林連男等

摘要[目的]研究蛹蟲草與黃傘復(fù)合多糖的抗氧化活性。[方法]采用超聲提取法分別提取蛹蟲草多糖和黃傘多糖，并將二者按不同比例復(fù)合后，在不同濃度下進(jìn)行羥基自由基的清除試驗(yàn)。[結(jié)果]在一定的劑量配比下，蛹蟲草多糖與黃傘多糖表現(xiàn)出很好的復(fù)合效果，清除羥基自由基的能力較單獨(dú)多糖有明顯的提升。其中復(fù)合比例為2∶1，濃度為16 mg/ml時(shí)清除率較蛹蟲草多糖提高了79.82%，是黃傘多糖的3.6倍；通過方差分析得出，復(fù)合多糖與單獨(dú)多糖之間存在顯著差異（P<0.05），既表現(xiàn)出了較好的協(xié)同作用又呈現(xiàn)出很好的量效關(guān)系。[結(jié)論]復(fù)合后的多糖的活性提高，表現(xiàn)出了較好的清除羥基自由基清除效果。

關(guān)鍵詞蛹蟲草；黃傘；復(fù)合多糖；羥基自由基清除

中圖分類號(hào)S567文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）06-01662-03

Abstract[Objective] To study the antioxidant activity of Cordycepsmilitaris and Pholiota adipose polysaccharide. [Method] The Cordycepsmilitaris polysaccharide and Pholiota adipose polysaccharide were extracted with ultrasonic extraction， respectively. Both of them were recombined by different proportion. Then the clearance test of hydroxyl radical was conducted in different concentration. [Result] Under the certain proportion， the Cordycepsmilitaris polysaccharide and Pholiota adipose polysaccharide showed the great effect. Furthermore， the ability of removing hydroxyl radical improved apparently compared with the separate polysaccharide. The clearance rate of the condition of composite proportion 2∶1， concentration 16 mg/ml was increased by 79.82% compared with Cordycepsmilitaris polysaccharide， which was the 3.6 times as much as it. The compound polysaccharide and separate polysaccharide existed significant difference by analysis of variance. The compound polysaccharide manifested the better synergistic effect and doseeffect relationship. [Conclusion] The improvement of compound polysaccharides activity showed the good removal effect of removal of hydroxyl radicals.

Key wordsCordycepsmilitaris； Pholiota adipose； Compound polysaccharide； Removal of hydroxyl radicals

生命體代謝活動(dòng)的過程中，會(huì)或多或少的產(chǎn)生自由基，包括超氧陰離子自由基（O-2）、羥基自由基（OH-）和脂基自由基（ROO-）等，而過多的自由基對(duì)人體有害。它們能夠單獨(dú)存在，且具有很強(qiáng)的氧化能力，能引起鏈反應(yīng)，對(duì)機(jī)體造成傷害。其中，羥基自由基的氧化能力最高，幾乎能與細(xì)胞內(nèi)的一切物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，如核酸、氨基酸和糖等[1]。因此，越來越多的研究者對(duì)抗氧化作用機(jī)理進(jìn)行深入研究，以降低自由基對(duì)人體的傷害。真菌多糖的來源廣泛，易于獲得，對(duì)人體沒有毒副作用，藥用價(jià)值高，而且不斷有關(guān)于真菌多糖抗氧化活性方面的報(bào)道。真菌多糖具有提高生物體免疫力、抑制惡性細(xì)胞、抗衰老和提高機(jī)體對(duì)抗不良環(huán)境等功能[2]，并且對(duì)生物體的作用溫和，無毒副作用。研究表明，很多食藥用真菌的多糖能夠清除自由基、提高抗氧化酶活性并抑制過氧化活性，起到保護(hù)細(xì)胞膜、延緩衰老的作用[3]。研究表明，真菌多糖具有增強(qiáng)SODmRNA的表達(dá)，增加SOD的轉(zhuǎn)錄、抑制過氧化脂質(zhì)代謝物MDA含量的作用[4]。如黑紅芪多糖、南沙參多糖、五味子多糖和魔芋多糖等均有一定程度的抗氧化作用[5]。而且，幾種多糖按一定比例復(fù)配得到復(fù)合多糖，會(huì)較單一多糖獲得更好的抗氧化能力[6-7]。因此，筆者采用超聲提取法分別提取蛹蟲草多糖和黃傘多糖，并將二者按不同比例復(fù)合后，在不同濃度下進(jìn)行羥基自由基的清除試驗(yàn)，以期為復(fù)合多糖的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對(duì)象。蛹蟲草子實(shí)體，由東北林業(yè)大學(xué)森林保護(hù)實(shí)驗(yàn)室栽種；黃傘子實(shí)體，購(gòu)于超市。

1.1.2主要儀器。電子分析天平，購(gòu)自上海精科實(shí)業(yè)有限公司；高速離心機(jī)，購(gòu)自上海安亭科學(xué)儀器廠；高速萬能粉碎機(jī)，購(gòu)自北京格瑞德曼儀器設(shè)備有限公司；超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，購(gòu)自無錫沃信儀器有限公司；電熱恒溫水浴鍋，購(gòu)自上海普渡生化科技有限公司；電熱恒溫干燥箱，購(gòu)自長(zhǎng)春市彼特?？萍加邢薰荆恍D(zhuǎn)蒸發(fā)，購(gòu)自上海一科儀器設(shè)備；紫外分光光度計(jì)，購(gòu)自上海元析儀器有限公司。

1.1.3主要試劑。硫酸亞鐵、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、乙醇、氯仿、過氧化氫、鄰二氮菲和正丁醇等，均為國(guó)產(chǎn)分析純，市售。

1.2方法

1.2.1蛹蟲草多糖和黃傘多糖樣品的制備。分別取子實(shí)體樣品于烘箱中60 ℃烘干至恒重，采用超聲提取法分別提取蛹蟲草多糖和黃傘多糖[8]。依次取各多糖樣品分別稀釋至2、4、8、10、12和16 mg/ml的濃度梯度，進(jìn)行羥基自由基清除作用試驗(yàn)。

1.2.2蛹蟲草與黃傘復(fù)合多糖樣品的制備。取蛹蟲草多糖和黃傘多糖，按1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、2∶1、3∶1、4∶1的比例進(jìn)行復(fù)配，復(fù)合多糖混合均勻后將其依次配置成與未復(fù)配的多糖相同的濃度梯度，進(jìn)行羥基自由基清除能力測(cè)定[9]，并與未復(fù)合多糖的清除能力進(jìn)行比較分析。

濃度為16 mg/ml時(shí)，復(fù)合多糖羥基自由基清除率達(dá)到最高，較蛹蟲草多糖提高了79.82%，較黃傘多糖提高了25624%，且清除能力隨著濃度的增加不斷增強(qiáng)，表現(xiàn)出了很好的量效關(guān)系。說明蛹蟲草多糖與黃傘多糖通過一定的配比具有一定的協(xié)同作用，在適合的濃度下復(fù)合多糖的活性提高了，增強(qiáng)了對(duì)羥基自由基的清除能力。不同的復(fù)配比例與不同的濃度下量效關(guān)系不同，這表明只有在合適的復(fù)合比例與濃度下，多糖復(fù)合后才會(huì)表現(xiàn)出正協(xié)同的量效關(guān)系。3結(jié)論與討論

研究表明，灰樹花多糖和雞腿菇多糖復(fù)合后對(duì)OH-的清除率為62.4%，明顯高于單味多糖[12]。黃芪多糖∶黨參多糖（1∶1）、猴頭多糖∶香菇多糖（1∶3）、靈芝多糖∶枸杞多糖（1∶1）、枸杞多糖∶當(dāng)歸多糖（1∶1）都表現(xiàn)出了較單味多糖相比較高的OH-清除率[13]。試驗(yàn)結(jié)果表明，蛹蟲草與黃傘的復(fù)合多糖表現(xiàn)出了較單獨(dú)多糖更高的OH-清除率，蛹蟲草∶黃傘（2∶1）時(shí)OH-清除率為45.1%，比蛹蟲草多糖提高了7982%，復(fù)合多糖的活性明顯高于單獨(dú)多糖；這些研究表明，復(fù)合多糖的活性確實(shí)高于他們的單味多糖。

多糖的活性與多糖的結(jié)構(gòu)、物理性質(zhì)等密切相關(guān)。多糖的糖苷鍵類型、主連的構(gòu)型、支鏈的長(zhǎng)度和位置、官能團(tuán)、多糖的空間結(jié)構(gòu)及其物理性質(zhì)等都影響著多糖的活性。研究表明，多數(shù)具有生物活性的多糖是以β（1→3）糖苷鍵鏈接的主鏈或以α糖苷鍵連接的主鏈[14-16]。Yu等從蛹蟲草子實(shí)體中分離得到的多糖CPS3僅有一種單體葡萄糖構(gòu)成，糖苷鍵為α型[17]。聶永心從黃傘子實(shí)體中分離出的多糖PAP11是由αD吡喃葡萄糖殘基組成的葡聚糖，主鏈由1→4和1→6糖苷鍵連接[18]。試驗(yàn)研究了蛹蟲草與黃傘的復(fù)合多糖，2種多糖復(fù)合后具有活性作用的主鏈增加，因此復(fù)合多糖活性升高。

多糖的空間構(gòu)象對(duì)于多糖的活性發(fā)揮起著重要影響，一般認(rèn)為呈帶狀的多糖活性一般較低，而呈多股螺旋狀的多糖活性較高[19]。試驗(yàn)將2種不同來源的食藥用真菌多糖按不同比例復(fù)合后，在溶液中由于氫鍵作用使得不同來源多糖鏈之間產(chǎn)生相容性，引起柔性參數(shù)、分子平均尺寸、粘數(shù)等參數(shù)發(fā)生改變，從而導(dǎo)致多糖的物理特性，空間結(jié)構(gòu)等的變化，高分子鏈在相互混合的過程中帶狀長(zhǎng)鏈形成了高度的螺旋構(gòu)象，或者彼此連接成了交織的網(wǎng)絡(luò)，或者形成了空間上交錯(cuò)的網(wǎng)絡(luò)，從而切斷了過氧化的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，從而達(dá)到清除目的。

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