郭德芳， 方夢縈， 張無敵， 劉麗春， 尹芳，趙興玲， 柳靜， 楊紅， 劉士清， 陳玉保

(1.云南師范大學(xué)，云南 昆明 650500；2.云南省麗江市農(nóng)村能源管理站，云南 麗江 674100)

0 引 言

根霉(Rhizopus)是常見的霉菌，在空氣、土壤以及各種器具表面都有其孢子的存在.在釀造上，根霉扮演了重要角色，我國是最早使用根霉釀酒的國家[1].但是一些根霉菌種會產(chǎn)生毒素，使其在食品發(fā)酵中的安全性受到了質(zhì)疑[2]，且對于菌類培養(yǎng)會產(chǎn)生一定影響，制約了菌類規(guī)?；a(chǎn).

對根霉生長影響及抑制作用的研究，主要有天然防腐劑和人工合成防腐劑(如甘草中的天然防腐劑[3]、側(cè)柏葉揮發(fā)油制成的天然防腐劑[4]等)、中草藥提取物(如廣藿香提取物[5]、核桃葉提取物[6]等)、抑菌劑(如力克霜、多菌靈、甲基托布津[7]等)、化學(xué)試劑(如鋅[8]、丙酮[9]等)以及溫度[10].但是對于沼氣發(fā)酵液對根霉的抑制未見報(bào)道.

沼液作為有機(jī)物在進(jìn)行沼氣發(fā)酵產(chǎn)生沼氣的同時(shí)而得到的一種厭氧產(chǎn)物，含有多種農(nóng)作物生長所需要的營養(yǎng)成分，同時(shí)又有殺滅或抑制植物病原菌的作用，是一種良好的有機(jī)液體肥料.相關(guān)的報(bào)道和實(shí)驗(yàn)已表明[11-15]沼液對農(nóng)作物中的30余種病蟲害具有一定的防治作用，與農(nóng)藥相比具有無抗性、價(jià)格低等優(yōu)勢，是理想的農(nóng)藥代替品.

沼液成分較為復(fù)雜，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)、礦物質(zhì)、水解酶、B族維生素、氨基酸、植物激素、抗生素和腐殖酸等，對作物既有促進(jìn)作用，又有抑制作用；同時(shí)，不同來源的沼液、不同處理的沼液對不同微生物的抑制效果也不完全相同.云南師范大學(xué)[16-18]采用不同的沼液對煙草赤星菌(Alternariaalternata)進(jìn)行抑菌研究：利用不同濃度和不同溫度的沼氣發(fā)酵液以及經(jīng)巴氏滅菌煮沸滅菌后的沼氣發(fā)酵液對煙草赤星菌進(jìn)行抑制作用，并對沼液與八種農(nóng)藥對煙草赤星病抑制的效果進(jìn)行對比研究;此外還采用萃取后的沼液對煙草赤星菌、尖廉孢菌(Fusariumoxyspomm)進(jìn)行抑制試驗(yàn)[19-21].本實(shí)驗(yàn)對不同來源的常見沼液對根霉進(jìn)行相關(guān)抑制的對比研究，希望能對沼液綜合利用提供一定指導(dǎo).

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 供試病原菌

實(shí)驗(yàn)所用根霉為本實(shí)驗(yàn)室自行從土壤中提取并分離的黑根霉.

1.1.2 培養(yǎng)基

實(shí)驗(yàn)采用常規(guī)PDA培養(yǎng)基.

1.1.3 藥品

比旋光度為+52.5°～53.0°的葡萄糖[19].

1.1.4 儀器

實(shí)驗(yàn)所用主要儀器如下：接種針、接種環(huán)、試管、培養(yǎng)皿、恒溫培養(yǎng)箱、電磁爐、玻璃棒、紗布、SW-CJ-1F潔凈工作臺等[19].

1.2 方法

1.2.1 沼液處理方法

將不同來源的沼液經(jīng)12 000rpm離心1 min即為實(shí)驗(yàn)組，對照組采用無菌蒸餾水[19].

1.2.2 數(shù)據(jù)處理方法

抑制菌絲生長率計(jì)算采用生長速率法[19].

抑制數(shù)(cm)=對照平板培養(yǎng)基上菌落直徑-處理平板培養(yǎng)基上菌落直徑[19]

相對抑制率%

1.2.3 實(shí)驗(yàn)方法

①將待試菌接種于PDA平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)至長滿整個(gè)平板，備用.

②抑菌實(shí)驗(yàn)：取布滿供試黑根霉的PDA培養(yǎng)基平板，用無菌打孔器(Φ=8 mm)取出菌落邊緣生長旺盛的菌絲，用接種針小心地將菌種塊移入不同抑菌液處理的平板上，菌絲一面朝上，每個(gè)培養(yǎng)皿中放入三小塊菌種，并呈三角形放于平板中央，加蓋標(biāo)記，于28 ℃恒溫箱中培養(yǎng)，定時(shí)觀察測量不同培養(yǎng)基平板上黑根霉菌落的直徑[19].

③培養(yǎng)24 h后，用十字交叉法測量供試病原菌菌落生長直徑并做好記錄；以后每天測量一次菌落直徑，待對照菌落長滿培養(yǎng)皿后實(shí)驗(yàn)結(jié)束[19].

2 結(jié)果與分析

不同來源沼液對黑根霉進(jìn)行抑菌的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1.

圖1 不同來源的沼液的抑菌情況

由圖1數(shù)據(jù)計(jì)算抑菌率，得表1.對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，可得表2.

由表2可以看出，實(shí)驗(yàn)組與對照組之間存在很明顯的差異(極顯著差異)，由此可以得出：不同來源的沼液對黑根霉的抑制作用都很明顯，其中蔬菜皮發(fā)酵液、水葫蘆發(fā)酵液、藍(lán)藻發(fā)酵液的抑制效果非常好，西番蓮發(fā)酵液的抑制效果是好，豬糞發(fā)酵液的抑制效果是較好.同時(shí)可以初步判斷出，以植物為發(fā)酵原料所獲得的沼氣發(fā)酵液要比以動(dòng)物糞便為原料獲得的沼氣發(fā)酵液的抑菌效果好.

表1 不同來源沼液的抑菌率(%)

表2 不同來源沼液對黑根霉的抑制作用的單因素方差分析

3 結(jié) 論

由于沼氣發(fā)酵液不僅對植物病原菌，如煙草赤星菌、尖廉胞菌、草莓枯萎病等有抑制作用，還對根霉、黑曲霉這些霉菌有一定的抑制作用，可知沼液對微生物的生長有一定影響，無論是抑制，還是促進(jìn)，且不同來源的沼液、不同處理的沼液對微生物的抑制作用都是不同的.

研究結(jié)果表明，不同來源的沼液對黑根霉均有抑制作用，其中以蔬菜皮為原料的沼液的抑菌作用最強(qiáng)，而以豬糞為原料的抑菌效果最弱，同時(shí)蔬菜皮、藍(lán)藻、西番蓮為原料的沼液在抑菌過程中有一定波動(dòng)，可能是沼液中的微生物在培養(yǎng)基上有一個(gè)適應(yīng)性的過程.同時(shí)可大致推斷出以植物為原料的發(fā)酵液抑菌效果要好于以動(dòng)物糞便為原料的發(fā)酵液.本次實(shí)驗(yàn)可對沼液應(yīng)用的擴(kuò)展及綠色生態(tài)農(nóng)村的建設(shè)和菌類經(jīng)濟(jì)發(fā)展、制酒提供一定的理論依據(jù).

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