康馨元,任伯穎,曲 朋,張 輝,孫佳明

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117)

左金丸出自《丹溪心法·火六》，丹溪認(rèn)為：“氣從左邊起者，乃肝火也?！弊蠼鹜枳鳛橹位稹叭敕健?主方),書(shū)中標(biāo)明：“左金丸,治肝火,一名回令丸。”[1]本品左金膠囊是在左金丸的基礎(chǔ)上采用現(xiàn)代工藝提取精制而成的膠囊劑型[2]。左金膠囊由黃連總堿和吳茱萸總堿組成，清肝瀉火，主治肝經(jīng)火旺之脅肋脹痛、嘔吐吞酸、噯氣口干、舌紅苔黃、脈象弦數(shù)等。方中重用黃連為主，以瀉心火[1]，黃連主要含有小檗堿、黃連堿、藥根堿、甲基黃連堿等生物堿成分,其中以小檗堿含量最高[3]。黃連中生物堿的含量測(cè)定方法報(bào)道較多[4-9]，為了有效控制藥品質(zhì)量，確保該制劑的療效，在文獻(xiàn)報(bào)道及法定標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)其有效成分鹽酸小檗堿為定量控制指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。

1 試驗(yàn)材料

1.1 儀器與試劑 Aglient 1100高效液相色譜儀，G1314A紫外檢測(cè)器，7725i手動(dòng)進(jìn)樣器，Aglient色譜數(shù)據(jù)工作站。鹽酸小檗堿化學(xué)對(duì)照品(由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110715-200212，規(guī)格：供含量測(cè)定用)。所用試劑均為色譜純和分析純。

1.2 色譜工作條件 色譜柱為ZORBAX 80A Extend-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動(dòng)相為0.05 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈(75∶25)；流速為0.6 mL/min，進(jìn)樣體積5 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm。

2 試驗(yàn)方法

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在60 ℃真空干燥4 h的鹽酸小檗堿對(duì)照品0.010 59 g，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL含0.105 9 mg鹽酸小檗堿)。

2.2 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，混勻，取0.1 g，精密稱定置100 mL量瓶中，加鹽酸-甲醇(1∶100)約95 mL，置60 ℃水浴中加熱15 min，取出超聲處理30 min，放置過(guò)夜，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取2 mL置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 取不含黃連總堿的處方,按制備工藝制成缺黃連總堿的陰性對(duì)照品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

3 結(jié)果與分析

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 按試驗(yàn)方法對(duì)鹽酸小檗堿進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果表明鹽酸小檗堿在350 nm處有較大吸收，試驗(yàn)選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm。

3.2 流速的選擇 曾選用流速為0.8 mL/min，0.6 mL/min，0.4 mL/min，后改為0.6 mL/min，分離度較好，保留時(shí)間適中。

3.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 按上述色譜條件測(cè)定,理論板數(shù)按鹽酸小檗堿計(jì)算應(yīng)不低于3 000，高效液相色譜圖略。

3.4 線性關(guān)系考察 精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液(0.105 9 mg/mL)2、4、6、8、10 μL分別注入液相色譜儀,依法測(cè)定，根據(jù)對(duì)照品的峰面積積分值對(duì)鹽酸小檗堿質(zhì)量繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)表1。

表1 鹽酸小檗堿進(jìn)樣量與峰面積

結(jié)果表明鹽酸小檗堿對(duì)照品在0.211 8～1.059 0 mg之間,進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系，r=0.999，回歸方程Y=583.715 62X-149.859 015。

3.5 精密度考察 分別吸取同一劑量的對(duì)照品溶液，依法測(cè)定其峰面積值。精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液(0.105 9 mg/mL)5 μL連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果見(jiàn)表2，RSD%=1.09(n=5)，表明儀器精密度良好。

表2 方法精密度試驗(yàn)

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液5 μL,于0、2、4、24、36 h分別進(jìn)樣5 μL進(jìn)行測(cè)定(n=5)，峰面積見(jiàn)表3。RSD%=1.47(n=5)，結(jié)果表明鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液在36 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。

表3 鹽酸小檗堿對(duì)照品穩(wěn)定性試驗(yàn)

3.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品(批號(hào):040601)5份，每份約0.1 g，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果見(jiàn)表4，RSD%=0.86(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知樣品含量(418.92 mg/g)樣品(批號(hào)： 040401)5份， 分別加入一

表4 樣品重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

定量鹽酸小檗堿，測(cè)定，并根據(jù)樣品含量及鹽酸小檗堿對(duì)照品加入量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表5，RSD%=0.19(n=5)。

表5 回收率試驗(yàn)

3.9 樣品含量測(cè)定 分別精密吸取10批供試品溶液5 μL,注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 樣品中鹽酸小檗堿含量

4 結(jié)論

經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)，本品中鹽酸小檗堿總含量為每粒不得低于22.7 mg。本試驗(yàn)建立的采用高效液相色譜法測(cè)定左金膠囊中鹽酸小檗堿的含量，方法學(xué)考察結(jié)果表明，本方法測(cè)定左金膠囊中鹽酸小檗堿的含量快速、簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，穩(wěn)定性較好。

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