林方養(yǎng)　楊耀東　萬(wàn)婕等

摘要[目的]研究不同染色劑對(duì)SDSPAGE染色體系的影響。[方法]通過(guò)SDSPAGE染色體系中不同考馬斯亮藍(lán)染料、染色方法和染色時(shí)間的比較，探討適合油棕和椰子的最佳染色體系。[結(jié)果]改進(jìn)后的方法染色效果好，較好脫色，凝膠背景清晰，容易分析蛋白含量較低的條帶。染色時(shí)間短（2 h），條帶較少，一些低豐度的蛋白條帶未能清晰地顯示出來(lái)，適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間（6 h或過(guò)夜）效果較好。3種不同染料均能較好地對(duì)蛋白質(zhì)條帶染色，R350和R250相比G250效果稍好些，條帶著色深，蛋白質(zhì)含量低的細(xì)小條帶也能較好的染色。[結(jié)論]SDSPAGE是開(kāi)展蛋白質(zhì)組學(xué)研究的關(guān)鍵技術(shù)，建立簡(jiǎn)易、穩(wěn)定的染色方法具有重要意義。

關(guān)鍵詞SDSPAGE；考馬斯亮藍(lán)；染色

中圖分類號(hào)S188文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）09-02562-01

基金項(xiàng)目海南省自然科學(xué)基金（312039）。

作者簡(jiǎn)介林方養(yǎng)（1980-），男，海南文昌人，研究實(shí)習(xí)員，從事棕櫚科植物栽培研究。*通訊作者。

SDS-PAGE是開(kāi)展蛋白質(zhì)組學(xué)研究的關(guān)鍵技術(shù)，人們對(duì)其染色方法的研究也較多，其中較為成熟的方法有銀染法[1-2]和考馬斯亮藍(lán)法[3-8]。目前以考馬斯亮藍(lán)法染色最為常用，雖然其靈敏度不及銀染法，但操作簡(jiǎn)單，可滿足實(shí)驗(yàn)室常規(guī)染色的需要?？捡R斯亮藍(lán)法用到的染料主要有R250和G250，現(xiàn)在市場(chǎng)上又推出了一種新的染料R350，但價(jià)格較高。試驗(yàn)以這3種染料為基礎(chǔ)，通過(guò)比較不同染色方法和染色時(shí)間，探討這3種染料的優(yōu)缺點(diǎn)，以期為開(kāi)展蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供關(guān)鍵技術(shù)。

1 材料與方法

1.1材料 分別以油棕和椰子的幼嫩葉片作為提取蛋白質(zhì)的材料，采自中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院椰子研究所試驗(yàn)基地。

1.2蛋白質(zhì)的提取與定量 參考王旭初的方法[9]。

1.3蛋白質(zhì)SDSPAGE凝膠染色與脫 電泳結(jié)束后，將膠取下來(lái)切好，分別用不同的考馬斯亮藍(lán)染色，染色液配制方法和染色方法見(jiàn)表1和表2。染色-脫色步驟為：將切好的膠放入塑料盒中用蒸餾水（蓋滿凝膠即可）洗1～2遍，棄去蒸餾水，分別加入不同染色液置搖床上按相應(yīng)染色時(shí)間慢速振蕩染色，然后倒掉染色液，用蒸餾水洗1遍，最后加脫色液脫色。

2結(jié)果與分析

3 結(jié)論與討論