李 穎，李 翔，韓燕全，高家榮（安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，合肥 230031）

中藥血清指紋圖譜的應(yīng)用概況Δ

李 穎＊，李 翔，韓燕全，高家榮（安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，合肥 230031）

目的：了解中藥血清指紋圖譜在中藥研究領(lǐng)域的應(yīng)用情況。方法：查閱國內(nèi)、外有關(guān)中藥血清指紋圖譜的文獻(xiàn)，對其在中藥學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)行整理、總結(jié)、分析。結(jié)果與結(jié)論：中藥血清指紋圖譜在血清藥物化學(xué)、血清藥理學(xué)、中藥藥動學(xué)方面都有應(yīng)用，已取得顯著成績。中藥血清指紋圖譜協(xié)同中藥化學(xué)、中藥血清藥理學(xué)、中藥藥動學(xué)一起推動著中藥藥效成分及其作用機制向著明確化、清晰化方向發(fā)展，故中藥血清指紋圖譜的應(yīng)用前景廣闊。

中藥血清指紋圖譜；應(yīng)用；血清化學(xué)；血清藥理學(xué)；中藥藥動學(xué)

＊副主任醫(yī)師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。電話：0551-62838553。E-mail：ymh2003@126.com

中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖。它包含豐富的信息，可反映所含成分的全面性和體現(xiàn)中藥成分的整體性，在評價中藥質(zhì)量方面發(fā)揮著重要作用。但是，這種化學(xué)指紋圖譜只能起到一個“化學(xué)條碼”標(biāo)志作用，而其與藥效作用之間的關(guān)系卻很模糊，還無法從指紋圖譜中解析某一峰或某一段峰所代表的藥理作用[1]。中藥雖成分眾多，但只有那些被消化吸收進(jìn)入血液的成分或其代謝產(chǎn)物才有產(chǎn)生藥效的可能。分析給藥后血清中成分以了解中藥及復(fù)方的體內(nèi)直接效用物質(zhì)，將成為快速、準(zhǔn)確的研究確定中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的有效途徑。近年來，有關(guān)中藥血清指紋圖譜的研究逐漸增多，中藥血清指紋圖譜技術(shù)正逐步成熟，并協(xié)同中藥血清藥物化學(xué)、血清藥理學(xué)、中藥藥動學(xué)一起推動著中藥藥效成分及其作用機制向著明確化、清晰化方向發(fā)展。本文就近年來中藥血清指紋圖譜的應(yīng)用情況作一綜述。

1 中藥血清指紋圖譜的建立

中藥血清指紋圖譜是指將中藥經(jīng)口服給藥后一定時間采血，分離血清，用含藥血清代替中藥，經(jīng)適當(dāng)處理，采用現(xiàn)代分析手段，得到能夠標(biāo)志該中藥藥效成分特征的色譜或光譜圖。實驗中常用大鼠制備含藥血清，也可采用小鼠[2]或家兔[3]。實驗中應(yīng)盡量選用與人類生物學(xué)特性近似的物種，應(yīng)具備易獲得、取血方便等條件，這些都是選擇供體動物的重要因素。

目前的研究中，血清樣本的獲取大多采用健康動物給藥后采血?？紤]到藥物的功用是防治疾病，而健康動物與患病動物對藥物的吸收、處置可能有所差異，故有些研究選用生理狀態(tài)下或病理狀態(tài)下的實驗動物制備含藥血清。牟玲麗等[4]建立d-半乳糖致衰老大鼠模型，同時灌胃給予銀杏葉提取物，制備衰老大鼠的含藥血清，分別針對黃酮類成分和內(nèi)酯類成分建立血清指紋圖譜，分析入血成分。馮志毅等[5]采用速尿和大腸桿菌內(nèi)毒素建立家兔陰虛熱盛證模型，獲得地黃“養(yǎng)陰清熱”高效液相色譜（HPLC）血清指紋圖譜，有助于闡明生地黃養(yǎng)陰清熱的藥理活性及作用機制。在病理、生理兩種不同的狀態(tài)下，機體對藥物作用的反應(yīng)及產(chǎn)生的內(nèi)源性有效成分也是不同的，故制備的含藥血清中血清成分也應(yīng)有所差異。

中藥血清指紋圖譜的建立方法有多種，最先考慮和應(yīng)用最多的方法則是HPLC法。解析指紋圖譜的方法有相似度評價法、模糊聚類分析、人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)法、主成分分析法等[6-8]。目前，對于血清指紋圖譜的解析和其實際的指導(dǎo)意義都處于初步的摸索和探討階段，有必要進(jìn)行深入、細(xì)致的研究。

2 中藥血清指紋圖譜應(yīng)用進(jìn)展

2.1 在血清藥物化學(xué)中的應(yīng)用

“血清藥物化學(xué)”的概念最早是由日本學(xué)者田代真一提出的[9]。1997年，中藥血清藥物化學(xué)這一概念由我國學(xué)者王喜軍[10]加以完善：中藥血清藥物化學(xué)是以藥物化學(xué)方法為基礎(chǔ)，以人或動物口服給藥后的血清為樣品，應(yīng)用現(xiàn)代分離技術(shù)及多位聯(lián)用技術(shù)，分離、鑒定血清中的移行成分，研究血清中移行成分與傳統(tǒng)療效的相關(guān)性，闡明體內(nèi)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及體內(nèi)動態(tài)的應(yīng)用學(xué)科。

近年來，我國在中藥血清藥物化學(xué)方面的研究取得了較大進(jìn)展，運用指紋圖譜技術(shù)，通過藥效學(xué)實驗，對中藥口服給藥后移血成分及代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，揭示了多味中藥的藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。如雷志丹等[11]建立了單味中藥川芎提取液及川芎提取液灌胃后大鼠血清的HPLC指紋圖譜，從血中發(fā)現(xiàn)了7個入血成分，其血清藥物化學(xué)表征為闡明川芎藥理作用及其質(zhì)量控制提供了重要依據(jù)。

中藥血清指紋圖譜在中藥復(fù)方血清藥物化學(xué)研究方面有眾多成就。劉世萍等[12]比較了安神寧口服液的指紋圖譜和血清指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)15個入血成分中有2個為五味子所含的原型成分，表明五味子在該復(fù)方制劑中具有重要作用。郭潔等[13]建立了注射用雙黃連無菌粉末HPLC指紋圖譜，得出綠原酸、連翹酯苷、黃芩苷、連翹苷、木犀草素、漢黃芩苷和黃芩素7個已知成分可能為發(fā)揮藥效的活性成分及主要物質(zhì)基礎(chǔ)。對注射用雙黃連無菌粉末進(jìn)行血清藥物化學(xué)分析，闡明其體內(nèi)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為優(yōu)化處方配伍提供了實驗依據(jù)。

2.2 在血清藥理學(xué)中的應(yīng)用

中藥血清藥理學(xué)是指將中藥或中藥復(fù)方經(jīng)動物口服給藥一段時間后，采集血液、收集血清，把含藥血清加入離體反應(yīng)系統(tǒng)中從而研究其藥理作用的一種半體內(nèi)實驗方法。中藥血清指紋圖譜將藥理作用機制建立在生物活性的層面上，通過圖譜分析療效與化學(xué)成分的相關(guān)性，考慮譜效關(guān)系。中藥譜效學(xué)（譜效關(guān)系）是在中醫(yī)藥理論現(xiàn)代研究的基礎(chǔ)上，將中藥指紋圖譜和效應(yīng)學(xué)相結(jié)合，應(yīng)用生物信息學(xué)方法，建立中藥指紋圖譜中化學(xué)成分變化與中藥療效結(jié)果聯(lián)系的一門學(xué)科。中藥血清指紋圖譜的整體性和模糊性正好符合中藥質(zhì)控整體性的要求，較之單一成分或指標(biāo)成分分析藥效，更具有科學(xué)性和全面性。

喬逸等[14]采用HPLC指紋圖譜分析方法，比較紅花提取物及陰性提取物最大藥效時刻、最小藥效時刻的含藥血清色譜圖，結(jié)果顯示紅花提取物最大藥效時間為3 h和最小藥效時間為6 h。且指紋圖譜分析發(fā)現(xiàn)，色譜圖中出現(xiàn)的一個較大的物質(zhì)峰對全血黏度的降低起重要作用，證明了羥基紅花黃色素A是紅花活血化瘀的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。李越峰等[15]采用HPLC法獲得四逆散凍干粉指紋圖譜，結(jié)果發(fā)現(xiàn)昔奈福林、芍藥苷、柴胡皂苷C和甘草次酸4種成分及其配伍、四逆散凍干粉整方均能使腦脊液中內(nèi)源性物質(zhì)峰面積增大，其中血清移行成分的配伍作用最強。以血清移行成分為目標(biāo)成分，結(jié)合藥效學(xué)研究，確認(rèn)了四逆散凍干粉改善睡眠作用的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，更加清晰地闡明了四逆散凍干粉改善睡眠的作用機制。

2.3 在中藥藥動學(xué)中的應(yīng)用

中藥藥動學(xué)是在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，研究中藥的藥動學(xué)特征。中藥是作為一個整體發(fā)揮作用的，其中一種有效成分的藥動學(xué)不一定能代表其他成分的體內(nèi)過程。而中藥血清指紋圖譜正好彌補了這個不足，它是從整體上分析入血成分，對入血成分在體內(nèi)的動態(tài)變化及規(guī)律進(jìn)行研究，進(jìn)而闡明中藥的藥動學(xué)特點。

曾俊芬等[3]采用HPLC法監(jiān)測兔口服生化湯后體內(nèi)阿魏酸的含量變化，進(jìn)行藥動學(xué)參數(shù)研究，結(jié)果體內(nèi)阿魏酸的分布代謝呈二室模型，不同時間的血清指紋圖譜與空白血清指紋圖譜有顯著不同，這對闡明生化湯的藥動學(xué)特性、藥理活性及作用機制提供了重要依據(jù)。邱麗萍等[16]提取分離當(dāng)歸多糖，以血清指紋圖譜法考察其藥動學(xué)特性，得到當(dāng)歸多糖在給藥45～90m in時作用較強，利用歐氏距離綜合反映指紋圖譜中的多個特征值來度量圖譜間的差異，從整體上反映了給藥前后血清圖譜的變化，更加符合中藥整體作用的特點。

中藥血清指紋圖譜已應(yīng)用到中藥藥動學(xué)中，為中藥藥動學(xué)研究做出了突出的貢獻(xiàn)，但發(fā)表的文獻(xiàn)比較少。將來中藥血清指紋圖譜在藥動學(xué)方面的應(yīng)用會更加廣泛。

3 中藥血清指紋圖譜與微透析技術(shù)聯(lián)用

微透析技術(shù)（M icrodialysis），是一種在體取樣的技術(shù)。微透析技術(shù)已從神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用到組織，如腦、皮膚、肝臟及血液等。微透析技術(shù)具有采樣創(chuàng)傷輕微，樣品可直接分析，透析液僅含游離藥物等特點。傳統(tǒng)藥動學(xué)研究面臨的一些難題，在運用微透析技術(shù)時則可迎刃而解[17]。微透析技術(shù)應(yīng)用于化學(xué)藥品的研究報道較多，但其應(yīng)用于血清指紋圖譜方面的文獻(xiàn)還鮮見。葉勇等[18]利用血液微透析技術(shù)進(jìn)行芎冰噴霧劑的藥動學(xué)研究，無需采血就可從同一動物獲得大量樣本。微透析技術(shù)避免了一般采血時創(chuàng)傷大且不可恢復(fù)的缺點，且該技術(shù)僅是在樣品采集的方式上進(jìn)行了改進(jìn)，并不影響血液本身的藥物化學(xué)成分。

4 結(jié)語

中藥血清指紋圖譜的發(fā)展非常迅速，應(yīng)用亦越來越廣泛，主要應(yīng)用于中藥血清藥物化學(xué)、中藥血清藥理學(xué)、中藥藥動學(xué)，為研究藥物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機制提供了可靠的方法。此外，中藥血清指紋圖譜與微透析技術(shù)的聯(lián)用將為中藥及中藥復(fù)方的研究提供一種新方法。中藥血清指紋圖譜的發(fā)展加速了中藥藥效成分、作用機制研究的透明化，同時這也為自身的發(fā)展開拓了更廣闊的道路。

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R284；R282

A

1001-0408（2014）11-1055-02

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2014.11.33

安徽省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研課題項目（No.2012zy04）

2013-07-24

2013-10-11）