程治平，余斌，熊軍，劉正軍，陸京伯

(1.西藏自治區(qū)人民醫(yī)院骨科，西藏拉薩 850000；2.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院，廣東廣州 510515；3.海南省人民醫(yī)院，海南?？?570100)

·論著·

雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的作用研究

程治平1，余斌2，熊軍3，劉正軍2，陸京伯2

(1.西藏自治區(qū)人民醫(yī)院骨科，西藏拉薩 850000；2.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院，廣東廣州 510515；3.海南省人民醫(yī)院，海南?？?570100)

目的研究不同劑量雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)的治療效果。方法將4只10周齡雄性ApoE-/-小鼠作為模型組，4只10周齡雄性C57BL/6J小鼠作為對(duì)照組，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后處死，取主動(dòng)脈標(biāo)本做HE染色。另將10周齡雄性ApoE-/-小鼠32只作為實(shí)驗(yàn)組，按每天每千克體重給藥量隨機(jī)分為4組：50μg/(kg·d)、75 μg/(kg·d)組、100μg/(kg·d)、空白對(duì)照組，每組8只。10周齡雄性C57BL/ 6J小鼠8只作為陰性對(duì)照組。給藥3周后處死小鼠，取主動(dòng)脈標(biāo)本做HE染色；收集血清，測(cè)定IL-10、IL-12含量。結(jié)果(1)在11周齡時(shí)兩組主動(dòng)脈HE染色Roberts&Thompson方法評(píng)分分別為：模型組[(5.250±0.500)分]＞對(duì)照組[(0.500±0.577)分]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)經(jīng)不同濃度雷公藤內(nèi)酯醇處理3周后，各組主動(dòng)脈HE染色Roberts&Thompson方法評(píng)分分別為：空白對(duì)照組[(6.500±0.189)分]＞100μg/(kg·d)組[(4.625±0.183)分]＞50μg/(kg·d)組[(3.375±0.183)分]＞75μg/(kg·d)組[(1.375±0.183)分]＞陰性對(duì)照組[(0.000±0.000)分]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)75μg/(kg·d)組血清中IL-10濃度升高最明顯，與各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)；各組血清中IL-12濃度均較空白對(duì)照組降低，其中75μg/(kg·d)組降低最明顯，兩者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論(1)在11周齡時(shí)，ApoE-/-小鼠能形成AS模型。(2)不同濃度雷公藤內(nèi)酯醇處理3周后，ApoE-/-小鼠AS病變有不同程度緩解，其中75μg/(kg·d)濃度下效果最佳。(3)雷公藤內(nèi)酯醇能夠上調(diào)IL-10、下調(diào)IL-12的表達(dá)水平，抑制炎癥反應(yīng)，減輕粥樣斑塊的形成，此可能為免疫抑制劑抗動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制之一。

動(dòng)脈粥樣硬化；雷公藤內(nèi)酯醇；ApoE-/-小鼠；IL-10；IL-12

動(dòng)脈粥樣硬化是許多心血管疾病的發(fā)病基礎(chǔ)，嚴(yán)重危害人類健康。迄今為止，AS確切的病因和發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚。先后有許多學(xué)者提出了各種假說，包括脂質(zhì)浸潤(rùn)、平滑肌細(xì)胞(Smooth muscle cell，SMC)增殖、血栓源學(xué)說等，但都不能很好的解釋AS的發(fā)病機(jī)制。隨著研究不斷深入，我們逐漸發(fā)現(xiàn)AS的發(fā)展過程中始終伴隨有炎癥的基本特征。因此，Ross等[1]提出“AS是一種炎癥性疾病”的觀念，炎癥反應(yīng)始終與免疫過程相伴隨[2]。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞的活化與分化在動(dòng)脈粥樣硬化形成過程中至關(guān)重要[3-6]。DC作為功能最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞，能夠調(diào)節(jié)T細(xì)胞的活化與分化，在AS發(fā)生機(jī)制中意義重大[7]。我們?cè)谂R床工作中發(fā)現(xiàn)，雷公藤具有治療AS的功效，結(jié)合其主要活性成分——雷公藤內(nèi)酯醇可以抑制DC活性的特點(diǎn)[8-9]，我們推測(cè)雷公藤能夠抑制炎癥反應(yīng)而達(dá)到治療AS的效果，為AS的防治提供新線索。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料10周齡雄性C57BL/6J小鼠12只，20～30 g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；10周齡雄性ApoE-/-小鼠(C57BL/6J背景)36只，20～30 g，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。雷公藤內(nèi)酯醇、IL-10、IL-12 ELLISA試劑盒(廣州夢(mèng)怡美生物科技有限公司)。

1.2 模型的建立與分組將兩種品系小鼠予普通小鼠飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)抽取4只ApoE-/-小鼠作為模型組，4只C57BL/6J小鼠作為對(duì)照組，兩組小鼠均不予藥物干預(yù)，麻醉后處死，無菌條件下取出主動(dòng)脈，常規(guī)脫水，石蠟包埋并切片，蘇木素-伊紅(HE)染色。光鏡下觀察粥樣斑塊病變情況，Roberts &Thompson方法[10-11]評(píng)價(jià)兩組間差異。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組將剩余32只ApoE-/-小鼠作為實(shí)驗(yàn)組，隨機(jī)分均為4個(gè)亞組：空白對(duì)照組(每日腹腔注射等量二甲基亞砜溶液)、50μg/(kg·d)[按50μg/(kg·d)的量給予雷公藤內(nèi)酯醇，稀釋后腹腔注射，1次/d]、75μg/(kg.d)組[按75μg/(kg·d)的量給予雷公藤內(nèi)酯醇，稀釋后腹腔注射，1次/d]、100μg/(kg·d) [按100μg/kg.d的量給予雷公藤內(nèi)酯醇，稀釋后腹腔注射，每日1次]。剩余8只10周齡雄性C57BL/6J野生型小鼠作為陰性對(duì)照組(每日腹腔注射等量二甲基亞砜溶液)。所有小鼠均予普通飼料連續(xù)喂養(yǎng)3周后處死。

1.4 標(biāo)本檢測(cè)

1.4.1 主動(dòng)脈標(biāo)本蘇木素-伊紅(HE)染色小鼠麻醉后處死，取出主動(dòng)脈固定、石蠟包埋、切片、HE染色后制作成病理切片，光鏡下觀察仔細(xì)觀察各組間主動(dòng)脈內(nèi)膜厚度、纖維化程度、內(nèi)外彈力層厚度及完整性、單位面積內(nèi)泡沫細(xì)胞數(shù)量、鈣化情況及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況，參照Roberts&Thompson方法[10-11]對(duì)評(píng)價(jià)動(dòng)脈粥樣斑塊病變情況，評(píng)判雷公藤內(nèi)酯醇治療動(dòng)脈粥樣硬化的效果。

1.4.2 血清樣本收集及IL-10、IL-12的含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉下開胸心臟采血，肝素鈉抗凝，3 000 r/s離心30 min，抽吸上清液至4℃冰箱保存待檢測(cè)。血清中IL-10、IL-12的含量測(cè)定嚴(yán)格按照ELISA試劑盒附帶操作方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)使用SPSS16.0軟件，Roberts&Thompson方法評(píng)分結(jié)果為有序分類變量，依據(jù)實(shí)驗(yàn)分組情況使用倆獨(dú)立樣本Kruskal-Wallis檢驗(yàn)或者多個(gè)獨(dú)立樣本比較的Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，從總體上分析各組之間有無差別。經(jīng)Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)后，如果各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義則進(jìn)行組間多重比較的Nemenyi檢驗(yàn)。血清中IL-10、IL-12的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用One-way ANOVA進(jìn)行分析，多組均數(shù)多重比較方差齊性時(shí)采用Student-Newman-Keuls(SNK)法，方差不齊時(shí)采用Dunnett T3法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示。

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)脈粥樣硬化模型鑒定如圖1A所示，對(duì)照組即C57BL/6J小鼠組的主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，厚薄均勻，內(nèi)彈力纖維完整；主動(dòng)脈的中膜無增厚，外彈力纖維無增殖遷移，細(xì)胞形態(tài)為長(zhǎng)梭形、桿狀，排列規(guī)則，外膜結(jié)締組織無異常，可以看出病理切片未見動(dòng)脈粥樣硬化改變跡象。圖1B可見，模型組即ApoE-/-小鼠組主動(dòng)脈內(nèi)膜厚薄不一，可見增厚隆起，內(nèi)彈力板不連續(xù)；主動(dòng)脈的中膜明顯增厚，可見明顯的鈣化，平滑肌細(xì)胞增殖及泡沫化，外彈力板增殖增生明顯，細(xì)胞數(shù)目明顯增多，排列紊亂，內(nèi)部呈空泡狀，并向內(nèi)膜遷移。其病理變化為動(dòng)脈粥樣硬化表現(xiàn)[12]。適應(yīng)喂養(yǎng)1周后，兩組主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊病變情況的Roberts&Thompson方法評(píng)分分別為：模型組[(5.250±0.500)分]＞對(duì)照組[(0.500±0.577)分]。經(jīng)Kruskal-Walli秩和檢驗(yàn)，得出P=0.017，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 各組主動(dòng)脈壁組織學(xué)觀察結(jié)果(HE×200)

2.2 雷公藤內(nèi)酯醇治療后的療效評(píng)價(jià)經(jīng)不同濃度雷公藤內(nèi)酯醇治療3周后，各組主動(dòng)脈壁在光鏡下組織學(xué)觀察結(jié)果為顯示藥物治療組動(dòng)脈粥樣硬化病變均有不同程度緩解。如圖2所示，空白對(duì)照組病變最為嚴(yán)重，該組大部分病理切片HE染色能觀察到明顯的粥樣斑塊，75μg/(kg·d)組病變緩解最為明顯，主要病理變化表現(xiàn)為內(nèi)膜下細(xì)胞數(shù)目增加、排列紊亂，少有纖維斑塊等形成。各組主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊病變情況的Roberts&Thompson方法評(píng)分由高到低分別為：空白對(duì)照組[(6.500±0.189)分]＞100μg/(kg·d)組[(4.625±0.183分)]＞50μg/(kg·d)組[(3.375±0.183分)]＞75μg/(kg·d)組[(1.375±0.183)分]＞陰性對(duì)照組[(0.000±0.000)分]。經(jīng)Kruskal-Walli秩和檢驗(yàn)，得出P=0.000，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)行組間多重比較的Nemenyi檢驗(yàn)后顯示各組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

圖2 各組主動(dòng)脈壁組織學(xué)觀察結(jié)果(HE×400)

表1 各組主動(dòng)脈標(biāo)本組織學(xué)Roberts&Thompson方法評(píng)分結(jié)果（分，）

表1 各組主動(dòng)脈標(biāo)本組織學(xué)Roberts&Thompson方法評(píng)分結(jié)果（分，）

注：a需繼續(xù)進(jìn)行組間多重比較的Nemenyi檢驗(yàn)；b據(jù)Nemenyi檢驗(yàn)結(jié)果，各組別間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

?

2.3 各組血清中IL-10、IL-12水平的比較如表2所示，各組血清中IL-10表達(dá)情況的檢測(cè)結(jié)果為：75μg/(k·d)組＞100μg/(kg·d)組＞50μg/(kg·d)組＞空白對(duì)照組＞陰性對(duì)照組。模型組與陰性對(duì)照組比較，血清中IL-10濃度均明顯升高，其中75μg/(kg·d)組血清中IL-10濃度升高最明顯，各組間比較差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與此同時(shí)，IL-12表達(dá)情況由高到低排列為：空白對(duì)照組＞100μg/(kg·d)＞陰性對(duì)照組＞50μg/(kg·d)＞75μg/(kg·d)組。75μg/(kg·d)組血清中IL-12濃度降低最明顯，與各亞組間比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明在75μg/(kg·d)處理?xiàng)l件下，血清中IL-10上調(diào)和IL-12下調(diào)效果最為明顯。

表2 各組血清中IL-10含量的比較()

表2 各組血清中IL-10含量的比較()

注：a方差齊性檢驗(yàn)結(jié)果P＞0.05，需繼續(xù)使用兩兩之間均數(shù)比較的SNK法進(jìn)行分析；b根據(jù)SNK檢驗(yàn)結(jié)果，各組別間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

AS是一種炎癥性疾病的觀念已逐漸獲得認(rèn)同，T細(xì)胞的活化貫穿AS始終。大量的研究發(fā)現(xiàn)，DC作為功能最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞，其增殖、分化、遷移等與T細(xì)胞活化密切相關(guān)[3，13-15]。體外試驗(yàn)表明雷公藤內(nèi)酯醇能夠抑制T細(xì)胞的增生，誘導(dǎo)活化T細(xì)胞凋亡從而抑制T細(xì)胞免疫環(huán)節(jié)[9，16]，其具體機(jī)制目前尚不清楚。有研究證實(shí)，雷公藤內(nèi)酯醇可能是通過抑制DC免疫活性而調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫狀態(tài)[8]。

本實(shí)驗(yàn)首次嘗試以雷公藤內(nèi)酯醇防治動(dòng)脈粥樣硬化。在本實(shí)驗(yàn)中11周齡ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈出現(xiàn)了AS病灶，經(jīng)不同濃度雷公藤內(nèi)酯醇腹腔注射處理3周后，可見ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈的損傷程度較空白對(duì)照組均有不同程度緩解。75μg/(kg·d)組動(dòng)脈病變緩解最為明顯，而50μg/(kg·d)組、100μg/(kg·d)組病變程度緩解相對(duì)較少，但多數(shù)主動(dòng)脈內(nèi)膜基本完整，平滑肌細(xì)胞增殖及泡沫化較少。進(jìn)行組間多重比較的Nemenyi檢驗(yàn)后顯示各組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05)。

各組主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊病變情況的Roberts &Thompson方法評(píng)分結(jié)果提示雷公藤內(nèi)酯醇濃度從50μg/(kg·d)到75μg/(kg·d)升高的過程中，減輕主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊病變的能力增強(qiáng)，而在75μg/(kg·d)到100μg/(kg·d)的范圍內(nèi)，隨著雷公藤內(nèi)酯醇濃度的增高，防治主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊病變的能力下降，到達(dá)100μg/(kg·d)時(shí)，其主動(dòng)脈病變程度接近于空白對(duì)照組。若繼續(xù)增加雷公藤內(nèi)酯醇濃度可能不僅起不到治療的作用，反而會(huì)加重主動(dòng)脈損害。

IL-10由Th2細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是平衡Th1和Th2免疫反應(yīng)的一個(gè)重要的調(diào)節(jié)因子。研究顯示IL-10缺陷小鼠動(dòng)脈硬化管壁膠原蛋白含量減少及T細(xì)胞的聚集現(xiàn)象[17]。在有關(guān)IL10-/-ApoE-/-動(dòng)脈粥樣硬化的早期階段研究證實(shí)IL-10對(duì)動(dòng)脈硬化有保護(hù)作用，結(jié)果表明，IL-10也能增加早期斑塊的穩(wěn)定性[18]。

我們的研究發(fā)現(xiàn)，模型組相對(duì)于陰性對(duì)照組，血清中IL-10濃度顯著性升高，而在模型組內(nèi)，各藥物處理組IL-10的表達(dá)水平均高于空白對(duì)照組，其中75μg/(kg·d)組的IL-10表達(dá)水平最高。我們認(rèn)為，在雷公藤內(nèi)酯醇作用下，使得Th2細(xì)胞分泌IL-10水平上調(diào)。其結(jié)果是：高表達(dá)IL-10抑制了Th1細(xì)胞合成分泌IFN-γ和IL-2等細(xì)胞因子的能力，阻止單核巨噬細(xì)胞活化和DC細(xì)胞的抗原提呈功能，從而抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)[19-21]；高表達(dá)IL-10下調(diào)DC合成分泌IL-12和TNF-α的能力，抑制T細(xì)胞的增殖[19]，降低單核細(xì)胞的粘附能力，降低CD54、CD80、CD86共刺激分子的表達(dá)，抑制抗原提呈細(xì)胞功能，從而減弱或消除T、B細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致T細(xì)胞無能，使機(jī)體的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)受到抑制[19，22-23]；此外，IL-10能直接作用于T細(xì)胞上的CD28協(xié)同刺激受體，阻斷CD28分子介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而有效抑制T細(xì)胞的增殖、分化，誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫耐受[22-23]。這些生物學(xué)活性顯示IL-10是一個(gè)免疫增殖反應(yīng)和炎癥反應(yīng)的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，具有多效性及廣泛的生物學(xué)作用。

我們的研究發(fā)現(xiàn)，各組相對(duì)于空白對(duì)照組，血清中IL-12濃度顯著性降低，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中75μg/(kg·d)組的IL-12表達(dá)水平最低。75μg/(kg·d)組的IL-12表達(dá)水平與陰性對(duì)照比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。有文獻(xiàn)報(bào)道[3-5]，在AS形成過程中，IL-12的表達(dá)會(huì)顯著上調(diào)。我們的實(shí)驗(yàn)表明，雷公藤內(nèi)酯醇作用下，可以使得DC細(xì)胞分泌IL-12水平下調(diào)。IL-12主要由活化的巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和中性粒細(xì)胞產(chǎn)生，其中DCs是體內(nèi)IL-12的主要來源細(xì)胞。一方面，下調(diào)IL-12，使其與Th0細(xì)胞表面IL-12受體結(jié)合減少，促使Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化分離減弱，從而削弱Th1細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒和局部炎癥有關(guān)的免疫應(yīng)答及其參與的細(xì)胞免疫及遲發(fā)型超敏性炎癥的形成[24]；另一方面，低表達(dá)IL-12能下調(diào)T細(xì)胞、NK細(xì)胞產(chǎn)生干擾素-γ(IFN-γ)的能力，削弱NK細(xì)胞、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，下調(diào)Th1細(xì)胞為主的免疫應(yīng)答水平[25]。在Apoe-/-小鼠斑塊中可以檢測(cè)到IL-12，并且上調(diào)IL-12能夠增加Apoe-/-小鼠斑塊面積[26]。在30周齡的IL-12p40缺失的IL12b-/-Apoe-/-小鼠斑塊面積減少了52%[27]。另一項(xiàng)研究表明，在小鼠體內(nèi)的T細(xì)胞在抗原刺激的情況下，IL-12激活后上調(diào)CCR5的表達(dá)，趨化，并朝CCL5遷移[28-29]。總之這些結(jié)果支持這一概念：IL-12能加速動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程和促進(jìn)炎癥反應(yīng)。這一觀念與我們的研究結(jié)果是一致的。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過3周雷公藤內(nèi)酯醇腹腔注射治療后，ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈的動(dòng)脈粥樣硬化病變程度均有不同程度緩解；與此同時(shí)也能使血清中抗炎因子IL-10的表達(dá)水平上調(diào)、促炎因子IL-12表達(dá)下調(diào)；其中，在75μg/(kg·d)給藥處理下效果最佳。抑制炎癥反應(yīng)可能為雷公藤內(nèi)酯醇治療AS的機(jī)制之一。

[1]Ross R.Atherosclerosis--an inflammatory disease[J].N Engl J Med,1999,340(2):115-126.

[2]Shimada K,Mokuno H,Watanabe Y,et al.High prevalence of seropositivity for antibodies to Chlamydia-specific lipopolysaccharide in patients with acute coronary syndrome[J].J Cardiovasc Risk, 2000,7(3):209-213.

[3]Bobryshev YV.Dendritic cells and their role in atherogenesis[J]. Lab Invest,2010,90(7):970-984.

[4]Cybulsky MI,Jongstra-Bilen J.Resident intimal dendritic cells and the initiation of atherosclerosis[J].Curr Opin Lipidol,2010,21(5): 397-403.

[5]Galkina E,Ley K.Immune and inflammatory mechanisms of atherosclerosis(a)[J].Annu Rev Immunol,2009,27:165-197.

[6]Gawaz M,Stellos K,Langer HF.Platelets modulate atherogenesis and progression of atherosclerotic plaques via interaction with progenitor and dendritic cells[J].J Thromb Haemost,2008,6(2): 235-242.

[7]Cao X,Zhang W,He L,et al.Lymphotactin gene-modified bone marrow dendritic cells act as more potent adjuvants for peptide delivery to induce specific antitumor immunity[J].J Immunol,1998, 161(11):6238-6244.

[8]李明松,王曉芽,袁愛力,等.雷公藤內(nèi)酯醇抑制樹突狀細(xì)胞免疫功能[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2000,6:711-712.

[9]吳俊,梁曉燕,楊奕,等.雷公藤對(duì)Ly－22．2～+細(xì)胞(抑制性T淋巴細(xì)胞)的激活作用[J].中國(guó)病理生理雜志,1996,1:30-32.

[10]Renier G,Skamene E,Desanctis J,et al.Dietary n-3 polyunsaturated fatty acids prevent the development of atherosclerotic lesions in mice.Modulation of macrophage secretory activities[J].Arterioscler Thromb,1993,13(10):1515-1524.

[11]Paigen B,Morrow A,Holmes PA,et al.Quantitative assessment of atherosclerotic lesions in mice[J].Atherosclerosis,1987,68(3): 231-240.

[12]楊小毅,楊永宗,譚健苗,等.一種純系小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病理模型的建立[J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志,1996,4(1):54-57.

[13]Bobryshev YV.Dendritic cells and their role in atherogenesis[J]. Lab Invest,2010,90(7):970-984.

[14]Bobryshev YV,Lord RS.Mapping of vascular dendritic cells in atherosclerotic arteries suggests their involvement in local immune-inflammatory reactions[J].Cardiovasc Res,1998,37(3):799-810.

[15]Hansson G K.Atherosclerosis--an immune disease:The Anitschkov Lecture 2007[J].Atherosclerosis,2009,202(1):2-10.

[16]王治校,周建華,毛山,等.負(fù)向調(diào)控調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對(duì)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化形成的影響[J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志,2011,19(8):627-631.

[17]Tedgui A,Mallat Z.Cytokines in atherosclerosis:pathogenic and regulatory pathways[J].Physiol Rev,2006,86(2):515-581.

[18]Caligiuri G,Rudling M,Ollivier V,et al.Interleukin-10 deficiency increases atherosclerosis,thrombosis,and low-densitylipoproteins in apolipoprotein E knockout mice[J].Mol Med,2003,9 (1-2):10-17.

[19]Canivet C,Bohler T,Galvani S,et al.In vitro mitogen-stimulated T-cell from hepatitis C virus-positive liver transplantation candidates,increases T-cell activation markers and T-cell proliferation [J].Transpl Immunol,2008,19(2):112-119.

[20]Ye Z,Huang H,Hao S,et al.IL-10 has a distinct immunoregulatory effect on naive and active T cell subsets[J].J Interferon Cytokine Res,2007,27(12):1031-1038.

[21]Rosenberg B,Juckett DA,Aylsworth CF,et al.Protein from intestinal Eimeria protozoan stimulates IL-12 release from dendritic cells, exhibits antitumor properties in vivo and is correlated with low intestinal tumorigenicity[J].Int J Cancer,2005,114(5):756-765.

[22]Yang S,Li W,Liu W,et al.ILc10 gene modified dendritic cells induced antigen-specific tolerance in experimental autoimmune myocarditis[J].Clin Immunol,2006,121(1):63-73.

[23]Zhang M,Wang Q,Liu Y,et al.Effective induction of immune tolerance by portal venous infusion with IL-10 gene-modified immature dendritic cells leading to prolongation of allograft survival[J].J Mol Med(Berl),2004,82(4):240-249.

[24]Colombo MP,Trinchieri G.Interleukin-12 in anti-tumor immunity and immunotherapy[J].Cytokine Growth Factor Rev,2002,13(2): 155-168.

[25]Ferro JM,Canhao P,Stam J,et al.Prognosis of cerebral vein and dural sinus thrombosis:results of the International Study on Cerebral Vein and Dural Sinus Thrombosis(ISCVT)[J].Stroke,2004,35(3): 664-670.

[26]Lee TS,Yen HC,Pan CC,et al.The role of interleukin 12 in the development of atherosclerosis in ApoE-deficient mice[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,1999,19(3):734-742.

[27]Davenport P,Tipping PG.The role of interleukin-4 and interleukin-12 in the progression of atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice[J].Am J Pathol,2003,163(3):1117-1125.

[28]顧洪豐,孫慧,楊永宗.慢性應(yīng)激對(duì)ApoE～(-/-)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變與TLR4表達(dá)的影響[J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志,2009,7:584.

[29]Zhang X,Niessner A,Nakajima T,et al.Interleukin 12 induces T-cell recruitment into the atherosclerotic plaque[J].Circ Res, 2006,98(4):524-531.

Effect of triptolide on atherosclerosis of ApoE knock-out mice.

CHENG Zhi-ping1,YU Bin2,XIONG Jun3,LIU Zheng-jun2,LU Jing-bo2.
1.Department of Orthopedics,Tibet People's Hospital,Lhasa 850000,Tibet,CHINA;2. Nanfang Hospital,Southern Medical University,Guangzhou 510515,Guangdong,CHINA;3.Hainan General Hospital, Haikou 570100,Hainan,CHINA

Atherosclerosis;Triptolide;ApoE-/-mice;IL-10;IL-12

R-332

A

1003—6350（2014）12—1725—05

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.12.0672

2014-01-17)