姬 濤 李懷平 王 朔

山東阿如拉藥物研究開(kāi)發(fā)有限公司，濟(jì)南 250101

紅龍鎮(zhèn)痛片為藏醫(yī)古驗(yàn)方，由龍骨、印度獐牙菜、紅花等十五味藥組成，具有醒腦開(kāi)竅、通絡(luò)止痛的功效，原方收載于云丹嘉措的《藏醫(yī)臨床札記》，一百多年的臨床應(yīng)用證明，其對(duì)偏頭痛、血管性頭痛效果良好。對(duì)該藥品原工藝中小部分藥材進(jìn)行提取，大部分藥材直接粉碎入藥，有效成分釋放緩慢，同時(shí)因?yàn)樵幉募?xì)粉入藥，也影響到衛(wèi)生學(xué)不合格的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)配方中藥材所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)，選用不同的溶劑進(jìn)行分開(kāi)提取，保證藥材中的藥效成分能夠被充分的提取出來(lái)。本研究將紅龍鎮(zhèn)痛片制劑前工藝分為以下3個(gè)部分。①醇提部分：印度獐牙菜、紅花、金腰草、川西小黃菊、馬尿泡、波棱瓜子6味藥；②水提部分：鐵棒錘、唐古特烏頭、珍珠母、龍骨、泉華、石花、短穗兔耳草7味藥；③粉碎部分：安息香、熊膽粉2味藥。本研究著重對(duì)醇提兩部分進(jìn)行了工藝研究，采用正交試驗(yàn)，優(yōu)選了最佳提取工藝。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1.1.1 儀器 KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；高效液相色譜儀：日立L-2100泵，日立L-2400檢測(cè)器；島津AUW220D電子天平；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州榮冠試驗(yàn)分析儀器廠）。

1.1.2 試藥 藥材由青海金珂藏藥股份有限公司提供；獐牙菜苦苷對(duì)照品（0785-200303）由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；水為純化水，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 方法

本品原標(biāo)準(zhǔn)中以獐牙菜苦苷含量為含量測(cè)定項(xiàng)，因此本試驗(yàn)以獐牙菜苦苷提取率作為指標(biāo)之一，進(jìn)行了醇提工藝的考察。

1.2.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.2%磷酸溶液（18∶82）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)235 nm；進(jìn)樣量 5 μl；流速 1 ml/min，柱溫室溫[1]。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取獐牙菜苦苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含50 μg的溶液，搖勻，即得。

1.2.3 藥材溶液的制備 取印度獐牙菜藥材細(xì)粉約0.5 g，精密稱定，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超聲處理40 min，取出，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.2.4 供試品溶液的制備 取實(shí)驗(yàn)制得樣品細(xì)粉約1.0 g，精密稱定，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超聲處理40 min，取出，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.2.5 醇濃度篩選 取印度獐牙菜20.1 g、紅花20.1 g、金腰草4.2 g、川西小黃菊20.1 g、馬尿泡4.05 g、波棱瓜子4.05 g，6味藥材混合共計(jì)72.6 g，共取4份，分別加入8倍量35%、55%、75%、95%乙醇回流提取2次，每次 2 h，濾過(guò)，濾液濃縮干燥，研細(xì)，按“1.2.4”項(xiàng)下制備供試品溶液，測(cè)定獐牙菜苦苷含量，計(jì)算提取率。

1.2.6 正交試驗(yàn) 為進(jìn)一步優(yōu)選醇提最佳工藝，選定加醇量、提取時(shí)間和提取次數(shù)作為考察的三個(gè)因素，各取三個(gè)水平，以獐牙菜苦苷提取率及干膏得率為指標(biāo)綜合評(píng)分。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

表1 醇提正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表

實(shí)驗(yàn)室中的提取時(shí)間是由提取次數(shù)確定，提取時(shí)間由前往后依次進(jìn)行。

稱取印度獐牙菜等6味藥材混合共計(jì)72.6 g，共取9份，按正交表順序進(jìn)行工藝試驗(yàn)，按“1.2.4”項(xiàng)下制備供試品溶液，測(cè)定獐牙菜苦苷含量，計(jì)算提取率。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度乙醇獐牙菜苦苷提取率的比較

不同濃度乙醇獐牙菜苦苷提取率的比較具體結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，醇濃度越高，獐牙菜苦苷提取率越高，而75%乙醇和95%乙醇的提取效果差異較小，為保證藥物中有效成分能最大限度的提取出來(lái)，同時(shí)也能夠節(jié)約生產(chǎn)成本，確定采用濃度為75%乙醇進(jìn)行提取。

表2 不同濃度乙醇獐牙菜苦苷提取率的比較

2.2 醇提正交試驗(yàn)

醇提正交試驗(yàn)直觀分析具體見(jiàn)表3，醇提正交試驗(yàn)方差分析具體見(jiàn)表4。由方差分析結(jié)果看，三個(gè)因素對(duì)提取效果影響的作用次序?yàn)镃>A>B，其中C因素對(duì)結(jié)果有顯著性影響，即提取次數(shù)影響最大，加醇量次之，提取時(shí)間影響最小，再結(jié)合直觀分析結(jié)果，確定醇提的最佳工藝參數(shù)為A2B1C3，即每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h。

表3 醇提正交試驗(yàn)直觀分析

表4 醇提正交試驗(yàn)方差分析

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

按配方配比稱取醇提藥材共計(jì)363 g，共取3份，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選得到的條件進(jìn)行醇提，測(cè)定獐牙菜苦苷提取率及干膏率，結(jié)果與正交試驗(yàn)基本一致，說(shuō)明提取工藝條件穩(wěn)定可行（表5）。

表5 醇提取驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

方中金腰草、川西小黃菊中含黃酮類等有效成分[2-3]，馬尿泡中含有生物堿類等成分[4]，波棱瓜子中含有木質(zhì)素及油脂類成分等[5]，這些成分在醇中都有很好的溶解度，同時(shí)也有報(bào)道，印度獐牙菜[6]、紅花[7]醇提效果也較好，因此本文將上述六味藥合并進(jìn)行醇提取，優(yōu)選最佳提取方案。

本實(shí)驗(yàn)參考原標(biāo)準(zhǔn)以獐牙菜苦苷含量為主要指標(biāo)，同時(shí)以干膏得率為次要指標(biāo)，兩者結(jié)合，綜合評(píng)價(jià)，可以比較客觀地反映各個(gè)因素及因素水平對(duì)提取工藝的影響。

本實(shí)驗(yàn)以最大程度提取藥材中有效成分為原則，通過(guò)系統(tǒng)的研究得到最佳工藝為藥材每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h，驗(yàn)證結(jié)果表明此工藝穩(wěn)定可行，適用于工業(yè)生產(chǎn)。

對(duì)本方原工藝中小部分藥材進(jìn)行提取，大部分藥材直接粉碎入藥，而傳統(tǒng)藏藥中很多成藥都以藥材粉末直接入藥，存在生產(chǎn)方式粗放、質(zhì)量較難控制等缺點(diǎn)[8]，因此，怎樣將現(xiàn)代技術(shù)引入藏藥的二次開(kāi)發(fā)中，成為目前制約藏藥發(fā)展的一個(gè)因素。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)的研究，希望能為其他藏藥品種的研發(fā)提供借鑒。

[1]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編經(jīng)絡(luò)肢體腦系分冊(cè)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：71.

[2]王玉平，楊云裳，楊林西，等.藏藥金腰草中黃酮誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制研究[J].實(shí)用癌癥雜志，2005，20（4）：374-376.

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[4]朱華勇，吳娟，黃帥，等.馬尿泡化學(xué)成分的研究[J].華西藥學(xué)雜志，2011，26（4）：305-307.

[5]徐冰.藏藥波棱瓜子化學(xué)成分研究[D].重慶：西南大學(xué)，2012.

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