張聰敏　張治國

摘要：對青島百合（Lilium tsingtauense Gilg）復合種群6個局部種群的遺傳多樣性進行了RAPD分析。通過11個引物擴增到117個顯性位點，其中多態(tài)性位點平均為62.86%，各百合群體多態(tài)性位點多少順序為Y5、Y1、Y4、Y6、Y2、Y3。把RAPD多樣性指標與樣地的基本狀況進行相關分析，發(fā)現(xiàn)海拔高度、樣地坡度和植被類型與各個多樣性指標呈正相關，樣地坡向與各個多樣性指標呈負相關。Neis基因多樣度指數(shù)（h）和Shannon信息指數(shù)（I）的統(tǒng)計結果表明，種群內h和I的平均值分別為0.203 4和0.309 0，這兩個指數(shù)均為Y5最高，其次為Y1，Y3最低。不同位點在種群間的分化程度差別很大，基因分化度的波動范圍為0.016 5～0.942 7，平均為0.378 3。種群間平均基因流為0.821 6，說明有遺傳漂變的存在。6個百合種群間遺傳一致度與遺傳距離的無偏估計表明，最小的遺傳距離在Y4和Y6之間，最大的遺傳距離在Y3和Y5之間，遺傳一致度則相反。種群聚類分析表明，Y1和Y2比較近；Y4和Y6比較近又和Y5聯(lián)系在一起。Y3比較特殊，單獨為一類。

關鍵詞：青島百合（Lilium tsingtauense Gilg）；復合種群；遺傳多樣性；RAPD；遺傳漂變；遺傳距離

中圖分類號：S682.2； 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）13-3074-04

RAPD Analysis of Genetic Diversity of the Lilium tsingtauense Metapopulation

ZHANG Cong-min1，ZHANG Zhi-guo2

（1. School of Biological Science and Biotechnology， Minnan Normal University， Zhangzhou 363000， Fujian， China；

2. School of Life Sciences， Shandong University， Jinan 250100， China）

Abstract： Genetic diversity of six Lilium tsingtauense metapopulations were studied with the method of RAPD. The genetic differentiation among populations was analyzed by STATISTICA. 117 loci were amplified by RAPD. The means of genetic diversity within population was 62.86%. The order was population 5> population 1> population 4> population 6> population 2> population 3. Altitude， plot slope， vegetation types and various diversity index was positively correlated. But plots slope and various diversity index was negatively correlated. The result of Neis gene diversity index （h） and Shannon（I） Information showed that the mean was 0.203 4 and 0.309 0. These two indices were both the highest in population 5， but the lowest in population 3. Genetic divergence of all RAPD loci among populations was different from 0.016 5 to 0.942 7， with the mean of 0.378 3. The change of gene flow was inverse to the change of genetic divergence. The means of gene flow was 0.821 6， less than 1， indicating that there was genetic drift among populations. From Neis unbiased measures of genetic identity and genetic distance by RAPD， it was conducted that the lowest genetic distance was between population 4 and population 6， with the highest genetic identity between them.

Key words： Lilium tsingtauense； metapupulations； genetic diversity； RAPD； genetic drift； genetic distance

青島百合（Lilium tsingtauense Gilg）是我國百合科的特有種，已列入第二批國家保護植物名錄[1]。由于棲息地干擾的加劇，青島百合的分布范圍日趨縮小，目前，青島百合的集中分布地位于嶗山北九水以南海拔400～1 000 m的森林群落內，這一區(qū)域可見到成片分布的種群，均呈斑塊狀分布，斑塊之間的距離依地形、地貌及人類活動的強度不同而遠近不一，以復合種群存在[2]。

目前對百合的研究在國內已有不少報道，主要集中在其地理分布、化學成分、組織培養(yǎng)、細胞學觀察及雜交育種等方面，但鮮見關于青島百合的研究。一個物種的穩(wěn)定存在與其群體的遺傳多樣性水平和遺傳結構密切相關[3]，因此對青島百合遺傳結構的研究將有助于探討其瀕危原因及過程，采取科學有效的措施進行保護，并且能為其分類、進化研究提供資料，進而為育種和遺傳改良提供遺傳學依據(jù)。RAPD技術是一種簡便、快速、易行的分子標記技術，試驗用RAPD技術分析了青島嶗山6個樣地（Y1～Y6）的青島百合復合種群的遺傳多樣性、群體內和群體間的遺傳變異，旨在為青島百合遺傳結構的研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗從6個樣地（Y1～Y6）各隨機取20株青島百合的幼嫩頂芽，迅速置于冰盒中帶回實驗室于4 ℃保存，7 d內進行總DNA的提取。

1.2 方法

1.2.1 基因組DNA的提取 6個樣地共120份樣品，采用十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）法[4]稍作修改后提取基因組DNA，通過瓊脂糖凝膠電泳，LALBWORKS3.0成像，Labimage2.6分析確定各梯度的DNA濃度和純度，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 引物的篩選 從Operon公司30個引物中篩選出7個產物穩(wěn)定、多態(tài)性高、模板濃度適應性強的引物；從Sangon公司的20個RAPD引物中篩選出4個，在Sangon公司合成，并與篩選用引物對照，擴增結果一致。共用引物11個，序列見表1。

1.2.3 RAPD擴增 參考Koppitz[4]和Hofstra等[5]的方法，通過對反應體系中各成分的優(yōu)化，建立了最佳反應體系，總體積25 μL。包括60 ng基因組DNA，10 pmol隨機引物，2.5 mmol/L dNTP、1U Taq DNA聚合酶，25 mmol/L MgCl2等。反應程序為：94 ℃變性1 min，35 ℃復性1 min，72 ℃延伸2 min，40個循環(huán)；最后72 ℃延伸7 min。擴增反應在德國BIOMETRA-GRANDIENT PCR儀上進行。

1.3 RAPD數(shù)據(jù)的統(tǒng)計

1.3.1 多態(tài)性位點比例（P） P=多態(tài)性位點數(shù)/位點總數(shù)，對某一位點，隱性頻率（q）和顯性頻率（P）均超過0.05即記為多態(tài)性位點。

1.3.2 Neis基因多樣度指數(shù)（h） 對某一位點，h=1-（p2+q2）；對某一種群，種內基因多樣性 Hs（Neis）=∑h/n，其中n為位點總數(shù)；種群總基因多樣度HT=∑[1-（pi2+qi2）]/n，其中n為位點總數(shù)，pi和qi分別為總的種群中i位點上的顯性頻率和隱性頻率。

1.3.3 Shannon信息指數(shù)（I） 對某一位點，I=-∑（log2Xi）xi，其中Xi為該位點上第i個等位基因的頻率。

1.3.4 種群間基因分化度 GST=（HT-HS）/HT

1.3.5 基因流 Nm=0.5（1-GST）/GST

2 結果與分析

用Popgen32軟件包對獲得的RAPD“0，1”矩陣進行處理，獲得種群遺傳多樣性和種群遺傳結構的基本信息，再用Statistica對種群間的遺傳分化規(guī)律進行進一步的統(tǒng)計分析。11個隨機引物擴增到117個顯性位點，平均每個引物檢測到10.64個位點。

2.1 種群內遺傳多樣性RAPD分析

由表2可知，種群內RAPD多態(tài)性比例（P）平均為62.86%，這在植物種群中是比較高的。在所有樣地中，Y5的P最高，為69.23%，其次是Y1，為65.18%。Y3的最低，為57.26%，按檢測到的多態(tài)位點比例排序，各百合群體順序為Y5>Y1>Y4>Y6>Y2>Y3。

種群內平均每個位點的等位基因數(shù)（Na）和有效等位基因數(shù)（Ne）的平均值分別為1.629 6和1.339 5。這兩個多樣性指數(shù)仍然是在Y5和Y1兩個種群中較高，Y5的Na值最高，Y1的Ne值最高，說明在Y1中等位基因的頻率分布相對均勻一些，而Y5中含有較多頻率較低的等位基因。Na和Ne的最低值均出現(xiàn)在Y3種群中，分別為1.572 6和1.283 3。

Neis基因多樣度指數(shù)（h）和Shannon信息指數(shù)（I）是測度種群遺傳多樣性的重要指標。種群內h和I的平均值分別為0.203 4和0.309 0。前者只有后者的65.82%，這兩個指數(shù)均在Y5中最高，其次是在Y1中較高，在Y3中最低。另外，包含所有種群的總的遺傳多樣性明顯高于任何一個種群內的遺傳多樣性，說明有相當?shù)倪z傳變異存在于種群之間。

由表3和圖1可知，海拔高度、樣地坡度和植被類型與各個多樣性指標呈正相關，即隨著海拔的升高、樣地坡度的增加和植被類型復雜程度的增加，各個多樣性指標值增加；另外，樣地坡向與各個多樣性指標呈負相關，即陰坡比陽坡的各個多樣性指標高，這符合青島百合適宜陰濕環(huán)境的情況。Na值降低，而Ne、I、h值升高，相反地，隨著樣地植株數(shù)目的增加，多樣性指標的P、Na值升高，而Ne、I、h值降低。

2.2 種群間的遺傳結構與遺傳分化

2.2.1 種群間的遺傳分化 不同位點在種群間的分化程度差別很大，最極端的情況是沒有分化（GST=0）和完全分化（GST），除掉這兩種極端情況，RAPD位點上基因分化度的波動范圍為0.016 5～0.942 7，最小值的位點為OPD05-1，最大值的位點為OPQ09-4。基因流的變化趨勢與基因分化度相反，基因分化度越高，基因流越小，基因流的波動范圍為0.028 0～29.808 9。

不同位點上基因分化度的差別如此之大，可能與空間隔離的種群在不同生境中產生新的體細胞突變有關。

所有位點基因分化度的平均值為0.378 3，說明對研究的6個百合種群來說，有37.83%的基因多樣度存在于種群間，62.17%的基因多樣度存在于種群內。種群間平均基因流為0.821 6，略小于1，說明有遺傳漂變的存在。

2.2.2 種群間遺傳結構與遺傳距離 表4是RAPD分析對6個百合種群間遺傳一致度與遺傳距離的無偏估計，最小的遺傳距離在Y4和Y6之間，為0.132 6，最大的遺傳距離在Y3和Y5之間，為0.247 0。相反，Y4和Y6之間的遺傳一致度最大，為0.875 8，Y3和Y5之間的遺傳一致度最小，為0.781 1。

2.2.3 聚類分析 6個種群的RAPD分析見圖2。從圖2可以看出，Y1和Y2比較近；Y4和Y6比較近又和Y5聯(lián)系在一起。Y3比較特殊，單獨為一類。

3 小結與討論

3.1 種群的遺傳結構及其影響因素

進化的基本單位不是個體而是種群，進化就是種群基因庫的改變[6]。種群遺傳結構就是遺傳變異或者說基因和基因型在時間和空間上的分布式樣。對植物群體遺傳結構及其影響因子的研究是群體遺傳學中的重要課題，是探討植物的適應性、物種形成過程和式樣及其進化機制的基礎，也是保護生物學的核心。

種群遺傳結構是一個物種最基本的特征之一，它受突變、基因流、選擇和遺傳漂變的共同作用，同時還和物種的進化歷史和生物學特征有關，本試驗結果表明不同位點在種群間的分化程度差別很大，可能與空間隔離的種群在不同生境中產生新的體細胞突變有關。青島百合種群間的平均基因流為0.821 6，略小于1，說明有遺傳漂變的存在。另外，基因流的變化趨勢與基因分化度相反，如果說自然選擇是導致種群分化最主要的進化力量，那么基因流則是對抗選擇作用的重要因素[6]。在植物中，基因流是借助于花粉、種子、孢子、營養(yǎng)體等遺傳物質攜帶者的遷移或運動來實現(xiàn)的，青島百合可能是通過水流帶動種子的流動，這些共同影響著青島百合的遺傳結構。

3.2 青島百合遺傳結構研究中分子標記的選擇

青島百合作為我國百合科的特有種，已列入第二批國家保護瀕危植物名錄[1]。因此，研究青島百合的遺傳結構對保護青島百合具有重要意義，在此正確選擇分子標記非常重要。目前用于研究植物遺傳標記有等位酶、RAPD、ISSR、AFLP、STS等，對同一問題，不同標記獲得的結果可能不同，為了客觀反映種群的自然狀況，應仔細研究所要解決的問題和可供選擇的分子標記的特點，以保障所選的分子標記對于解決所研究的問題為最佳選擇。

對個體差異靈敏度高的分子標記如RAPD、ISSR、DAF（DNA指紋）等用于中、小尺度上遺傳變異的研究可能獲得較好的結果，這些變異用于檢測種群遺傳變異的時間動態(tài)特征也比較適宜。由于青島百合成斑塊狀分布，分布范圍較狹小，再加上現(xiàn)有的實驗設備，選用RAPD技術可獲得穩(wěn)定而可靠的結果。

3.3 對青島百合復合種群的保護建議

1）應在青島百合分布區(qū)嶗山北九水自然風景區(qū)實行真正意義的限額采伐，某些地域應禁止采伐和開發(fā)，實際上自從劃出禁游區(qū)以來整個青島百合種群有繁茂的趨勢。

2）將青島百合分布較密集、生長較好地區(qū)劃為以青島百合為重點的省級自然保護區(qū)，對青島百合實行就地保護。禁止在保護區(qū)內采伐、放牧，教育當?shù)剞r牧民樹立保護自然就是保護人類的思想，減少人為活動對它的破壞。

3）在對青島百合就地保護的同時，積極向適合其生長的環(huán)境中引種，實行遷地保護，增加人工種群數(shù)量。根據(jù)在青島、海陽、即墨植物園的栽培情況，可以推斷在青島地區(qū)均可引種青島百合。

4）在現(xiàn)有研究基礎之上，對青島百合復合種群應繼續(xù)進行跟蹤研究。青島百合種群具有年齡易確定、分布區(qū)集中、分布區(qū)域明確等特點，是研究植物復合種群很好的材料。繼續(xù)對青島百合復合種群空間格局及繁殖、遷移等動態(tài)過程進行跟蹤研究，不僅使得青島百合復合種群的研究更加完善，加強對這一國內特有種的保護，而且對其他植物的復合種群研究也將有重要的指導意義。

參考文獻：

[1] 王仁卿，張昭潔.山東稀有瀕危保護植物[M].濟南：山東大學出版社，1993.

[2] 張聰敏，王仁卿，張治國.青島百合生境特點和分布現(xiàn)狀研究[J]. 湖北農業(yè)科學，2010，49（6）：1404-1410.

[3] 夏 銘，周曉蜂，趙士洞.天然紅松林群體遺傳多樣性的RAPD分析[J].生態(tài)學報，2001，21（5）：730-737.

[4] KOPPITZ H.Analysis of genetic diversity among selected populations of Phragmites australis world-wide[J].Aquatic Botany， 1999，64（3-4）：209-221.

[5] HOFSTRA D E，CLAYTON J.RAPD profiling and isozyme analysis of New Zealand Hydrilla verticillata[J]. Aquatic Botany，2000，66：153-166.

[6] GRANT V.The Evolutionary Process：A Critical Study of Evolutionary Theory[M].New York：Columbia University Press，1991.

2.2.2 種群間遺傳結構與遺傳距離 表4是RAPD分析對6個百合種群間遺傳一致度與遺傳距離的無偏估計，最小的遺傳距離在Y4和Y6之間，為0.132 6，最大的遺傳距離在Y3和Y5之間，為0.247 0。相反，Y4和Y6之間的遺傳一致度最大，為0.875 8，Y3和Y5之間的遺傳一致度最小，為0.781 1。

2.2.3 聚類分析 6個種群的RAPD分析見圖2。從圖2可以看出，Y1和Y2比較近；Y4和Y6比較近又和Y5聯(lián)系在一起。Y3比較特殊，單獨為一類。

3 小結與討論

3.1 種群的遺傳結構及其影響因素

進化的基本單位不是個體而是種群，進化就是種群基因庫的改變[6]。種群遺傳結構就是遺傳變異或者說基因和基因型在時間和空間上的分布式樣。對植物群體遺傳結構及其影響因子的研究是群體遺傳學中的重要課題，是探討植物的適應性、物種形成過程和式樣及其進化機制的基礎，也是保護生物學的核心。

種群遺傳結構是一個物種最基本的特征之一，它受突變、基因流、選擇和遺傳漂變的共同作用，同時還和物種的進化歷史和生物學特征有關，本試驗結果表明不同位點在種群間的分化程度差別很大，可能與空間隔離的種群在不同生境中產生新的體細胞突變有關。青島百合種群間的平均基因流為0.821 6，略小于1，說明有遺傳漂變的存在。另外，基因流的變化趨勢與基因分化度相反，如果說自然選擇是導致種群分化最主要的進化力量，那么基因流則是對抗選擇作用的重要因素[6]。在植物中，基因流是借助于花粉、種子、孢子、營養(yǎng)體等遺傳物質攜帶者的遷移或運動來實現(xiàn)的，青島百合可能是通過水流帶動種子的流動，這些共同影響著青島百合的遺傳結構。

3.2 青島百合遺傳結構研究中分子標記的選擇

青島百合作為我國百合科的特有種，已列入第二批國家保護瀕危植物名錄[1]。因此，研究青島百合的遺傳結構對保護青島百合具有重要意義，在此正確選擇分子標記非常重要。目前用于研究植物遺傳標記有等位酶、RAPD、ISSR、AFLP、STS等，對同一問題，不同標記獲得的結果可能不同，為了客觀反映種群的自然狀況，應仔細研究所要解決的問題和可供選擇的分子標記的特點，以保障所選的分子標記對于解決所研究的問題為最佳選擇。

對個體差異靈敏度高的分子標記如RAPD、ISSR、DAF（DNA指紋）等用于中、小尺度上遺傳變異的研究可能獲得較好的結果，這些變異用于檢測種群遺傳變異的時間動態(tài)特征也比較適宜。由于青島百合成斑塊狀分布，分布范圍較狹小，再加上現(xiàn)有的實驗設備，選用RAPD技術可獲得穩(wěn)定而可靠的結果。

3.3 對青島百合復合種群的保護建議

1）應在青島百合分布區(qū)嶗山北九水自然風景區(qū)實行真正意義的限額采伐，某些地域應禁止采伐和開發(fā)，實際上自從劃出禁游區(qū)以來整個青島百合種群有繁茂的趨勢。

2）將青島百合分布較密集、生長較好地區(qū)劃為以青島百合為重點的省級自然保護區(qū)，對青島百合實行就地保護。禁止在保護區(qū)內采伐、放牧，教育當?shù)剞r牧民樹立保護自然就是保護人類的思想，減少人為活動對它的破壞。

3）在對青島百合就地保護的同時，積極向適合其生長的環(huán)境中引種，實行遷地保護，增加人工種群數(shù)量。根據(jù)在青島、海陽、即墨植物園的栽培情況，可以推斷在青島地區(qū)均可引種青島百合。

4）在現(xiàn)有研究基礎之上，對青島百合復合種群應繼續(xù)進行跟蹤研究。青島百合種群具有年齡易確定、分布區(qū)集中、分布區(qū)域明確等特點，是研究植物復合種群很好的材料。繼續(xù)對青島百合復合種群空間格局及繁殖、遷移等動態(tài)過程進行跟蹤研究，不僅使得青島百合復合種群的研究更加完善，加強對這一國內特有種的保護，而且對其他植物的復合種群研究也將有重要的指導意義。

參考文獻：

[1] 王仁卿，張昭潔.山東稀有瀕危保護植物[M].濟南：山東大學出版社，1993.

[2] 張聰敏，王仁卿，張治國.青島百合生境特點和分布現(xiàn)狀研究[J]. 湖北農業(yè)科學，2010，49（6）：1404-1410.

[3] 夏 銘，周曉蜂，趙士洞.天然紅松林群體遺傳多樣性的RAPD分析[J].生態(tài)學報，2001，21（5）：730-737.

[4] KOPPITZ H.Analysis of genetic diversity among selected populations of Phragmites australis world-wide[J].Aquatic Botany， 1999，64（3-4）：209-221.

[5] HOFSTRA D E，CLAYTON J.RAPD profiling and isozyme analysis of New Zealand Hydrilla verticillata[J]. Aquatic Botany，2000，66：153-166.

[6] GRANT V.The Evolutionary Process：A Critical Study of Evolutionary Theory[M].New York：Columbia University Press，1991.

2.2.2 種群間遺傳結構與遺傳距離 表4是RAPD分析對6個百合種群間遺傳一致度與遺傳距離的無偏估計，最小的遺傳距離在Y4和Y6之間，為0.132 6，最大的遺傳距離在Y3和Y5之間，為0.247 0。相反，Y4和Y6之間的遺傳一致度最大，為0.875 8，Y3和Y5之間的遺傳一致度最小，為0.781 1。

2.2.3 聚類分析 6個種群的RAPD分析見圖2。從圖2可以看出，Y1和Y2比較近；Y4和Y6比較近又和Y5聯(lián)系在一起。Y3比較特殊，單獨為一類。

3 小結與討論

3.1 種群的遺傳結構及其影響因素

進化的基本單位不是個體而是種群，進化就是種群基因庫的改變[6]。種群遺傳結構就是遺傳變異或者說基因和基因型在時間和空間上的分布式樣。對植物群體遺傳結構及其影響因子的研究是群體遺傳學中的重要課題，是探討植物的適應性、物種形成過程和式樣及其進化機制的基礎，也是保護生物學的核心。

種群遺傳結構是一個物種最基本的特征之一，它受突變、基因流、選擇和遺傳漂變的共同作用，同時還和物種的進化歷史和生物學特征有關，本試驗結果表明不同位點在種群間的分化程度差別很大，可能與空間隔離的種群在不同生境中產生新的體細胞突變有關。青島百合種群間的平均基因流為0.821 6，略小于1，說明有遺傳漂變的存在。另外，基因流的變化趨勢與基因分化度相反，如果說自然選擇是導致種群分化最主要的進化力量，那么基因流則是對抗選擇作用的重要因素[6]。在植物中，基因流是借助于花粉、種子、孢子、營養(yǎng)體等遺傳物質攜帶者的遷移或運動來實現(xiàn)的，青島百合可能是通過水流帶動種子的流動，這些共同影響著青島百合的遺傳結構。

3.2 青島百合遺傳結構研究中分子標記的選擇

青島百合作為我國百合科的特有種，已列入第二批國家保護瀕危植物名錄[1]。因此，研究青島百合的遺傳結構對保護青島百合具有重要意義，在此正確選擇分子標記非常重要。目前用于研究植物遺傳標記有等位酶、RAPD、ISSR、AFLP、STS等，對同一問題，不同標記獲得的結果可能不同，為了客觀反映種群的自然狀況，應仔細研究所要解決的問題和可供選擇的分子標記的特點，以保障所選的分子標記對于解決所研究的問題為最佳選擇。

對個體差異靈敏度高的分子標記如RAPD、ISSR、DAF（DNA指紋）等用于中、小尺度上遺傳變異的研究可能獲得較好的結果，這些變異用于檢測種群遺傳變異的時間動態(tài)特征也比較適宜。由于青島百合成斑塊狀分布，分布范圍較狹小，再加上現(xiàn)有的實驗設備，選用RAPD技術可獲得穩(wěn)定而可靠的結果。

3.3 對青島百合復合種群的保護建議

1）應在青島百合分布區(qū)嶗山北九水自然風景區(qū)實行真正意義的限額采伐，某些地域應禁止采伐和開發(fā)，實際上自從劃出禁游區(qū)以來整個青島百合種群有繁茂的趨勢。

2）將青島百合分布較密集、生長較好地區(qū)劃為以青島百合為重點的省級自然保護區(qū)，對青島百合實行就地保護。禁止在保護區(qū)內采伐、放牧，教育當?shù)剞r牧民樹立保護自然就是保護人類的思想，減少人為活動對它的破壞。

3）在對青島百合就地保護的同時，積極向適合其生長的環(huán)境中引種，實行遷地保護，增加人工種群數(shù)量。根據(jù)在青島、海陽、即墨植物園的栽培情況，可以推斷在青島地區(qū)均可引種青島百合。

4）在現(xiàn)有研究基礎之上，對青島百合復合種群應繼續(xù)進行跟蹤研究。青島百合種群具有年齡易確定、分布區(qū)集中、分布區(qū)域明確等特點，是研究植物復合種群很好的材料。繼續(xù)對青島百合復合種群空間格局及繁殖、遷移等動態(tài)過程進行跟蹤研究，不僅使得青島百合復合種群的研究更加完善，加強對這一國內特有種的保護，而且對其他植物的復合種群研究也將有重要的指導意義。

參考文獻：

[1] 王仁卿，張昭潔.山東稀有瀕危保護植物[M].濟南：山東大學出版社，1993.

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[3] 夏 銘，周曉蜂，趙士洞.天然紅松林群體遺傳多樣性的RAPD分析[J].生態(tài)學報，2001，21（5）：730-737.

[4] KOPPITZ H.Analysis of genetic diversity among selected populations of Phragmites australis world-wide[J].Aquatic Botany， 1999，64（3-4）：209-221.

[5] HOFSTRA D E，CLAYTON J.RAPD profiling and isozyme analysis of New Zealand Hydrilla verticillata[J]. Aquatic Botany，2000，66：153-166.

[6] GRANT V.The Evolutionary Process：A Critical Study of Evolutionary Theory[M].New York：Columbia University Press，1991.