薩日蓋 紅 梅 那生桑

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

復(fù)方沙棘顆粒劑是治療氣管炎、慢性支氣管炎的蒙醫(yī)傳統(tǒng)驗(yàn)方，經(jīng)劑型改革制成的新劑型。本實(shí)驗(yàn)采用香煙煙霧使小鼠被動(dòng)吸入法建立小鼠慢性氣管-支氣管炎模型，實(shí)驗(yàn)觀察復(fù)方沙棘顆粒劑對(duì)模型的影響，以了解復(fù)方沙棘顆粒劑治療氣管炎、慢性支氣管炎癥的作用，為評(píng)價(jià)其療效提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

動(dòng)物:昆明系小白鼠，清潔級(jí)，由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，自由攝水?dāng)z食。飼養(yǎng)環(huán)境20～25℃，保持安靜清潔，通風(fēng)通氣?；\具每日清洗1次，保持干爽。

儀器:MMME cocell 111R型干燥箱(德國(guó)產(chǎn));RM2135型Leice石蠟切片機(jī)(德國(guó)產(chǎn));HI1210型攤片機(jī)(德國(guó)產(chǎn));HI1220型烘片機(jī)(德國(guó)產(chǎn));EG1150H型分體式組織包埋機(jī)(德國(guó)產(chǎn));DM2000型Leice熒光顯微鏡;TD24-WS低速臺(tái)式離心機(jī)等。

試劑:顯微鏡用中性樹(shù)膠、伊紅、二甲苯、蘇木精、52-54℃蠟塊、56-58℃蠟塊等市售。

試藥:復(fù)方沙棘顆粒劑，由內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙藥研究所制備，臨用時(shí)粉碎研細(xì)，加5%CMC-Na水溶液制成不同濃度的混懸液;鹽酸氨溴索分散片，市售。臨用時(shí)粉碎研細(xì)，加5%CMC-Na水溶液制成，試驗(yàn)用時(shí)作為陽(yáng)性對(duì)照藥劑。

2 方法

2.1 造模:取昆明系小白鼠60只，體重20±2g，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，分別為對(duì)照組、被試劑高、中、低劑量組、模型組和陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只。造模實(shí)驗(yàn)除對(duì)照組外，小鼠置籠中，罩鐘罩，從籠底部煙熏，保證煙霧經(jīng)過(guò)鐘罩自鐘罩頂部排出，1 次/d，每次 0.5h，連續(xù) 30d。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 病理標(biāo)本的制備:造模結(jié)束次日起對(duì)照組和模型組灌胃給同體積量空白敷型劑，被試劑高、中、低劑量組分別灌胃不同濃度的復(fù)方沙棘顆粒劑混懸液，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃鹽酸氨溴索分散片混懸液，灌胃量均為0.2ml/10g體重，1次/d，連續(xù)14d。末次給藥1h后麻醉下剝離小鼠氣管，切取氣管，中性甲醛固定液固定，用清水沖洗，再用70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇依次脫水，二甲苯脫色，依次浸入52～54℃蠟液、56～58℃蠟液，包埋。切片蘇木精-伊紅染色，光鏡觀察組織形態(tài)學(xué)變化［1］，并以出現(xiàn)粘膜上皮纖毛倒?fàn)?、變性，杯狀?xì)胞增生，固有層毛細(xì)血管充血，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，管壁平滑肌束斷裂、萎縮，粘膜下層明顯增厚等6個(gè)指標(biāo)變化觀察評(píng)分，每項(xiàng)得1分，比較評(píng)價(jià)模型病變程度。

2.2.2 肺泡灌洗液(BALF)細(xì)胞計(jì)數(shù):根據(jù)文獻(xiàn)［2-5］同 2.

2.1法取小鼠實(shí)驗(yàn)，末次給藥1h后以頸椎脫臼致死，切開(kāi)頸部暴露氣管，置管，以生理鹽水0.4mL灌洗，重復(fù)3次，共約回收 1mL。將 BALF 離心(1000r/min，10min，4℃)，取上清凍存于-80℃。生理鹽水重懸沉淀至1mL，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)，用瑞氏-吉姆薩染色法進(jìn)行白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)［2］。

3 結(jié)果

3.1 模型評(píng)價(jià):對(duì)照組鼠無(wú)異常，活動(dòng)自如，體毛光滑，體重增長(zhǎng)正常。模型組鼠相繼出現(xiàn)精神萎靡，弓背卷縮，體毛枯疏，體重增長(zhǎng)緩慢，從第3周基本停止增長(zhǎng)。兩組小鼠均未見(jiàn)死亡(見(jiàn)表1)。鏡下觀察:對(duì)照組鼠氣管結(jié)構(gòu)基本正常，腔內(nèi)潔凈，黏膜完整，上皮細(xì)胞飽滿(mǎn)，纖毛無(wú)異常(見(jiàn)圖1);模型組鼠氣管黏膜上皮細(xì)胞嚴(yán)重受損，氣管黏膜上皮纖毛倒伏，部分上皮細(xì)胞壞死脫落，杯狀細(xì)胞增生，固有層毛細(xì)血管充血，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，管壁平滑肌束斷裂，萎縮，黏膜下層明顯增厚，評(píng)分結(jié)果(見(jiàn)表2、圖2)。實(shí)驗(yàn)表明，小鼠熏煙致氣管炎模型成功。

表1 體重記錄(平均值，g)

表2 造模評(píng)分結(jié)果

3.2 病理形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià):陽(yáng)性對(duì)照組:氣管黏膜基本完整，纖毛明顯變短、稀疏數(shù)量減少。固有層伴見(jiàn)毛細(xì)血管充血，水腫及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)(見(jiàn)圖3)。被試劑高劑量組:氣管黏膜上皮完整，無(wú)明顯變性壞死，伴見(jiàn)纖維組織增生及少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)(見(jiàn)圖4)。被試劑中劑量組:部分氣管黏膜上皮壞死脫落。黏膜下層纖維組織增生，伴有以淋巴細(xì)胞為主的慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，局部氣管黏膜增厚(見(jiàn)圖5)。被試劑低劑量組:氣管管腔擴(kuò)張，形狀不規(guī)則。部分上皮壞死脫落暴露基底膜。黏膜下可見(jiàn)毛細(xì)血管充血，水腫，纖維組織增生及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)(見(jiàn)圖6)。結(jié)果顯示給藥組病理評(píng)分與模型組相比明顯降低(P＜0.01)，病理變化已于空白組有顯著差異(P ＜0.01)，(見(jiàn)表3)。

表3 病理病變?cè)u(píng)分結(jié)果

3.3 肺泡灌洗液分析結(jié)果:長(zhǎng)期熏煙使小鼠肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞均明顯增高。被試藥對(duì)慢性支氣管炎小鼠模型用藥干預(yù)后，上述值明顯下降(P ＜0.05)，(見(jiàn)表 4)。

表4 藥物干預(yù)對(duì)小鼠肺泡灌洗液中細(xì)胞的影像(x±s，n=10)

4 討論

慢性氣管-支氣管炎為我國(guó)北方地區(qū)常見(jiàn)的疾病，具有病因復(fù)雜、臨床癥狀多樣、病程遷延漫長(zhǎng)等特點(diǎn)。蒙藥復(fù)方沙棘顆粒劑在蒙醫(yī)臨床上使用多年，具有明確的止咳、化痰和平喘作用，主要用于治療急慢性氣管、支氣管炎。對(duì)改善急，慢性支氣管炎的單項(xiàng)癥狀咳、痰、喘有較好的作用。經(jīng)臨床驗(yàn)證對(duì)于急性氣管-支氣管炎療效顯著。本研究以煙熏法建立小鼠慢性氣管-支氣管炎模型，用蒙藥復(fù)方沙棘顆粒劑進(jìn)行干預(yù)，觀察了小鼠氣管病理學(xué)研究和肺泡灌洗液(BALF)等的特征。與模型組相比復(fù)方沙棘顆粒劑各劑量組的炎性特征明顯減輕，進(jìn)一步證實(shí)了蒙藥復(fù)方沙棘顆粒劑的療效。本結(jié)果可以在更深的層次揭示本藥的治療原理，有效地指導(dǎo)臨床用藥和蒙藥新產(chǎn)品研創(chuàng)。

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