趙會彥　肖麓　杜德志

摘要：青海大黃油菜是青藏高原特有的一個白菜型油菜地方品種，具有黃籽的優(yōu)良性狀。前人研究結(jié)果表明大黃油菜黃籽性狀受一對隱性基因Brsc1控制。該基因被定位于白菜型油菜的A9染色體上。為了篩選更多與Brsc1緊密連鎖的標記，本研究根據(jù)Brsc1所在染色體區(qū)間，依據(jù)BRAD數(shù)據(jù)庫中已公布的白菜型油菜的序列信息（http：//brassicadb.org/brad/），設(shè)計新的SSR引物，同時利用同源區(qū)間內(nèi)已有的SSR引物對目標基因進一步精細定位。以大黃油菜和褐籽油菜09A-126為親本，構(gòu)建BC1分離群體和F2群體，結(jié)合BSA法，對SSR引物進行檢測，共篩選到5個與Brsc1基因緊密連鎖的SSR標記：A-11-65、A-11-145、B-6-32、BrID10607和KS10760，其中A-11-65為共顯性標記。構(gòu)建了Brsc1的SSR標記遺傳圖譜和物理圖譜，圖譜標記密度較前人進一步增加。這些標記的獲得為油菜黃籽品種分子標記輔助選擇育種體系的建立和黃籽基因的克隆奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：青海大黃油菜；黃籽基因；SSR；遺傳圖譜；物理圖譜

中圖分類號： S565.401文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）01-0032-04

收稿日期：2013-05-04

基金項目：國家自然科學基金（編號：31060196）；國家“863”計劃（編號：2011AA10A104）；國家“973”計劃（編號：2012CB723007）；國家油菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項（編號：CARS-13）。

作者簡介：趙會彥（1989—），男，河南南陽人，碩士研究生，主要從事春油菜分子生物學研究。E-mail：13639767407@163.com。

通信作者：肖麓，博士。 E-mail：981919669@qq.com。油菜是世界范圍內(nèi)廣泛種植的油料作物之一，也是我國食用植物油的重要來源。油菜種皮顏色有黃色、褐色、黑色等，研究結(jié)果表明，在相同遺傳背景下，黃籽油菜與黑、褐籽等油菜相比，具有種皮薄，皮殼率低，蛋白質(zhì)和含油量高，色素含量少等優(yōu)點[1-2]。白菜型黃籽油菜為自然界存在的天然黃籽資源之一，對白菜型油菜黃籽基因進行定位，開發(fā)與黃籽基因緊密連鎖的分子標記，構(gòu)建黃籽基因的遺傳連鎖圖譜和物理圖譜，對黃籽油菜分子標記輔助選擇育種體系的建立、黃籽基因的圖位克隆以及轉(zhuǎn)基因油菜品種的培育等都具有重要的意義[3-7]。Chen等利用印度黃籽沙遜構(gòu)建白菜-芥藍（B. campestris-B. alboglabra）C染色體組異附加系，并利用該異附加系篩選出一個與黃籽基因緊密連鎖的RAPD標記B06-600[8]。Rahman等在白菜型黃籽沙遜油菜中發(fā)現(xiàn)1個與黃籽性狀主效基因（Br1/br1）緊密連鎖的SRAP標記SA7BG29-245，并將這個標記轉(zhuǎn)化為共顯性SNP（單核苷酸多態(tài)性）標記和SCAR（序列特異性擴增區(qū)域）標記[9]。Zhang等利用大白菜雙單倍體群體進行黃籽基因的精細定位和圖位克隆，用13個SRAP標記、6個SCAR標記和4個SNP標記構(gòu)建了黃籽基因的遺傳連鎖圖譜，克隆了控制種皮顏色的基因，該基因位于白菜型油菜A6連鎖群[10]。Kebede等對白菜型黃籽沙遜油菜種皮顏色基因進行了QTL定位，共檢測到4個QTL位點，其中一個主效QTL位點SCA9-2和一個微效QTL位點SCA9-1位于A9連鎖群，其他兩個微效QTL位點（SCA3-1和SCA5-1）分別位于A3和A5連鎖群，共解釋了67%的表型變異[11]。Xiao等對青海大黃油菜黃籽性狀進行了遺傳分析和基因定位研究，結(jié)果表明青海大黃油菜黃籽性狀受一對隱性基因（Brsc1）控制，篩選到與Brsc1緊密連鎖的10個AFLP標記（Y1至Y10）和3個SSR標記（CB10255、CB10022、CB10428），將其定位于白菜型油菜A9染色體上，同時構(gòu)建了Brsc1基因所在區(qū)域的遺傳連鎖圖譜[12]。

綜上所述可見，前人對不同的白菜型黃籽油菜品種的黃籽基因進行了定位、克隆等研究，但是對于不同油菜品種的研究結(jié)果有所不同。本研究所用青海大黃油菜是起源于青藏高原的白菜型油菜地方品種，有能夠穩(wěn)定遺傳的黃籽性狀，是一種研究白菜型油菜黃籽性狀的優(yōu)異種質(zhì)資源[13-14]。前人將大黃油菜黃籽基因Brsc1定位于A9染色體上特定區(qū)段，但標記數(shù)目有限，圖譜飽和度不夠。本研究在前人研究的基礎(chǔ)之上，進一步擴大作圖群體，結(jié)合分離體分組混合分析法（bulked segregant analysis，BSA法），在Brsc1所在染色體區(qū)段篩選新的與Brsc1連鎖更為緊密的SSR標記，增加與Brsc1基因緊密連鎖標記的數(shù)目，提高Brsc1遺傳連鎖圖譜的標記密度，為大黃油菜黃籽基因的克隆創(chuàng)造條件。同時，檢測所獲SSR標記是否為共顯性標記，用于大黃油菜分子標記輔助選擇育種體系的建立。

1材料與方法

1.1試驗材料和群體構(gòu)建

本研究所用親本材料為青海大黃油菜和一個白菜型油菜褐籽品系（編號09A-126），由青海省農(nóng)林科學院春油菜研究所提供。兩親本均已連續(xù)自交或兄妹交8代以上，其種皮顏色性狀均可穩(wěn)定遺傳。以大黃油菜為母本，09A-126為父本，F(xiàn)1代與大黃油菜回交，構(gòu)建BC1群體，作為定位群體；F1同時自交，獲得F2群體，F(xiàn)2中每一單株套袋自交獲得F2：3家系，用于與目標基因連鎖的共顯性標記的篩選。

1.2DNA提取和性狀調(diào)查分組

油菜苗期，采用CTAB法提取葉片總DNA[15]。測定每份DNA溶液的濃度，稀釋至50 ng/μL，-20 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

油菜角果完全成熟后，分單株收獲，晾干后考種。通過肉眼觀察，考查每一單株的種皮顏色。根據(jù)考查結(jié)果，將BC1群體單株分為黃籽和褐籽兩組。隨機選取12個黃籽單株和12個褐籽單株，將單株DNA等量混合，分別構(gòu)建兩個黃籽基因池和兩個褐籽基因池。根據(jù)F2群體中各單株的種皮顏色性狀，將F2群體首先分為黃籽和褐籽兩組，再根據(jù)F2 ∶3家系性狀，將F2群體中的褐籽單株分為純合褐籽（性狀不分離）和雜合褐籽（性狀分離）兩組，最終將F2群體分為黃籽、雜合褐籽和純合褐籽3組。

1.3SSR標記開發(fā)與檢測

根據(jù)前人的研究結(jié)果，Brsc1被定位在白菜型油菜A9染色體上的一段2.8 Mb的區(qū)間內(nèi)。從BRAD數(shù)據(jù)庫（http：//brassicadb.org/brad/）下載Brsc1所在區(qū)間的序列信息，利用SSRHunter 1.3軟件，進行微衛(wèi)星篩選。然后利用Primer 3軟件設(shè)計SSR引物（http：//frodo.wi.mit.edu/）。同時利用BRAD數(shù)據(jù)庫中Brsc1所在區(qū)間內(nèi)已有的SSR標記在我們的定位群體中進行多態(tài)性分析[16-19]。SSR引物由上海生工生物工程有限公司合成。SSR擴增反應(yīng)參照梅德圣等的方法[20]。擴增產(chǎn)物在6%聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳分離檢測。SSR引物首先在2對基因池中進行檢測，表現(xiàn)為多態(tài)性的引物繼續(xù)在BC1分離群體的單株中進一步進行分析，若仍然表現(xiàn)多態(tài)性，則確定為與Brsc1基因緊密連鎖的標記。獲得的特異SSR引物同時用F2群體中的單株進行檢測，以確定其是否為共顯性標記。

1.4SSR標記遺傳圖譜和物理圖譜的構(gòu)建

特異性SSR標記在BC1分離群體中進行重組單株的篩選，計算重組率，利用Kosamabi函數(shù)轉(zhuǎn)換為遺傳距離[21]。利用MAPMAKER/EXP3.0軟件，構(gòu)建Brsc1的SSR標記遺傳圖譜，并利用MapDraw V2.1作圖軟件進行遺傳圖譜和物理圖譜的繪制[22]。

2結(jié)果與分析

2.1SSR標記開發(fā)與篩選結(jié)果

前人將Brsc1定位于A9染色體上Y06（19.3 Mb）和Y10（22.1 Mb）之間2.8 Mb的區(qū)間內(nèi)。從BRAD數(shù)據(jù)庫下載該區(qū)間部分序列，用于SSR引物的設(shè)計，并下載該區(qū)間已公布的SSR標記。用黃籽/褐籽基因池和BC1分離群體單株進行檢測，共獲得5個與Brsc1緊密連鎖的特異性SSR標記：A-11-65、A-11-145、B-6-32、BrID10607和KS10760，引物序列信息見表1。 各特異性引物擴增產(chǎn)物在6%聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳分離，條帶多態(tài)性明顯，帶型清晰穩(wěn)定，圖1和圖2所示分別為引物BrID10607和KS10760擴增結(jié)果。同時，5個特異性SSR標記對F2群體中的單株進行掃描，結(jié)果顯示，A-11-65為共顯性標記，能夠區(qū)分黃籽、雜合褐籽和純合褐籽單株（圖3）。表1與青海大黃油菜黃籽基因Brsc1緊密連鎖的SSR標記

SSR標記1引物名稱1引物序列（5 ′→3′）1遺傳距離

2.2SSR標記遺傳連鎖圖譜和物理圖譜的構(gòu)建

本研究所構(gòu)建BC1作圖分離群體包含1 740個單株，6個與Brsc1表現(xiàn)連鎖的SSR標記在BC1群體中進行重組單株的篩選，計算重組率，確定各連鎖標記與Brsc1之間的遺傳距離（表1）。將6個SSR標記與前人對Brsc1的定位結(jié)果進行比較和整合，構(gòu)建Brsc1的遺傳連鎖圖譜（圖4）。各連鎖SSR標記的物理位置見表1，使用作圖軟件繪制其物理圖譜（圖4）。新開發(fā)的6個SSR連鎖標記位于Brsc1同側(cè)，與Brsc1間的平均遺傳距離為0.012 2，連鎖緊密。新開發(fā)的SSR標記覆蓋染色體上0.9 Mb的長度，圖譜標記密度進一步增加。

3討論

與前人所獲得的分子標記相比，本研究篩選得到的5個與目標基因Brsc1緊密連鎖的SSR標記與Brsc1之間的遺傳距離進一步縮短，最近的標記為KS10760（0.005 7 cM）。將新獲得的SSR標記與前人研究所得Brsc1的遺傳連鎖圖譜進行整合，圖譜標記密度進一步增加。高密度的遺傳圖譜是實現(xiàn)Brsc1圖位克隆的關(guān)鍵。新開發(fā)的SSR標記位于Brsc1同側(cè)，要實現(xiàn)Brsc1的克隆，在Brsc1另一側(cè)還須開發(fā)更多與 Brsc1 距離更近的分子標記，將Brsc1鎖定于更小的范圍內(nèi)。本研究所用作圖分離群體較前人有所擴大，作圖群體的擴大使連鎖標記與目標基因之間的遺傳距離測算更為準確，圖譜精度進一步提高，且為連鎖更緊密的分子標記的開發(fā)創(chuàng)造了條件。

Xiao等所得與Brsc1 緊密連鎖的SSR標記，距離最近的為CB10022（0.8 cM），本研究新開發(fā)的SSR標記不但與Brsc1之間遺傳距離大大縮短，而且得到一個共顯性標記A-11-65（0.008 0 cM）。由于SSR標記具有操作簡單，重復(fù)性好，成本較低等優(yōu)點，因此被廣泛應(yīng)用于分子標記輔助選擇育種。本研究所得到的SSR標記，不但與Brsc1連鎖緊密，而且擴增條帶清晰穩(wěn)定，尤其是共顯性標記的獲得，能較準確地區(qū)分不同基因型的單株，因此很適用于建立白菜型黃籽油菜分子標記輔助選擇育種體系。不足之處在于沒有篩選到與Brsc1共分離的SSR標記，SSR連鎖標記的數(shù)目也不夠多，為提高分子標記輔助選擇的準確率，還需要開發(fā)更多與Brsc1緊密連鎖的分子標記。

本研究利用新開發(fā)的SSR標記進行遺傳圖譜構(gòu)建，這些標記是根據(jù)目標基因所在特定區(qū)段的序列信息進行開發(fā)的。隨著基因測序技術(shù)的發(fā)展，植物基因組序列信息數(shù)據(jù)庫的不斷完善，通過搜索數(shù)據(jù)庫序列信息開發(fā)SSR引物越來越普遍。利用該方法進行目標基因的定位，目的性強，可快速篩選出與目標基因連鎖的分子標記。但該方法需要以一定的定位結(jié)果為基礎(chǔ)，并且需將目標基因鎖定于較小的區(qū)段內(nèi)，否則會增加SSR標記開發(fā)和篩選的難度。該方法還可用于開發(fā)SCAR、IP標記等，適用于目標基因的精細定位。

參考文獻：

[1]劉后利. 油菜遺傳育種學[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2000：215-225.

[2]高永同. 黃籽油菜的遺傳和育種研究進展[J]. 中國油料，1984（3）：89-93，96.

[3]李愛民，張永泰，蔣金金，等. 蕓苔屬主要油料作物黃籽性狀分子遺傳研究進展[J]. 分子植物育種，2009，7（2）：407-412.

[5]閆其濤，逯慧，毛萬霞，等. 植物基因分離的圖位克隆技術(shù)[J]. 分子植物育種，2005，3（4）：585-590.

[6]劉顯軍，袁謀志，官春云，等. 芥菜型油菜黃籽性狀的遺傳、基因定位和起源探討[J]. 作物學報，2009，35（5）：839-847.

[7]劉雪平，涂金星，陳寶元，等. 甘藍型黃籽油菜研究進展[J]. 中國油料作物學報，2005，27（2）：87-91.

[8]Chen B Y，Jergensen R B，Cheng B F，et al. Identification and chromosomal assignment of RAPD markers linked with a gene for seed colour in a Brassica campesrris-alboglabra addition line[J]. Hereditas，1997，126（2）：133-138.

[9]Rahman M，McVetty P B，Li G. Development of SRAP，SNP and multiplexed SCAR molecular markers for the major seed coat color gene in Brassica rapa L.[J]. Theoretical and Applied Genetics，2007，115（8）：1101-1107.

[10]Zhang J，Lu Y，Yuan Y，et al. Map-based cloning and characterization of a gene controlling hairiness and seed coat color traits in Brassica rapa[J]. Plant Molecular Biology，2009，69（5）：553-563.

[11]Kebede B，Cheema K，Greenshields D L，et al. Construction of genetic linkage map and mapping of QTL for seed color in Brassica rapa[J]. Genome，2012，55（12）：813-823.

[12]Xiao L，Zhao Z，Du D，et al. Genetic characterization and fine mapping of a yellow-seeded gene in Dahuang（a Brassica rapa landrace）[J]. Theoretical and Applied Genetics，2012，124（5）：903-909.

[13]羅玉秀，杜德志. 青海大黃油菜主要農(nóng)藝性狀研究[J].西北農(nóng)業(yè)學報，2007，16（1）：136-139.

[14]羅玉秀. 青海白菜型大黃油菜優(yōu)良特性的研究[D].西寧：青海農(nóng)林科學院，2007.

[15]Doyle J J，Doyle J I. A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue[J]. Phytochem Bull，1987，19：11-15.

[16]Cheng X，Xu J，Xia S，et al. Development and genetic mapping of microsatellite markers from genome survey sequences in Brassica napus[J]. Theoretical and Applied Genetics，2009，118（6）：1121-1131.

[17]Tommasini L，Batley J，Arnold G M，et al. The development of multiplex simple sequence repeat（SSR）markers to complement distinctness，uniformity and stability testing of rape（Brassica napus L.）varieties[J]. Theoretical and Applied Genetics，2003，106（6）：1091-1101.

[18]Iniguez-Luy F L，Voort A V，Osborn T C. Development of a set of public SSR markers derived from genomic sequence of a rapid cycling Brassica oleracea L. genotype[J]. Theoretical and Applied Genetics Theoretische und Angewandte Genetik，2008，117（6）：977-985.

[19]李霞. 人工合成甘藍型黃籽油菜粒色基因的精細定位[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學，2009.

[20]梅德圣，李云昌，王漢中，等. 甘藍型油菜渝黃1號黃籽性狀的AFLP和SSR標記[J].中國油料作物學報，2004，26（3）：6-9.

[21]Kosambi D D. The estimation of map distances from recombination values[J]. Annals of Human Genetics，1943，12（1）：172-175.

[22]劉仁虎，孟金陵. MapDraw在Excel中繪制遺傳連鎖圖的宏[J].遺傳，2003，25（3）：317-321.朱桂清，遲文娟，曹遠銀，等. 小麥散黑穗病病原菌PCR檢測方法的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2014，42（1）：36-38.

[5]閆其濤，逯慧，毛萬霞，等. 植物基因分離的圖位克隆技術(shù)[J]. 分子植物育種，2005，3（4）：585-590.

[6]劉顯軍，袁謀志，官春云，等. 芥菜型油菜黃籽性狀的遺傳、基因定位和起源探討[J]. 作物學報，2009，35（5）：839-847.

[7]劉雪平，涂金星，陳寶元，等. 甘藍型黃籽油菜研究進展[J]. 中國油料作物學報，2005，27（2）：87-91.

[8]Chen B Y，Jergensen R B，Cheng B F，et al. Identification and chromosomal assignment of RAPD markers linked with a gene for seed colour in a Brassica campesrris-alboglabra addition line[J]. Hereditas，1997，126（2）：133-138.

[9]Rahman M，McVetty P B，Li G. Development of SRAP，SNP and multiplexed SCAR molecular markers for the major seed coat color gene in Brassica rapa L.[J]. Theoretical and Applied Genetics，2007，115（8）：1101-1107.

[10]Zhang J，Lu Y，Yuan Y，et al. Map-based cloning and characterization of a gene controlling hairiness and seed coat color traits in Brassica rapa[J]. Plant Molecular Biology，2009，69（5）：553-563.

[11]Kebede B，Cheema K，Greenshields D L，et al. Construction of genetic linkage map and mapping of QTL for seed color in Brassica rapa[J]. Genome，2012，55（12）：813-823.

[12]Xiao L，Zhao Z，Du D，et al. Genetic characterization and fine mapping of a yellow-seeded gene in Dahuang（a Brassica rapa landrace）[J]. Theoretical and Applied Genetics，2012，124（5）：903-909.

[13]羅玉秀，杜德志. 青海大黃油菜主要農(nóng)藝性狀研究[J].西北農(nóng)業(yè)學報，2007，16（1）：136-139.

[14]羅玉秀. 青海白菜型大黃油菜優(yōu)良特性的研究[D].西寧：青海農(nóng)林科學院，2007.

[15]Doyle J J，Doyle J I. A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue[J]. Phytochem Bull，1987，19：11-15.

[16]Cheng X，Xu J，Xia S，et al. Development and genetic mapping of microsatellite markers from genome survey sequences in Brassica napus[J]. Theoretical and Applied Genetics，2009，118（6）：1121-1131.

[17]Tommasini L，Batley J，Arnold G M，et al. The development of multiplex simple sequence repeat（SSR）markers to complement distinctness，uniformity and stability testing of rape（Brassica napus L.）varieties[J]. Theoretical and Applied Genetics，2003，106（6）：1091-1101.

[18]Iniguez-Luy F L，Voort A V，Osborn T C. Development of a set of public SSR markers derived from genomic sequence of a rapid cycling Brassica oleracea L. genotype[J]. Theoretical and Applied Genetics Theoretische und Angewandte Genetik，2008，117（6）：977-985.

[19]李霞. 人工合成甘藍型黃籽油菜粒色基因的精細定位[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學，2009.

[20]梅德圣，李云昌，王漢中，等. 甘藍型油菜渝黃1號黃籽性狀的AFLP和SSR標記[J].中國油料作物學報，2004，26（3）：6-9.

[21]Kosambi D D. The estimation of map distances from recombination values[J]. Annals of Human Genetics，1943，12（1）：172-175.

[22]劉仁虎，孟金陵. MapDraw在Excel中繪制遺傳連鎖圖的宏[J].遺傳，2003，25（3）：317-321.朱桂清，遲文娟，曹遠銀，等. 小麥散黑穗病病原菌PCR檢測方法的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2014，42（1）：36-38.

[5]閆其濤，逯慧，毛萬霞，等. 植物基因分離的圖位克隆技術(shù)[J]. 分子植物育種，2005，3（4）：585-590.

[6]劉顯軍，袁謀志，官春云，等. 芥菜型油菜黃籽性狀的遺傳、基因定位和起源探討[J]. 作物學報，2009，35（5）：839-847.

[7]劉雪平，涂金星，陳寶元，等. 甘藍型黃籽油菜研究進展[J]. 中國油料作物學報，2005，27（2）：87-91.

[8]Chen B Y，Jergensen R B，Cheng B F，et al. Identification and chromosomal assignment of RAPD markers linked with a gene for seed colour in a Brassica campesrris-alboglabra addition line[J]. Hereditas，1997，126（2）：133-138.

[9]Rahman M，McVetty P B，Li G. Development of SRAP，SNP and multiplexed SCAR molecular markers for the major seed coat color gene in Brassica rapa L.[J]. Theoretical and Applied Genetics，2007，115（8）：1101-1107.

[10]Zhang J，Lu Y，Yuan Y，et al. Map-based cloning and characterization of a gene controlling hairiness and seed coat color traits in Brassica rapa[J]. Plant Molecular Biology，2009，69（5）：553-563.

[11]Kebede B，Cheema K，Greenshields D L，et al. Construction of genetic linkage map and mapping of QTL for seed color in Brassica rapa[J]. Genome，2012，55（12）：813-823.

[12]Xiao L，Zhao Z，Du D，et al. Genetic characterization and fine mapping of a yellow-seeded gene in Dahuang（a Brassica rapa landrace）[J]. Theoretical and Applied Genetics，2012，124（5）：903-909.

[13]羅玉秀，杜德志. 青海大黃油菜主要農(nóng)藝性狀研究[J].西北農(nóng)業(yè)學報，2007，16（1）：136-139.

[14]羅玉秀. 青海白菜型大黃油菜優(yōu)良特性的研究[D].西寧：青海農(nóng)林科學院，2007.

[15]Doyle J J，Doyle J I. A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue[J]. Phytochem Bull，1987，19：11-15.

[16]Cheng X，Xu J，Xia S，et al. Development and genetic mapping of microsatellite markers from genome survey sequences in Brassica napus[J]. Theoretical and Applied Genetics，2009，118（6）：1121-1131.

[17]Tommasini L，Batley J，Arnold G M，et al. The development of multiplex simple sequence repeat（SSR）markers to complement distinctness，uniformity and stability testing of rape（Brassica napus L.）varieties[J]. Theoretical and Applied Genetics，2003，106（6）：1091-1101.

[18]Iniguez-Luy F L，Voort A V，Osborn T C. Development of a set of public SSR markers derived from genomic sequence of a rapid cycling Brassica oleracea L. genotype[J]. Theoretical and Applied Genetics Theoretische und Angewandte Genetik，2008，117（6）：977-985.

[19]李霞. 人工合成甘藍型黃籽油菜粒色基因的精細定位[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學，2009.

[20]梅德圣，李云昌，王漢中，等. 甘藍型油菜渝黃1號黃籽性狀的AFLP和SSR標記[J].中國油料作物學報，2004，26（3）：6-9.

[21]Kosambi D D. The estimation of map distances from recombination values[J]. Annals of Human Genetics，1943，12（1）：172-175.

[22]劉仁虎，孟金陵. MapDraw在Excel中繪制遺傳連鎖圖的宏[J].遺傳，2003，25（3）：317-321.朱桂清，遲文娟，曹遠銀，等. 小麥散黑穗病病原菌PCR檢測方法的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2014，42（1）：36-38.