貝雪艷　李治國(guó)

【摘要】大腸癌是臨床最常見的高發(fā)腫瘤之一。目前治療仍以手術(shù)切除為主，但單純行根治性手術(shù)存在高復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，影響患者后期生存。術(shù)后輔助化療可以降低大腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)及病死率。奧沙利鉑（oxaliplatin）作為輔助化療方案中的主要藥物之一，其療效已經(jīng)得到了認(rèn)可。但仍有很大一部分患者因復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移而死亡，其原因可能是患者獲得性或先天性的耐藥所致。

【關(guān)鍵詞】Ercc1；大腸癌；耐藥；蛋白；關(guān)系

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.04.111文章編號(hào)：1004-7484（2014）-04-1906-01大腸癌是臨床最常見的高發(fā)腫瘤之一。目前治療仍以手術(shù)切除為主，但單純行根治性手術(shù)存在高復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，影響患者后期生存。術(shù)后輔助化療可以降低大腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)及病死率。奧沙利鉑（oxaliplatin）作為輔助化療方案中的主要藥物之一，其療效已經(jīng)得到了認(rèn)可。但仍有很大一部分患者因復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移而死亡，其原因可能是患者獲得性或先天性的耐藥所致。研究認(rèn)為核酸切除修復(fù)（nucleotide excision repair，NER）是患者產(chǎn)生鉑類耐藥的重要機(jī)制之一，切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因l（excision repair cross-complementingl，ERcc1）是NER途徑中的關(guān)鍵基因。為此，我們通過研究探討了大腸癌組織ERCCI表達(dá)及其與術(shù)后奧沙利鉑治療療效及預(yù)后的關(guān)系。1資料與方法

1.1材料收集人民醫(yī)院普外科手術(shù)切除的大腸癌標(biāo)本共50例，均有完整的臨床資料和明確的病理診斷；同期正常大腸切緣粘膜組織（簡(jiǎn)稱：正常大腸組織）40例。50例大腸癌病人中，男性36例，女性14例；病人年齡24-82歲，平均年齡58.5歲；大體分型：隆起型16例，潰瘍型29例，其它5例；組織學(xué)分級(jí)：高分化10例，中分化33例，低分化7例；腫瘤部位：直腸28例，結(jié)腸22例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有28例，無22例；r1NM分期（AJCC腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn)，第六版）：I期7例，II期16例，III期22例，IV期5例。全部病例術(shù)前均未接受過化療和放療。同期正常大腸切緣粘膜組織40例中男性22例，女性18例，病人年齡26-78歲，平均年齡61歲。所有組織均用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋。

1.2實(shí)驗(yàn)方法Erccl具體步驟如下：①4um石蠟切片3張常規(guī)脫蠟及水化（其中一張HE染色用）。②PBS緩沖液沖洗2次，每次3分鐘。③枸椽酸高壓修復(fù)3分鐘。④置室溫10分鐘。⑤PBS緩沖液沖洗2次，每次3分鐘。⑥3%H2O2室溫孵育10分鐘。⑦PBS緩沖液沖洗2次，每次3分鐘。⑧加一抗ERCCI（1：70），4℃過夜。⑨PBS緩沖液沖洗2次，每次3分鐘。⑩滴加試劑1，37℃放置20分鐘?！?1PBS緩沖液沖洗2次，每次3分鐘。○12滴加試劑2，37℃放置25分鐘。○13PBS緩沖液沖洗2次，每次3分鐘?！?4DAB顯色5分鐘。○15自來水充分沖洗，蘇木素復(fù)染，脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片。用PBS替代一抗作為空白對(duì)照。

1.3結(jié)果判定Erccl：實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)參照Fromowitz等綜合計(jì)分法，由陽性著色細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)與細(xì)胞著色強(qiáng)度二者結(jié)合起來計(jì)算.陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)為10個(gè)視野陽性細(xì)胞的平均數(shù)占這10個(gè)視野中細(xì)胞數(shù)的百分比：<5%計(jì)0分；5%-25%計(jì)1分；26%-50%計(jì)2分；51%-75%計(jì)3分；）75%計(jì)4分。細(xì)胞著色強(qiáng)度：不著色計(jì)0分；淡黃色計(jì)1分；棕黃色計(jì)2分；棕褐色計(jì)3分。二者積分相加：0-1分為陰性，2分為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，ERCCI表達(dá)與生存期的生存率采用Log-rank檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。總體生存分析的比較用Kapla-Meier生存曲線表示。影響大腸癌預(yù)后的多因素分析采用COX回歸分析。2結(jié)果

2.1ERCCI主要在腫瘤細(xì)胞核內(nèi)，呈棕黃色，顆粒狀；在某些腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)中也有表達(dá)，集中于核膜周圍。

2.2在研究的總體病例中，術(shù)后經(jīng)奧沙利鉑化療后的患者5年DFS為52.0%，5年OS為68%。其中ErccI陰性表達(dá)為49例，5年DFS為73.5%，5年05為81.6%（40/49）；陽性表達(dá)為51例，5年DFS為31.4%，5年OS為54.9%（28/51）；Kaplan-Meier生存曲線顯示陰性表達(dá)組DFS和OS優(yōu)于陽性組，Log—rank檢驗(yàn)兩者總體DFS（P=0.000）和OS（P=0.000）比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3討論