劉澤干,黃良永,朱海濤,杜士明

(1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,武漢 430065;2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院藥學(xué)部,十堰 442000)

金茵清熱口服液穩(wěn)定性考察

劉澤干1,黃良永2,朱海濤2,杜士明2

(1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,武漢 430065;2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院藥學(xué)部,十堰 442000)

目的 考察金茵清熱口服液的穩(wěn)定性。方法依據(jù)《藥物制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則》,觀察金茵清熱口服液的性狀、pH、相對(duì)密度,采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定樣品中梔子苷、綠原酸、丹酚酸B在實(shí)驗(yàn)條件下的含量變化,色譜條件:AtlantisT3色譜柱(150 mm×4.6 mm,3 μm),流動(dòng)相A:0.05%磷酸溶液,流動(dòng)相B:乙腈,梯度洗脫,流速: 0.8 mL·min-1,柱溫:35℃,檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm。結(jié)果影響因素實(shí)驗(yàn)和加速實(shí)驗(yàn)中口服液的性狀、pH和相對(duì)密度均未發(fā)生明顯變化,而藥效成分梔子苷、綠原酸、丹酚酸B的平均含量隨存放時(shí)間的延長(zhǎng)出現(xiàn)不同程度的降低。結(jié)論光照和高溫對(duì)金茵清熱口服液的穩(wěn)定性有一定影響。

金茵清熱口服液;穩(wěn)定性;影響因素實(shí)驗(yàn);加速實(shí)驗(yàn)

金茵清熱口服液是湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院協(xié)同湖北中醫(yī)藥大學(xué)聯(lián)合研制的中藥復(fù)方制劑,處方由金銀花、茵陳、大黃、梔子、連翹、黃芪、丹參、甘草8味中藥組成。臨床主要用于治療感染、創(chuàng)傷、腸源性內(nèi)毒性移位和功能性病變引起的內(nèi)毒素血癥[1]。為考察金茵清熱口服液的穩(wěn)定性,筆者依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部《藥物制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則》,通過影響因素實(shí)驗(yàn)、加速實(shí)驗(yàn),觀察金茵清熱口服液的性狀、pH、相對(duì)密度、有效成分含量的變化評(píng)價(jià)制劑的穩(wěn)定性[2-3],以期為工藝改進(jìn)、質(zhì)量控制、包裝材料選擇、運(yùn)輸儲(chǔ)存條件的設(shè)定等后續(xù)研究提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 DIONEEX Ultimate3000高效液相色譜儀(美國(guó)戴安公司);變色龍色譜工作站(美國(guó)戴安公司);PHSJ-4A pH計(jì)(上海雷磁儀器公司);微電腦光照箱(型號(hào):SPX-2501-G,上海博訊實(shí)業(yè)有限公司);隔水式恒溫箱(型號(hào):PYX-DHS,上海醫(yī)療器械七廠); UP5200H超聲清洗機(jī)(熊貓集團(tuán)電子計(jì)量有限公司); AUW120D電子分析天平(十萬分之一,日本島津公司);比重瓶(上海崇明建設(shè)玻璃儀器廠)。

1.2 試藥 綠原酸對(duì)照品(批號(hào):110753-200413,含量>99.9%)、梔子苷對(duì)照品(批號(hào):10749-200714,含量>99.9%)、丹酚酸B對(duì)照品(批號(hào):11562-201110,含量:98.0%)均購于中國(guó)食品藥品檢定研究院。金茵清熱口服液(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院自制,規(guī)格:每支10 mL,批號(hào):20120220,20120425,20120820, 20120912)。試劑均為色譜純;水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定方法

2.1.1 性狀、pH、相對(duì)密度測(cè)定 參照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅶ,在自然光條件下白色背景中通過肉眼直接觀察口服液性狀;使用酸度計(jì)測(cè)量口服液pH;采用比重瓶法測(cè)定口服液的相對(duì)密度。

2.1.2 含量測(cè)定

2.1.2.1 色譜條件 AtlantisT3色譜柱(150 mm× 4.6 mm,3 μm),流動(dòng)相A:0.05%磷酸溶液,流動(dòng)相B:乙腈,按表1梯度洗脫,流速:0.8 mL·min-1,柱溫: 35℃,檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm,理論板數(shù)以梔子苷峰計(jì)應(yīng)不低于5 000。

表1 洗脫梯度Tab.1 Gradient elution %

2.1.2.2 樣品溶液的制備 對(duì)照品溶液的配制:取干燥至恒重的梔子苷對(duì)照品16.42 mg,綠原酸對(duì)照品12.80 mg,丹酚酸B對(duì)照品13.01 mg精密稱定,分別置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,得梔子苷貯備液1.642 mg·mL-1、綠原酸貯備液1.28 mg·mL-1、丹酚酸B貯備液1.301 mg·mL-1,再分別取3種對(duì)照品貯備溶液各1 mL,加甲醇稀釋至5 mL,即得混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液的配制:取金茵清熱口服液5支,混合均勻,精密量取2 mL,置50 mL量瓶,加甲醇至刻度,搖勻,取適量用0.2 μm孔徑濾膜過濾,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。

2.1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密量取混合對(duì)照品貯備液5.0,2.0,1.5,1.0,0.5,0.2,0.1 mL置于5 mL量瓶,加甲醇稀釋成含梔子苷328.4,131.36,98.52, 65.68,32.84,13.136,9.852 μg·mL-1;含綠原酸256, 102.4,76.8,51.2,25.6,10.24,7.68 μg·mL-1;含丹酚酸B 260.2,104.08,52.04,26.03,10.408, 7.806 μg·mL-1的系列對(duì)照品溶液,經(jīng)孔徑0.2 μm濾膜過濾,精密取20 μL,注入色譜儀檢測(cè),以對(duì)照品質(zhì)量(μg)為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,經(jīng)線性回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:Y梔子苷= 27.519 9X梔子苷-0.054 8,r=0.999 9,線性范圍0.197 1～6.568 μg;Y綠原酸=18.089 5X綠原酸-1.142 6,r=0.999 8,線性范圍0.153 6～5.120 0 μg;Y丹酚酸B= 12.613 4X丹酚酸B-1.752 1,r=0.999 7,線性范圍0.156 1～5.204 0 μg。

2.1.2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 取“2.1.2.3”項(xiàng)梔子苷對(duì)照品溶液(98.52 μg·mL-1)、綠原酸對(duì)照品溶液(76.8 μg·mL-1)、丹酚酸B對(duì)照品溶液(52.04 μg·mL-1)混合對(duì)照品溶液20 μL,在“2.1.2.1”項(xiàng)色譜條件下,連續(xù)進(jìn)樣5次,記錄3種成分的峰面積,并計(jì)算5個(gè)峰面積值的RSD。結(jié)果梔子苷峰面積的RSD為0.19%,綠原酸峰面積的RSD為0.23%,丹酚酸B峰面積的RSD為0.64%。表明色譜系統(tǒng)的重復(fù)性能夠滿足當(dāng)前分析的要求。

2.1.2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品(批號(hào): 20120425),按照“2.1.2.2”項(xiàng)方法,制備6份供試品溶液,按“2.1.2.1”色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定,以外標(biāo)法計(jì)算3種成分的含量。結(jié)果梔子苷平均含量為4.23 mg·mL-1,RSD為0.80%;綠原酸平均含量為3.47 mg·mL-1,RSD為0.97%;丹酚酸B平均含量為2.09 mg·mL-1,RSD為1.02%。表明該測(cè)定方法重復(fù)性較好。

2.1.2.6 加樣回收實(shí)驗(yàn) 精密量取6份已知含量的樣品(批號(hào):20120425)各2 mL,分別精密加入“2.1.2.2”項(xiàng)下3種成分對(duì)照品貯備液各2 mL;按“2.1.2.1”色譜條件測(cè)定樣品中梔子苷、綠原酸、丹酚酸B含量,計(jì)算加樣回收率。結(jié)果梔子苷平均回收率98.43%,RSD為0.10%;綠原酸的平均回收率為97.72%,RSD為1.12%;丹酚酸的平均回收率為97.08%,RSD為1.38%。

2.1.2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液,分別于配制后0,2,4,8,10,24 h進(jìn)樣分析,測(cè)定峰面積。結(jié)果梔子苷、綠原酸、丹酚酸B峰面積的RSD分別為1.13%, 0.89%,1.34%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.2.8 含量測(cè)定 取各實(shí)驗(yàn)條件下的供試品適量,按“2.1.2.2”項(xiàng),制成供試品溶液,在“2.1.2.1”項(xiàng)色譜條件下,取對(duì)照品混合溶液和樣品溶液各20 μL,進(jìn)樣,測(cè)定3種成分的峰面積,以外標(biāo)法計(jì)算梔子苷、綠原酸、丹酚酸B的含量。

2.2 影響因素實(shí)驗(yàn)

2.2.1 影響因素實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1.1 高溫實(shí)驗(yàn) 取供試品(批號(hào):20120220)20支,除去包裝紙,(60±2)℃恒溫箱放置10 d,分別于第0,第5,第10天各取5支,按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目(性狀、相對(duì)密度、pH、含量)進(jìn)行檢測(cè)。

2.2.1.2 強(qiáng)光實(shí)驗(yàn) 取供試品(批號(hào):20120220)20支,除去包裝紙,放置于光照箱內(nèi),于照度為4 500 Lx(勒克斯Luminous flux)的條件下放置10 d,分別于第0,第5,第10天各取5支,按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目(性狀、相對(duì)密度、pH、含量)進(jìn)行檢測(cè)。

2.2.2 影響因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果 在強(qiáng)光和高溫的影響下,金茵清熱口服液性狀、pH、相對(duì)密度未發(fā)生明顯變化,而有效成分(綠原酸、梔子苷、丹酚酸B)的含量隨存放時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯降低,且出現(xiàn)新的色譜峰。見圖1和表2。

2.3 加速實(shí)驗(yàn)

2.3.1 加速實(shí)驗(yàn)方法 供試品3批(批號(hào):20120425, 20120820,20120912)不拆除包裝,放入溫度(40± 2)℃、相對(duì)濕度75%的恒溫箱中,分別于0,1,2,3,6個(gè)月取樣,按穩(wěn)定性考察項(xiàng)目(性狀、相對(duì)密度、pH、含量)進(jìn)行檢測(cè)。

2.3.2 加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果 在(40±2)℃、相對(duì)濕度75%條件下放置6個(gè)月,3批口服液的性狀、pH、相對(duì)密度均未發(fā)生明顯變化,而有效成分(綠原酸、梔子苷、丹酚酸B)的含量隨存放時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯降低,且3批口服液顯示相同趨勢(shì)的變化。見表3。

3 討論

1.綠原酸;2.梔子苷;3.丹酚酸B圖1 對(duì)照品和3種方法處理供試品的HPLC色譜圖1.chlorogenic acid;2.geniposide;3.salvia acid BFig.1 HPLC Chromatogram map of reference and three kinds of samples

表2 影響因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of influence factor experiment

表3 加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.3 Results of accelerating experiment

金茵清熱口服液采用經(jīng)典的水提醇沉工藝制備,可保留較全的有效成分,口服液性狀棕色澄清,并通過梔子苷、綠原酸、丹酚酸B的含量以控制口服液的質(zhì)量[3]?？诜褐苿┻M(jìn)行影響因素實(shí)驗(yàn)和加速實(shí)驗(yàn)的目的是考察制劑處方與生產(chǎn)工藝及包裝條件的合理性。參照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部《藥物制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則》,影響因素實(shí)驗(yàn)中應(yīng)考察強(qiáng)光、高溫和高濕對(duì)制劑穩(wěn)定性的影響,因本制劑為口服液,含水量較大,因此無需考察高濕的影響。

通過影響因素實(shí)驗(yàn)和加速實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)口服液性狀未發(fā)生變化,pH保持在4.10～4.20,相對(duì)密度在1.06～1.08,說明高溫、強(qiáng)光對(duì)本口服液的性狀、pH、相對(duì)密度影響不明顯;但在影響因素實(shí)驗(yàn)和加速實(shí)驗(yàn)中綠原酸、梔子苷、丹酚酸B的含量都有不同程度下降,上述3種成分在強(qiáng)光和高溫條件下容易分解,其中高溫對(duì)綠原酸和丹酚酸B的影響較大[4-5]。在一定實(shí)驗(yàn)溫度下,3種有效成分含量隨著存放時(shí)間延長(zhǎng)降低。另外,在相同的實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)上溫度越高有效含量下降速度越快,在加速實(shí)驗(yàn)條件下第1個(gè)月,口服液中綠原酸、梔子苷、丹酚酸B含量下降接近30%,說明高溫和強(qiáng)光是影響本品穩(wěn)定性的主要因素,因此在提取、濃縮滅菌等生產(chǎn)環(huán)節(jié)需注意對(duì)溫度和時(shí)間的控制,以及運(yùn)輸、存放時(shí)需注意強(qiáng)光和高溫對(duì)本品的穩(wěn)定性影響。結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本課題組擬采用深棕色的玻璃瓶裝放口服液,存放陰涼處;通過進(jìn)一步在常溫下進(jìn)行長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該制劑的穩(wěn)定性,并作另文報(bào)道。

研究中發(fā)現(xiàn)強(qiáng)光和高溫影響綠原酸和丹酚酸B的穩(wěn)定性,另文獻(xiàn)報(bào)道,綠原酸易降解為奎寧酸和咖啡酸[6],丹酚酸B易降解為丹參素和咖啡酸[7];金茵清熱口服液中除綠原酸、梔子苷、丹酚酸B外,還有其他成分對(duì)本制劑的療效起著關(guān)鍵作用,這些成分在強(qiáng)光和高溫的條件下也可能降解,這些降解成分對(duì)本制劑的療效及毒理影響還需進(jìn)一步研究。

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DOI 10.3870/yydb.2014.11.028

Stability of Jinyin Qingre Oral Liquid

LIU Ze-gan1,HUANG Liang-yong2,ZHU Hai-tao2,DU Shi-ming2
(1.College of Pharmacy,Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430065,China;2.Department of Pharmacy,Taihe Hospital Affiliated with Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China)

ObjectiveTo investigate the stability ofjinyin qingreoral liquid.MethodsAccording to the stability test guidelines for pharmaceutical preparations,the appearance,pH and relative density ofjinyin qingreoral liquid were detected, the contents of geniposide,chlorogenic acid and salvia acid B were determined by HPLC.The chromatographic conditions were as follows:AtlantisT3 column(150 mm×4.6 mm,3 μm),mobile phase A:0.05%phosphoric acid,mobile phase B:acetonitrle, gradient elution at the flow rate of 0.8 mL·min-1,and column temperature at 35℃.The detection wavelength was set at 254 nm.ResultsThe appearance,pH,and relative density ofjinyin qingreoral liquid did not change significantly with the acceleration test,but the contents of geniposide,chlorogenic acid and salvia acid B decreased time dependently.ConclusionLight and high temperature could decrease the stability of thejinyin qingreoral liquid.

Jinyin qingreoral liquid;Stability;Stress test;Accelerated test

R286;R927.1

B

1004-0781(2014)11-1502-04

2013-09-05

2013-10-12

劉澤干(1987-),男,湖北鄂州人,在讀碩士,研究方向:藥物制劑新劑型開發(fā)及質(zhì)量控制。

杜士明(1964-),男,湖北十堰人,主任藥師,碩士生導(dǎo)師,博士,研究方向:醫(yī)院藥學(xué)。電話:0719-8801393,E-mail:dsmch@sina.com。