傅規(guī)玉 譚德展 禹 菡

（1.湖南飛力格科技有限公司，湖南邵陽 422000；2.邵陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程系，湖南邵陽 422000）

湖南飛力格科技有限公司生產(chǎn)的“中益健長素”（其主要成份為：多株益生菌，特種名貴中草藥，特殊保生長因子等）能夠起到激活機(jī)體免疫力的作用，能刺激動物產(chǎn)生干擾素，提高免疫球蛋白濃度和巨噬細(xì)胞的活性，通過非特異性免疫調(diào)節(jié)因子等來激發(fā)機(jī)體免疫力的增強(qiáng)。

豬圓環(huán)病毒感染是由豬圓環(huán)病毒（PCV2）感染相關(guān)的以免疫抑制為特征的一類病毒性傳染病，主要侵害豬體的免疫器官，減低機(jī)體免疫力，導(dǎo)致高度免疫抑制性，給豬場造成很大經(jīng)濟(jì)損失[1]。為探討中益健長素能否緩解PCV2對豬瘟疫苗免疫效果的影響特進(jìn)行了本試驗(yàn)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動物 30日齡30頭來自湖南長虹養(yǎng)殖場圓環(huán)病毒陽性豬場，實(shí)驗(yàn)前對實(shí)驗(yàn)豬進(jìn)行CSFV和PCV2病原學(xué)和抗體檢測，CSF的病原學(xué)檢測為陰性，血清學(xué)檢測有母源抗體存在，PCV2的病原學(xué)檢測和血清抗體檢測均為陽性。1.1.2 疫苗 政府采購的專用豬瘟活疫苗（脾淋源），以下簡稱脾淋苗，生產(chǎn)廠家：哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，批號200847。主要成分和含量：豬瘟兔化弱毒株接種家兔，收獲感染家兔的脾臟及淋巴結(jié)（簡稱脾淋），每ml脾淋苗不少于組織毒0.01 g。

1.1.3 試驗(yàn)儀器及試劑 醫(yī)用注射器；離心機(jī)；96孔110 V型醫(yī)用血凝板；與血凝板大小相同的玻板；微量移液器（20～200 μl）；取液塑料咀；微量振蕩器；恒溫箱；豬瘟血凝抗原（批號070826，效價(jià)1:1024）；豬瘟陰性對照血清（批號070529）；豬瘟陽性對照血清（批號070622）；稀釋液（批號070627）。以上試劑均為中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組及處理

30頭豬隨機(jī)分為3組，實(shí)驗(yàn)組1飼料中加0.1%中益健長素飼喂40 d，實(shí)驗(yàn)組2飼料中加0.15%中益健長素飼喂40 d，對照組不飼喂中益健長素。分組30 d后注射豬瘟脾淋苗，免疫后定期采血檢測豬瘟抗體滴度。

表1 實(shí)驗(yàn)分組及處理

1.2.2 血樣采集和處理 采用前腔靜脈采血，收集3組實(shí)驗(yàn)動物豬瘟疫苗首免前、首免后10 d、二免后10 d的血清進(jìn)行豬瘟抗體檢測。

1.2.3 抗體滴度的測定 按照《動物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)》提供的方法進(jìn)行豬瘟抗體正向間接血凝試驗(yàn)。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定 先觀察陰性血清對照孔和稀釋液對照孔，紅血球應(yīng)全部沉入孔底，無凝集現(xiàn)象（-）或呈（+）的輕度凝集為合格；陽性血清對照應(yīng)呈（+++）凝集為合格。在以上3孔對照合格的前提下，觀察待檢血清各孔的凝集程度，以呈“++”凝集的待檢血清最大稀釋度為其血凝效價(jià)（血凝價(jià)）。血清的血凝價(jià)達(dá)到1:16為免疫合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 接種前3組實(shí)驗(yàn)動物豬瘟抗體水平滴度

表2 接種前3組實(shí)驗(yàn)動物豬瘟抗體水平滴度

由表2可知：接種前，3組實(shí)驗(yàn)動物豬瘟母源抗體效價(jià)基本相

同，3組的豬瘟抗體陽性率都為0。

2.2 首免后10 d 3組實(shí)驗(yàn)動物豬瘟抗體水平滴度

表3 首免后10 d 3組實(shí)驗(yàn)動物豬瘟抗體水平滴度

由表3可知道，首免10 d后組實(shí)驗(yàn)組1陽轉(zhuǎn)率為20%，實(shí)驗(yàn)組2陽轉(zhuǎn)率為30%，對照組1陽轉(zhuǎn)率為0。實(shí)驗(yàn)組陽轉(zhuǎn)率與對照組陽轉(zhuǎn)率相比提高了25%，達(dá)到顯著水平（P＜0.5）。實(shí)驗(yàn)組1的陽轉(zhuǎn)率低于實(shí)驗(yàn)組2。

2.3 再免后10 d 3組實(shí)驗(yàn)動物豬瘟抗體水平滴度

由表4可知道，首免10 d后組實(shí)驗(yàn)組1陽轉(zhuǎn)率為90%，實(shí)驗(yàn)組2陽轉(zhuǎn)率為90%，對照組1陽轉(zhuǎn)率為40%，實(shí)驗(yàn)組陽轉(zhuǎn)率與對照組陽轉(zhuǎn)率相比提高了50%，達(dá)到顯著水平（P＜0.50）。實(shí)驗(yàn)組1的陽轉(zhuǎn)率等于實(shí)驗(yàn)組2，而且抗體滴度水平相差不大。

表4 再免后10 d 3組實(shí)驗(yàn)動物豬瘟抗體水平滴度

3 討論

圓環(huán)病毒對豬瘟疫苗免疫力有一定影響，有實(shí)驗(yàn)也證明PCV2感染會降低豬瘟疫苗的免疫效力，而“中益健長素”主要成分是：多株益生菌、特種名貴中草藥及特殊保生長因子。益生菌主要是芽孢桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌等，Vesely和陳延柞認(rèn)為嗜酸性乳酸桿菌的作用是刺激免疫系統(tǒng)，特別是巨嗜細(xì)胞NK細(xì)胞和B細(xì)胞。劉克琳和Inooka用蠟樣芽孢桿菌喂肉雞，對1、3、6周齡的中樞和外周免疫器官進(jìn)行測量，結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組免疫器官較對照組生長迅速和成熟快；王立生等研究表明，雙歧桿菌具有免疫賦活作用，能激活免疫系統(tǒng)中的巨嗜細(xì)胞NK細(xì)胞和B細(xì)胞。醫(yī)學(xué)研究表面，補(bǔ)益類中草藥多數(shù)具有免疫調(diào)節(jié)機(jī)能。杜改梅研究表明，應(yīng)用中草藥添加劑實(shí)驗(yàn)組豬瘟抗體水平顯著高于對照組。從理論上分析，“中益健長素”能夠激活機(jī)體免疫能力，解除圓環(huán)病毒免疫抑制是可行的。

本研究發(fā)現(xiàn)，PCV2陽性豬在免疫接種前實(shí)驗(yàn)組和對照組抗體滴度基本相同，無免疫保護(hù)作用；首免10 d后，實(shí)驗(yàn)組陽轉(zhuǎn)率顯著高于對照組，而且實(shí)驗(yàn)組1陽轉(zhuǎn)率低于實(shí)驗(yàn)組2，說明短期內(nèi)中益中益健長素的用量多免疫效果更好。二免后，實(shí)驗(yàn)組陽轉(zhuǎn)率顯著高于對照組，實(shí)驗(yàn)組1的陽轉(zhuǎn)率等于實(shí)驗(yàn)組2，而且抗體滴度水平相差不大，說明長時(shí)間使用，1%的中益中益健長素的用量已完全能達(dá)到提高豬免疫功能、緩解圓環(huán)病毒的免疫抑制，顯示中益健長素能作為免疫增強(qiáng)劑，提高感染了PCV2處于免疫抑制的豬接種疫苗后的免疫效果。

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