戴建華+馬晨輝+王永娟

摘要：將凍存已久的新城疫病毒LaSota株在雞胚中連傳5代，獲得E1～E5代病毒，選取代表性的E1和E5病毒進(jìn)行病毒生物學(xué)與免疫原性鑒定。通過透射電鏡法觀察病毒粒子形態(tài)，利用血凝試驗(yàn)測(cè)定病毒的血凝價(jià)，借助1日齡雛雞腦內(nèi)注射的致病指數(shù)、最小致死量病毒致死雞胚的平均時(shí)間、雞胚致病率、雞胚半數(shù)感染量等指標(biāo)判定病毒的毒力或致病率，以雛雞免疫試驗(yàn)確定病毒的安全性與免疫原性。結(jié)果表明，引入的LaSota株經(jīng)過復(fù)壯，無(wú)論從形態(tài)還是從生化特性、免疫學(xué)特性方面，均符合低毒力活疫苗株的要求，可以用作單聯(lián)苗或多聯(lián)苗的制備。

關(guān)鍵詞：新城疫；LaSota株；復(fù)壯；鑒定

中圖分類號(hào)： S858.315.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）03-0164-02

新城疫（newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的禽類急性致死性傳染病，傳播速度快，長(zhǎng)期以來對(duì)我國(guó)的養(yǎng)禽業(yè)構(gòu)成了巨大威脅[1-5]。為了防治新城疫，除應(yīng)用嚴(yán)格的生物安全措施、防止新城疫病毒強(qiáng)毒進(jìn)入禽群外，疫苗免疫是必不可少的手段。在我國(guó)，使用低毒力活疫苗和油乳劑滅活苗已成為大多數(shù)禽場(chǎng)防制新城疫的常規(guī)手段[6]。新城疫病毒LaSota株是我國(guó)普遍使用的疫苗株，本試驗(yàn)復(fù)壯的毒株是1986年從英國(guó)中央獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)的由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所保存的凍干毒，作為疫苗毒種，筆者對(duì)其生物學(xué)和免疫學(xué)特性進(jìn)行了系統(tǒng)鑒定，現(xiàn)將有關(guān)試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

新城疫病毒LaSota株由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所提供；新城疫病毒標(biāo)準(zhǔn)株F48E8購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；SPF雞胚購(gòu)自北京梅里亞維通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司；SPF雞購(gòu)自山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院SPF雞場(chǎng)。

1.2 LaSota毒株的復(fù)壯與傳代

對(duì)保存的凍干毒以生理鹽水稀釋100倍后，接種 0.1 mL 于10日齡SPF雞胚，收集24 h后死亡雞胚尿囊液為E0代毒，后將E0代毒按同樣方法在10日齡SPF雞胚中續(xù)傳5次得到E1至E5代病毒。

1.3 形態(tài)學(xué)觀察

收集E5代病毒尿囊液，15 000 r/min離心60 min，取沉淀懸液滴于有支持膜的銅網(wǎng)上，10 min后用干凈濾紙從網(wǎng)邊吸去液體，另滴加3%磷鎢酸（pH值6.0）染色2～3 min，之后吸去液體立即進(jìn)行透射電鏡觀察。

1.4 病毒血凝試驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[7]的方法，用微量法在V型反應(yīng)板上測(cè)定 E0至E5 代病毒的血凝價(jià)。

1.5 病毒毒力測(cè)定

參考文獻(xiàn)[8]的方法，測(cè)定新城疫病毒E1代和E5代病毒的1日齡雛雞腦內(nèi)注射的致病指數(shù)（ICPI）與最小致死量病毒致死雞胚的平均時(shí)間（MDT）。雞或雞胚的樣本數(shù)均為10。

1.6 病毒EID50測(cè)定

參考文獻(xiàn)[9]的方法，對(duì)E1代和E5代病毒用滅菌生理鹽水作10倍梯度稀釋，各取0.1 mL 10-7、10-8、10-9 3個(gè)稀釋度病毒液尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚5個(gè)，棄去48 h前死亡的雞胚，隨時(shí)取出48～120 h死亡的雞胚，2～8 ℃冷卻后收獲尿囊液，同一稀釋度的尿囊液等量混合，分別測(cè)定紅細(xì)胞凝集價(jià)，至120 h取出所有活胚，逐個(gè)收獲尿囊液，分別測(cè)定紅細(xì)胞凝集價(jià)，紅細(xì)胞凝集價(jià)≥1 ∶ 128者判為感染，計(jì)算雞胚半數(shù)感染量（EID50）。

1.7 雞胚致病率測(cè)定

取E1代和E5代病毒，用滅菌生理鹽水稀釋100倍，按照每胚0.1 mL劑量尿囊腔接種10日齡SPF雞胚10個(gè)，置 37 ℃ 繼續(xù)孵育，記錄24～120 h內(nèi)死亡雞胚數(shù)和胎兒病變。

1.8 安全性測(cè)定

將20羽5日齡SPF雛雞隨機(jī)分為2組，每組10羽。其中一組用滴鼻法[8]接種0.05 mL 5倍濃縮的含毒尿囊液，另一組作空白對(duì)照。相同條件下隔離飼養(yǎng)10 d，每天記錄雞群情況。

1.9 免疫原性測(cè)定

取病毒含量不同的E1代和E5代病毒，經(jīng)0.1%甲醛滅活，按LaSota滅活苗質(zhì)量起草說明書方法制備成單苗，按 10 000 EID50、5 000 EID50、1 000 EID50、500 EID50的劑量免疫7日齡SPF雛雞，每個(gè)劑量10羽。28日齡時(shí)用100 000 EID50的F48E8強(qiáng)毒株攻擊，120 h內(nèi)記錄死亡率和疫苗的保護(hù)率。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)檢測(cè)結(jié)果

通過透射電鏡觀察復(fù)壯后的新城疫病毒粒子，結(jié)果顯示新城疫病毒粒子呈圓形或橢圓形，直徑100～500 nm，外周有囊膜，囊膜上有長(zhǎng)約10 nm的纖突（圖1）。

3 結(jié)論與討論

透射電鏡觀察結(jié)果顯示，病毒粒子具有明顯的新城疫病毒特征，說明病毒存在，并初步認(rèn)為毒株正確。引進(jìn)的LaSota株經(jīng)復(fù)壯后能在雞胚良好繁殖，在雞胚中連傳5代，雞胚尿囊液中血凝滴度均達(dá)29以上，說明毒株是穩(wěn)定的。從對(duì)該毒株系統(tǒng)鑒定的結(jié)果看，其紅細(xì)胞凝集價(jià)、1日齡雛雞腦內(nèi)注射的致病指數(shù)（ICPI）、最小致死量病毒致死雞胚的平均時(shí)間（MDT）、對(duì)雞胚毒力、安全性、免疫原性等都符合新城疫低毒力活疫苗株的要求。

上述系統(tǒng)的鑒定試驗(yàn)證明，引入的LaSota株經(jīng)過復(fù)壯，無(wú)論從形態(tài)還是從生化特性、免疫學(xué)特性方面均符合低毒力活疫苗株的要求，可以用作單聯(lián)苗或多聯(lián)苗的制備。

參考文獻(xiàn)：

[1]童光志. 動(dòng)物傳染病學(xué)[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005.

[2]梁淑珍，郭 兵，王海風(fēng). 中藥復(fù)方對(duì)雞新城疫疫苗免疫效果的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（2）：176-178.

[3]段志強(qiáng)，胡 嬌，胡增壘，等. 鵝源新城疫病毒M基因的原核表達(dá)及其多克隆抗體制備[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，28（1）：125-130.

[4]魏 寧，桂文龍，李巨銀，等. 新城疫疫苗及免疫程序?qū)Φ半u免疫效果的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（11）：232-234.

[5]于 洋，封 振，何孔旺，等. 新城疫病毒毒力分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013，29（2）：435-439.

[6]楊 煦，劉玉芬，劉懷然. 新城疫疫苗的研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2012，2（2）：325-327.

[7]Saif Y M. 禽病學(xué)[M]. 蘇敬良，高福，索勛主，譯. 11版. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005：711-733.

摘要：將凍存已久的新城疫病毒LaSota株在雞胚中連傳5代，獲得E1～E5代病毒，選取代表性的E1和E5病毒進(jìn)行病毒生物學(xué)與免疫原性鑒定。通過透射電鏡法觀察病毒粒子形態(tài)，利用血凝試驗(yàn)測(cè)定病毒的血凝價(jià)，借助1日齡雛雞腦內(nèi)注射的致病指數(shù)、最小致死量病毒致死雞胚的平均時(shí)間、雞胚致病率、雞胚半數(shù)感染量等指標(biāo)判定病毒的毒力或致病率，以雛雞免疫試驗(yàn)確定病毒的安全性與免疫原性。結(jié)果表明，引入的LaSota株經(jīng)過復(fù)壯，無(wú)論從形態(tài)還是從生化特性、免疫學(xué)特性方面，均符合低毒力活疫苗株的要求，可以用作單聯(lián)苗或多聯(lián)苗的制備。

關(guān)鍵詞：新城疫；LaSota株；復(fù)壯；鑒定

中圖分類號(hào)： S858.315.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）03-0164-02

新城疫（newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的禽類急性致死性傳染病，傳播速度快，長(zhǎng)期以來對(duì)我國(guó)的養(yǎng)禽業(yè)構(gòu)成了巨大威脅[1-5]。為了防治新城疫，除應(yīng)用嚴(yán)格的生物安全措施、防止新城疫病毒強(qiáng)毒進(jìn)入禽群外，疫苗免疫是必不可少的手段。在我國(guó)，使用低毒力活疫苗和油乳劑滅活苗已成為大多數(shù)禽場(chǎng)防制新城疫的常規(guī)手段[6]。新城疫病毒LaSota株是我國(guó)普遍使用的疫苗株，本試驗(yàn)復(fù)壯的毒株是1986年從英國(guó)中央獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)的由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所保存的凍干毒，作為疫苗毒種，筆者對(duì)其生物學(xué)和免疫學(xué)特性進(jìn)行了系統(tǒng)鑒定，現(xiàn)將有關(guān)試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

新城疫病毒LaSota株由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所提供；新城疫病毒標(biāo)準(zhǔn)株F48E8購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；SPF雞胚購(gòu)自北京梅里亞維通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司；SPF雞購(gòu)自山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院SPF雞場(chǎng)。

1.2 LaSota毒株的復(fù)壯與傳代

對(duì)保存的凍干毒以生理鹽水稀釋100倍后，接種 0.1 mL 于10日齡SPF雞胚，收集24 h后死亡雞胚尿囊液為E0代毒，后將E0代毒按同樣方法在10日齡SPF雞胚中續(xù)傳5次得到E1至E5代病毒。

1.3 形態(tài)學(xué)觀察

收集E5代病毒尿囊液，15 000 r/min離心60 min，取沉淀懸液滴于有支持膜的銅網(wǎng)上，10 min后用干凈濾紙從網(wǎng)邊吸去液體，另滴加3%磷鎢酸（pH值6.0）染色2～3 min，之后吸去液體立即進(jìn)行透射電鏡觀察。

1.4 病毒血凝試驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[7]的方法，用微量法在V型反應(yīng)板上測(cè)定 E0至E5 代病毒的血凝價(jià)。

1.5 病毒毒力測(cè)定

參考文獻(xiàn)[8]的方法，測(cè)定新城疫病毒E1代和E5代病毒的1日齡雛雞腦內(nèi)注射的致病指數(shù)（ICPI）與最小致死量病毒致死雞胚的平均時(shí)間（MDT）。雞或雞胚的樣本數(shù)均為10。

1.6 病毒EID50測(cè)定

參考文獻(xiàn)[9]的方法，對(duì)E1代和E5代病毒用滅菌生理鹽水作10倍梯度稀釋，各取0.1 mL 10-7、10-8、10-9 3個(gè)稀釋度病毒液尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚5個(gè)，棄去48 h前死亡的雞胚，隨時(shí)取出48～120 h死亡的雞胚，2～8 ℃冷卻后收獲尿囊液，同一稀釋度的尿囊液等量混合，分別測(cè)定紅細(xì)胞凝集價(jià)，至120 h取出所有活胚，逐個(gè)收獲尿囊液，分別測(cè)定紅細(xì)胞凝集價(jià)，紅細(xì)胞凝集價(jià)≥1 ∶ 128者判為感染，計(jì)算雞胚半數(shù)感染量（EID50）。

1.7 雞胚致病率測(cè)定

取E1代和E5代病毒，用滅菌生理鹽水稀釋100倍，按照每胚0.1 mL劑量尿囊腔接種10日齡SPF雞胚10個(gè)，置 37 ℃ 繼續(xù)孵育，記錄24～120 h內(nèi)死亡雞胚數(shù)和胎兒病變。

1.8 安全性測(cè)定

將20羽5日齡SPF雛雞隨機(jī)分為2組，每組10羽。其中一組用滴鼻法[8]接種0.05 mL 5倍濃縮的含毒尿囊液，另一組作空白對(duì)照。相同條件下隔離飼養(yǎng)10 d，每天記錄雞群情況。

1.9 免疫原性測(cè)定

取病毒含量不同的E1代和E5代病毒，經(jīng)0.1%甲醛滅活，按LaSota滅活苗質(zhì)量起草說明書方法制備成單苗，按 10 000 EID50、5 000 EID50、1 000 EID50、500 EID50的劑量免疫7日齡SPF雛雞，每個(gè)劑量10羽。28日齡時(shí)用100 000 EID50的F48E8強(qiáng)毒株攻擊，120 h內(nèi)記錄死亡率和疫苗的保護(hù)率。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)檢測(cè)結(jié)果

通過透射電鏡觀察復(fù)壯后的新城疫病毒粒子，結(jié)果顯示新城疫病毒粒子呈圓形或橢圓形，直徑100～500 nm，外周有囊膜，囊膜上有長(zhǎng)約10 nm的纖突（圖1）。

3 結(jié)論與討論

透射電鏡觀察結(jié)果顯示，病毒粒子具有明顯的新城疫病毒特征，說明病毒存在，并初步認(rèn)為毒株正確。引進(jìn)的LaSota株經(jīng)復(fù)壯后能在雞胚良好繁殖，在雞胚中連傳5代，雞胚尿囊液中血凝滴度均達(dá)29以上，說明毒株是穩(wěn)定的。從對(duì)該毒株系統(tǒng)鑒定的結(jié)果看，其紅細(xì)胞凝集價(jià)、1日齡雛雞腦內(nèi)注射的致病指數(shù)（ICPI）、最小致死量病毒致死雞胚的平均時(shí)間（MDT）、對(duì)雞胚毒力、安全性、免疫原性等都符合新城疫低毒力活疫苗株的要求。

上述系統(tǒng)的鑒定試驗(yàn)證明，引入的LaSota株經(jīng)過復(fù)壯，無(wú)論從形態(tài)還是從生化特性、免疫學(xué)特性方面均符合低毒力活疫苗株的要求，可以用作單聯(lián)苗或多聯(lián)苗的制備。

參考文獻(xiàn)：

[1]童光志. 動(dòng)物傳染病學(xué)[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005.

[2]梁淑珍，郭 兵，王海風(fēng). 中藥復(fù)方對(duì)雞新城疫疫苗免疫效果的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（2）：176-178.

[3]段志強(qiáng)，胡 嬌，胡增壘，等. 鵝源新城疫病毒M基因的原核表達(dá)及其多克隆抗體制備[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，28（1）：125-130.

[4]魏 寧，桂文龍，李巨銀，等. 新城疫疫苗及免疫程序?qū)Φ半u免疫效果的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（11）：232-234.

[5]于 洋，封 振，何孔旺，等. 新城疫病毒毒力分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013，29（2）：435-439.

[6]楊 煦，劉玉芬，劉懷然. 新城疫疫苗的研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2012，2（2）：325-327.

[7]Saif Y M. 禽病學(xué)[M]. 蘇敬良，高福，索勛主，譯. 11版. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005：711-733.

摘要：將凍存已久的新城疫病毒LaSota株在雞胚中連傳5代，獲得E1～E5代病毒，選取代表性的E1和E5病毒進(jìn)行病毒生物學(xué)與免疫原性鑒定。通過透射電鏡法觀察病毒粒子形態(tài)，利用血凝試驗(yàn)測(cè)定病毒的血凝價(jià)，借助1日齡雛雞腦內(nèi)注射的致病指數(shù)、最小致死量病毒致死雞胚的平均時(shí)間、雞胚致病率、雞胚半數(shù)感染量等指標(biāo)判定病毒的毒力或致病率，以雛雞免疫試驗(yàn)確定病毒的安全性與免疫原性。結(jié)果表明，引入的LaSota株經(jīng)過復(fù)壯，無(wú)論從形態(tài)還是從生化特性、免疫學(xué)特性方面，均符合低毒力活疫苗株的要求，可以用作單聯(lián)苗或多聯(lián)苗的制備。

關(guān)鍵詞：新城疫；LaSota株；復(fù)壯；鑒定

中圖分類號(hào)： S858.315.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）03-0164-02

新城疫（newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的禽類急性致死性傳染病，傳播速度快，長(zhǎng)期以來對(duì)我國(guó)的養(yǎng)禽業(yè)構(gòu)成了巨大威脅[1-5]。為了防治新城疫，除應(yīng)用嚴(yán)格的生物安全措施、防止新城疫病毒強(qiáng)毒進(jìn)入禽群外，疫苗免疫是必不可少的手段。在我國(guó)，使用低毒力活疫苗和油乳劑滅活苗已成為大多數(shù)禽場(chǎng)防制新城疫的常規(guī)手段[6]。新城疫病毒LaSota株是我國(guó)普遍使用的疫苗株，本試驗(yàn)復(fù)壯的毒株是1986年從英國(guó)中央獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)的由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所保存的凍干毒，作為疫苗毒種，筆者對(duì)其生物學(xué)和免疫學(xué)特性進(jìn)行了系統(tǒng)鑒定，現(xiàn)將有關(guān)試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

新城疫病毒LaSota株由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所提供；新城疫病毒標(biāo)準(zhǔn)株F48E8購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；SPF雞胚購(gòu)自北京梅里亞維通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司；SPF雞購(gòu)自山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院SPF雞場(chǎng)。

1.2 LaSota毒株的復(fù)壯與傳代

對(duì)保存的凍干毒以生理鹽水稀釋100倍后，接種 0.1 mL 于10日齡SPF雞胚，收集24 h后死亡雞胚尿囊液為E0代毒，后將E0代毒按同樣方法在10日齡SPF雞胚中續(xù)傳5次得到E1至E5代病毒。

1.3 形態(tài)學(xué)觀察

收集E5代病毒尿囊液，15 000 r/min離心60 min，取沉淀懸液滴于有支持膜的銅網(wǎng)上，10 min后用干凈濾紙從網(wǎng)邊吸去液體，另滴加3%磷鎢酸（pH值6.0）染色2～3 min，之后吸去液體立即進(jìn)行透射電鏡觀察。

1.4 病毒血凝試驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[7]的方法，用微量法在V型反應(yīng)板上測(cè)定 E0至E5 代病毒的血凝價(jià)。

1.5 病毒毒力測(cè)定

參考文獻(xiàn)[8]的方法，測(cè)定新城疫病毒E1代和E5代病毒的1日齡雛雞腦內(nèi)注射的致病指數(shù)（ICPI）與最小致死量病毒致死雞胚的平均時(shí)間（MDT）。雞或雞胚的樣本數(shù)均為10。

1.6 病毒EID50測(cè)定

參考文獻(xiàn)[9]的方法，對(duì)E1代和E5代病毒用滅菌生理鹽水作10倍梯度稀釋，各取0.1 mL 10-7、10-8、10-9 3個(gè)稀釋度病毒液尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚5個(gè)，棄去48 h前死亡的雞胚，隨時(shí)取出48～120 h死亡的雞胚，2～8 ℃冷卻后收獲尿囊液，同一稀釋度的尿囊液等量混合，分別測(cè)定紅細(xì)胞凝集價(jià)，至120 h取出所有活胚，逐個(gè)收獲尿囊液，分別測(cè)定紅細(xì)胞凝集價(jià)，紅細(xì)胞凝集價(jià)≥1 ∶ 128者判為感染，計(jì)算雞胚半數(shù)感染量（EID50）。

1.7 雞胚致病率測(cè)定

取E1代和E5代病毒，用滅菌生理鹽水稀釋100倍，按照每胚0.1 mL劑量尿囊腔接種10日齡SPF雞胚10個(gè)，置 37 ℃ 繼續(xù)孵育，記錄24～120 h內(nèi)死亡雞胚數(shù)和胎兒病變。

1.8 安全性測(cè)定

將20羽5日齡SPF雛雞隨機(jī)分為2組，每組10羽。其中一組用滴鼻法[8]接種0.05 mL 5倍濃縮的含毒尿囊液，另一組作空白對(duì)照。相同條件下隔離飼養(yǎng)10 d，每天記錄雞群情況。

1.9 免疫原性測(cè)定

取病毒含量不同的E1代和E5代病毒，經(jīng)0.1%甲醛滅活，按LaSota滅活苗質(zhì)量起草說明書方法制備成單苗，按 10 000 EID50、5 000 EID50、1 000 EID50、500 EID50的劑量免疫7日齡SPF雛雞，每個(gè)劑量10羽。28日齡時(shí)用100 000 EID50的F48E8強(qiáng)毒株攻擊，120 h內(nèi)記錄死亡率和疫苗的保護(hù)率。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)檢測(cè)結(jié)果

通過透射電鏡觀察復(fù)壯后的新城疫病毒粒子，結(jié)果顯示新城疫病毒粒子呈圓形或橢圓形，直徑100～500 nm，外周有囊膜，囊膜上有長(zhǎng)約10 nm的纖突（圖1）。

3 結(jié)論與討論

透射電鏡觀察結(jié)果顯示，病毒粒子具有明顯的新城疫病毒特征，說明病毒存在，并初步認(rèn)為毒株正確。引進(jìn)的LaSota株經(jīng)復(fù)壯后能在雞胚良好繁殖，在雞胚中連傳5代，雞胚尿囊液中血凝滴度均達(dá)29以上，說明毒株是穩(wěn)定的。從對(duì)該毒株系統(tǒng)鑒定的結(jié)果看，其紅細(xì)胞凝集價(jià)、1日齡雛雞腦內(nèi)注射的致病指數(shù)（ICPI）、最小致死量病毒致死雞胚的平均時(shí)間（MDT）、對(duì)雞胚毒力、安全性、免疫原性等都符合新城疫低毒力活疫苗株的要求。

上述系統(tǒng)的鑒定試驗(yàn)證明，引入的LaSota株經(jīng)過復(fù)壯，無(wú)論從形態(tài)還是從生化特性、免疫學(xué)特性方面均符合低毒力活疫苗株的要求，可以用作單聯(lián)苗或多聯(lián)苗的制備。

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