［7］的研究一致。本研究提示, PTEN蛋白的表達(dá)與組織分化程度、臨床分期有關(guān), 組織分化程度越低,分期越晚, PTEN蛋白的表達(dá)下降, 盡管差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但表達(dá)率明顯下降, 提示PTEN蛋白的表達(dá)與組織分化程度、臨床分期有關(guān)。

3.2 Survivin蛋白在EAOCs中的表達(dá)及臨床意義 大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為凋亡抑制蛋白基因Survivin與Caspsse特異性結(jié)合主要抑制效應(yīng)蛋白Caspase-3, Caspase-7的活性, 阻斷細(xì)胞的凋亡過程［3］。Survivin的過度表達(dá)可致細(xì)胞的異常增殖。本研究提示Survivin蛋白在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫表達(dá)高于正常子宮內(nèi)膜, 和Fujino等［8］研究一致, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示Survivin可能和逃避凋亡, 并發(fā)展為子宮內(nèi)膜異位癥緊密相關(guān)。

Yoshida等［9］的研究發(fā)現(xiàn), Survivin表達(dá)在Ⅰ期透明細(xì)胞癌中表達(dá)明顯高于Ⅰ期漿液性囊腺癌。故卵巢子宮內(nèi)膜囊腫惡變可能關(guān)系到該基因的改變。本研究提示Survivin蛋白在正常子宮內(nèi)膜、卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫和EAOCs的陽性表達(dá)率呈上升趨勢, 盡管卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫和卵巢子宮內(nèi)膜樣癌和卵巢透明細(xì)胞癌的陽性表達(dá)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 但后兩者均高于前者, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 提示Survivin與卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫和EAOCs有關(guān)。

3.3 PTEN和Survivin蛋白在EAOCs中的表達(dá)及臨床意義PTEN和Survivin均參與了細(xì)胞周期調(diào)控和細(xì)胞凋亡, 作用環(huán)節(jié)一致, 但生物學(xué)效應(yīng)相反。其可能的機(jī)制為PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對Survivin基因表達(dá)有調(diào)控作用, 而PTEN在正常生理情況下抑制了PI3K/Akt通路, 從而抑制Survivin的表達(dá)［10］。本研究提示PTEN蛋白在正常子宮內(nèi)膜、卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫和EAOCs的陽性表達(dá)率呈下降趨勢, Survivin蛋白表達(dá)呈上升趨勢, 但兩者無相關(guān)性。朱曉會［11］用免疫組化法研究認(rèn)為PTEN、Survivin的表達(dá)異常與上皮性卵巢癌的發(fā)生具有密切的關(guān)系。而Erkanli等［12］研究Survivin、PTEN和p27在正常子宮內(nèi)膜、增生子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌的表達(dá), 認(rèn)為Survivin、PTEN在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中不存在聯(lián)系。故結(jié)合本研究結(jié)果, Survivin、PTEN在EAOCs是否存在關(guān)聯(lián)有待于進(jìn)一步的研究。

綜上所述, PTEN、Survivin在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫及EAOCs表達(dá)均有差異, PTEN表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),兩者無明顯相關(guān)性, 說明卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫向卵巢子宮內(nèi)膜相關(guān)惡性腫瘤發(fā)生過程中, PTEN蛋白表達(dá)異?？赡芨幸饬x。

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Expression of PTEN and Survivin protein in ovarian cancers associated to endometriosis and its clinical significance JIANG Ping, XU Hong, WANG Zhong-mi, et al. Department of Gynecology, Kunming First People's

Hospital, Kunming 650011, China

Objective To investigate the expression of PTEN protein and Survivin protein in endometriosis associated ovarian cancers(EAOCs) and their significance and correlation.Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of PTEN and Survivin in 17 cases of EAOCs, 20 cases of endometrial cyst of the ovary and 20 cases of normal endometrium.Results The positive rates of PTEN immunostaining showed higher expression in normal endometrium than the others.Respectively, there were significant difference between the three groups(P<0.05).The tendency of Survivin expression was opposite to that of PTEN.The positive expression of PTEN and Survivin was not correlated with clinical stage and differentiation degree of cancer cells (P>0.05).The positive expression of PTEN was not correlated with Survivin.Conclusion PTEN and Survivin protein may be associated between endometrial cyst of the ovary and ovarian cancer associatedto endometriosis, and PTEN protein is more significant.

PTEN; Survivin; Endometriosis; Ovarian neoplasms; Gene expression

2014-04-01］

650011 昆明市第一人民醫(yī)院婦科(蔣蘋 許紅王中彌 曹良杰 周亞麗 栗瓊), 病理科(于璐 孫潔)