劉家海

（寧陵縣食品藥品檢驗所，河南 商丘 476000）

反高效液色譜法測定通絡(luò)逐瘀丸中芍藥苷的含量

劉家海

（寧陵縣食品藥品檢驗所，河南 商丘 476000）

目的建立通絡(luò)逐瘀丸的質(zhì)量控制標準。方法采用反高效液相色譜法對通絡(luò)逐瘀丸中芍藥苷的含量進行測定。結(jié)果通絡(luò)逐瘀丸中芍藥苷的含量在0.3082～6.164 μg的范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，r=0.9999，芍藥苷的回收率為99.82%，RSD為0.79%。結(jié)論該方法操作易行，穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好，可以用于通絡(luò)逐瘀丸的質(zhì)量控制。

通絡(luò)逐瘀丸；芍藥苷；反高效液相色譜法

通絡(luò)逐瘀丸是經(jīng)批準生產(chǎn)的醫(yī)院中藥制劑[1]，處方由赤芍、赤芍、柴胡、、枳殼、桔梗、桃仁、紅花、鹽補骨脂、等十四味藥組成，具有活血化瘀，清障除滯，補腎通胞的功效。主要用于因盆腔炎癥引起的輸卵管阻塞性不孕癥，月經(jīng)不調(diào)，色暗有塊等癥狀，具有很好的療效。雖然療效很顯著，但是原來的質(zhì)量控制標準中只有薄層色譜鑒別的鑒別和一般的檢查項目，是不能很好地控制通絡(luò)逐瘀丸的質(zhì)量。為了進一步提高標準，保證制劑的穩(wěn)定可靠，筆者采用高效液相色譜法對制劑中主要藥味之一赤芍中的芍藥苷的含量進行了測定。

1 儀器與試藥

Agilent1260高效液相色譜儀；反相色譜柱：Agilent-C18（5 μm，4.6 mm×150 mm），MSA225S-000-DU電子分析天平，對照品芍藥苷（批號：110736-201035，來源：中國藥品生物制品檢定所），通絡(luò)逐瘀丸為商丘市醫(yī)院提供（批號為：140201，140223，140301），缺位陰性自行配制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件。流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86），檢測波長為230 nm，柱溫：25 ℃，流速為1.0 mL/min，進樣量10 μL。

2.2 對照品溶液的制備：精密稱取，對照品芍藥苷15.41 mg，置50 mL量瓶中，加稀乙醇使溶解，稀釋至刻度，搖勻，過濾備用。

2.3 供試品溶液的制備[3]：取一定量的供試品，混勻，研細，取1 g，精密稱定，置50 mL錐形瓶中，加稀乙醇50 mL，超聲提取30 min，取續(xù)濾液25 mL，至量瓶中，并加稀乙醇至刻度，搖勻，過濾備用。

2.4 陰性對照品溶液的制備：除赤芍外，其他各藥按通絡(luò)逐瘀丸的處方比例量投料，按照通絡(luò)逐瘀丸的制備工藝制備成陰性對照，同供試品的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

2.5.1 線性關(guān)系、范圍：取對照品（30.82 μg/mL）的濃度，分別取1.0、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0 μL進樣，記錄芍藥苷峰面積積分值，以芍藥苷峰面積的積分值對芍藥苷的進樣量進行線性回歸，y=94.803x+2.865，r=0.9999。結(jié)果表明芍藥苷的線性關(guān)系良好，芍藥苷的線性范圍為：0.3082～6.164 μg。

圖1 對照品（A）；樣品（B）；陰性對照（C）

2.5.2 精密度試驗：取上述配制的對照品溶液，重復(fù)平行，進樣6次，測定芍藥苷的峰面積積分值峰面積。結(jié)果，芍藥苷的峰面積積分值的RSD=0.47%，表明精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗：取已知含量的同一批樣品，稱取6份，同供試品溶液的制備方法制備成供試品溶液，測定芍藥苷的峰面積積分值。結(jié)果，平均含量為 0.2107毫克/粒，RSD=0.85%，表明重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗：取同一份樣品制備成供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、12 h進樣，測定，芍藥苷的峰面積積分值RSD=0.79% ，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5 加樣回收率試驗：取樣品9份，約0.25 g，稱量好的樣品中分別精密加入3個濃度梯度的芍藥苷對照品溶液，照供試品溶液的制備方法制備成樣品溶液，測定芍藥苷峰面積的積分值，計算芍藥苷的含量，計算該制劑中的芍藥苷的回收率。結(jié)果見表1。

表1 通絡(luò)逐瘀丸中芍藥苷的回收率實驗結(jié)果

3 樣品含量測定

按通絡(luò)逐瘀丸樣品處理方法，并按照上述芍藥苷含量測定的色譜條件，測定3批通絡(luò)逐瘀丸樣品中芍藥苷含量，3批通絡(luò)逐瘀丸批號分別為140201，140223，140301，測定的芍藥苷的含量分別為3.0027、3.0114、3.0471 mg/g，3批通絡(luò)逐瘀丸樣品中芍藥苷含量的相對標準偏差（RSD）為0.78%，說明該方法測定通絡(luò)逐瘀丸中芍藥苷的含量重復(fù)性較好。

4 結(jié) 論

在通絡(luò)逐瘀丸供試品制備的過程中，處方中其他的藥材的存在對赤芍中芍藥苷的提取是有影響的[3]，我們考察了用不同提取方法[4-6]，設(shè)計了超聲與回流時間梯度，結(jié)果顯示回流提取出的雜質(zhì)較多，超聲效果較好，所以對通絡(luò)逐瘀丸的供試品的處理方法為稀乙醇超聲處理30 min，和中國藥典白芍項下芍藥苷的含量測定的條件一致。

通絡(luò)逐瘀丸是醫(yī)院制劑，活血化瘀，清障除滯，補腎通胞的功效非常顯著，主要用于因盆腔炎癥引起的輸卵管阻塞性不孕癥，月經(jīng)不調(diào)，色暗有塊等癥狀的治療，有非常好的療效，但是由于原來沒有具體的質(zhì)量控制標準，我們采用反高效液相色譜法測定了該制劑中的芍藥苷含量，因為赤芍是通絡(luò)逐瘀丸的主藥之一，且該方法穩(wěn)定可靠，操作簡便，專屬性較強，可以作為通絡(luò)逐瘀丸制劑的質(zhì)量控制標準的參考。

[1] 河南省醫(yī)療機構(gòu)制劑標準[S].豫藥制字:Z04140011.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:96.

[3] 凌明,馬安宇. HPLC測定胃腸合劑中芍藥苷和黃芩苷的含量[J].中成藥,2008,30(9):1111-1113.

[4] 陳曉燕,李順祥.HPLC法測定阿歸養(yǎng)血糖漿中芍藥苷含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報,2009,15(3):81-83.

[5] 馬連英,于秀華,李長惠.高效液相色譜法測定血府逐瘀口服液中阿魏酸含量[J].藥物鑒定,2006,15(16):28.

[6] 張建業(yè),馮向東.HPLC法同時測定八珍益母丸中芍藥苷和甘草酸銨的含量[J].中國藥師2011,14(7):992.

R927.2

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1671-8194（2014）34-0062-02