菅艷艷楊永利

高效液相色譜法測定蒙藥色布茹-7中甘草苷的含量

菅艷艷1楊永利2

目的 采用高效液相色譜法測定色布茹-7中甘草苷的含量。方法 甘草苷含量分析采用高效液相色譜法。色譜條件：乙腈-0.5%冰醋酸（18:82）為流動相；檢測波長為276 nm，流速1.0 ml/min。結(jié)果 樣品中甘草苷達(dá)到基線分離；結(jié)果甘草苷在0.09856～0.98560 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=1.0000），平均加樣回收率為98.5%（RSD＝3.1%）。結(jié)論 所建立的含量測定方法簡便、準(zhǔn)確、具有實用性。

高效液相色譜法；色布茹-7；甘草苷

色布茹-7為包頭市蒙中醫(yī)院的一個蒙醫(yī)驗方，用于治療腎寒引起的遺精。該處方由甘草、楓香脂、蓽茇、梔子等七味中藥組成，至今尚無含量測定標(biāo)準(zhǔn)。甘草為處方中的主藥，本實驗建立了高效液相色譜法（HPLC）測定色布茹-7中的甘草苷，方法簡便易行，為色布茹-7有效成分的控制提供了實驗依據(jù)，也使該產(chǎn)品質(zhì)量的可控性得到進(jìn)一步提升。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC-20A高效液相色譜儀，紫外檢測器，昆山市超聲儀器有限公司KQ-500DE超聲清洗器，METTLER TOLEDO AL204-IC型電子天平，UV-2450紫外-可見分光光度儀。

1.2 樣品 色布茹-7（內(nèi)蒙古包頭市蒙中醫(yī)院提供，批號：090712、090811、090905）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)品 甘草苷（批號：111610-200604）購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4 試劑 乙腈（色譜純）、水為超純水、其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 APPOLO C18柱（250.0 mm×4.6 mm，5 μm），phenomenex C18預(yù)柱；流動相：乙腈-0.5%冰醋酸（18:82），流速1.0 ml/min，檢測波長276.0 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量20 μl。此色譜條件下對照品和樣品的各峰分離度均大于1.5，且峰形良好，陰性對照樣品不干擾測定，理論板數(shù)較高，甘草苷的理論板數(shù)均大于3 000[1]。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 精密稱取于五氧化二磷減壓干燥器中，干燥12 h以上的甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，加入甲醇制成每1毫升含甘草苷20 μg的溶液，即得。

2.3 樣品溶液的制備 取重量差異項下的本品，研細(xì)，精密稱取0.45 g，置具塞錐形瓶中，精密加入0.30%氨水50 ml，稱定重量，超聲處理（功率300 W，頻率25 kHz）40 min，取出，放冷，再稱定重量，采用0.3%氨水補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜過濾，即得供試品溶液[2]。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取2.2項下制得的甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，按上述色譜條件測定，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，以對標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程[3]?；貧w方程為：Y=1666004.666X+1282.039，r=1.0000，見表1。

表1 甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4.2 穩(wěn)定性試驗 取同一份樣品溶液（批號：090905），分別在0、6、12、24 h進(jìn)行測定。數(shù)據(jù)表明甘草苷在24 h內(nèi)穩(wěn)定，見表2。

表2 放置不同時間測定樣品中甘草苷的峰面積積分值

2.4.3 重復(fù)性試驗 取同一批號色布茹-7樣品6份（批號：090905），按2.3項下的方法制備供試品溶液，進(jìn)樣分析。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好，見表3。

2.4.4 準(zhǔn)確度試驗 取供試品（批號：090905，含量2.03 mg/g）9份，各約0.225 g，精密稱定，分別置9個具塞錐形瓶中，再分別在其中3個具塞錐形瓶中各精密加入濃度為4.928 μg/ml、8.436 μg/ml、14.05 μg/ml的甘草苷對照品，0.3%氨水溶液各50 ml（分別相當(dāng)于供試品含有量的50%、100%和150%）分別稱定重量，超聲處理40 min，取出，再稱重，用0.3%氨水補足減失的重量，搖勻，濾過，測定每份含量，計算回收率，見表4。

2.5 樣品測定 取色布茹-7樣品3批，照2.3項下的方法處理并測定，見表5。

表3 甘草苷含量重現(xiàn)性試驗結(jié)果

表4 加樣回收試驗結(jié)果

表5 色布茹-7樣品測定結(jié)果

3 討論

本實驗考察了218.0 nm、276.0 nm和312.5 nm三個檢測波長，參照中國藥典2005年版甘草含量測定項下甘草苷的測定方法，故選擇276.0 nm作為檢測波長[4]。色布茹-7作為蒙古族的驗方，尚無質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，本實驗建立甘草苷的含量測定方法，可以有效對其進(jìn)行質(zhì)量控制。

[1] 孔文,趙燕紅.HPLC法測定蒙藥加味烏蘭牧仁湯中桅子苷的含量[J].北方藥學(xué),2011,8(1):7-8.

[2] 菅艷艷,楊永利.RP-HPLC法測定蒙藥沙日崩-8湯中甘草酸的含量[J].中國民族醫(yī)藥雜志,2012,18(5):57-59.

[3] 郭守芹,鄭健.HPLC法測定輕身明目顆粒中綠原酸的含量[J].中國藥事,2012,26(2):175-177.

[4] 中華人民共和國國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:59-60.

R927.2

A

1673-5846(2014)07-0017-02

1包頭市食品藥品檢驗檢測中心，內(nèi)蒙古包頭 014060

2內(nèi)蒙古包頭市婦幼保健所，內(nèi)蒙古包頭 014030