唐 楊，張 錦，程輝躍

(重慶市食品藥品檢驗所/重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121)

?

HPLC法測定冰樟桉氟輕松貼膏中醋酸氟輕松含量

唐 楊，張 錦，程輝躍

(重慶市食品藥品檢驗所/重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121)

目的：建立HPLC法測定冰樟桉氟輕松貼膏中醋酸氟輕松的含量。方法：采用Diamonsil C18(150mm×4.6mm,5μm)色譜柱，流動相：甲醇-乙腈-水(60∶10∶30)，流速：1.0mL·min-1，檢測波長：240nm，柱溫：30℃。結(jié)果：醋酸氟輕松在3.19～63.76μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999)，平均回收率為96.8%(n=9)，RSD為2.0%。結(jié)論：該方法專屬、準(zhǔn)確，可用于冰樟桉氟輕松貼膏中醋酸氟輕松的含量測定。

高效液相色譜法；冰樟桉氟輕松貼膏；醋酸氟輕松；含量測定

冰樟桉氟輕松貼膏是由冰片、樟腦、桉葉油、醋酸氟輕松和水楊酸甲酯制成的復(fù)方制劑，用于治療神經(jīng)性皮炎、結(jié)節(jié)癢疹等瘙癢性皮膚病，其中主藥醋酸氟輕松屬于腎上腺皮質(zhì)激素，起抗炎作用。冰樟桉氟輕松貼膏現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)(試行)WS-10001-(HD-0112)-2002，各國藥典均未收載；但現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對醋酸氟輕松僅作薄層鑒別，未作定量檢測。為完善該品種的質(zhì)量評價體系，筆者參考文獻(xiàn)[1]，建立HPLC測定該制劑中醋酸氟輕松含量的方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀，瑞士梅特勒電子天平；醋酸氟輕松對照品(批號：100010-200507，中國食品藥品檢定研究院，含量為100.0%)；冰樟桉氟輕松貼膏(批號：101203、101205、101206，A廠提供；批號：20101001、20101401、20101601，B廠提供；處方：含醋酸氟輕松0.25g/kg；規(guī)格：4cm×6.5cm)；陰性對照樣品(B廠提供)；甲醇、乙腈為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Diamonsil C18(150mm×4.6mm，5μm)色譜柱；流動相：甲醇-乙腈-水(60∶10∶30)；流速：1.0mL·min-1；檢測波長：240nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL。

2.2 對照品溶液制備

取醋酸氟輕松對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1mL中約含16μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

取本品5片，除去蓋襯,剪成細(xì)條，置索氏提取器濾紙筒中，加入石油醚(30～60℃)150mL，在45～60℃水浴中加熱回流至提取器側(cè)管的溶液澄清，棄去石油醚，更換底瓶；加丙酮100mL，在75℃水浴中加熱回流2h，傾出丙酮溶液，并轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中；取出提取器中的濾紙筒和背襯膠布，置于100mL燒杯中，加丙酮適量，超聲2～3次使殘留的醋酸氟輕松溶解，合并所有丙酮溶液，蒸干，殘渣用甲醇分次溶解并轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，超聲使轉(zhuǎn)移于量瓶中的醋酸氟輕松溶解完全，放冷，加甲醇稀釋至刻度；取出適量以10 000 r·min-1的轉(zhuǎn)速離心5min，取上清液作為供試品溶液。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗

取對照品溶液，置水浴上加熱20min，放冷，作為系統(tǒng)適用性溶液。分別吸取系統(tǒng)適用性溶液、按“2.3”項下方法制備的不含主藥的陰性樣品溶液、對照品溶液和供試品溶液注入色譜儀，記錄色譜圖。理論塔板數(shù)以醋酸氟輕松峰計≥2 000，主峰與降解峰分離度R>1.5，陰性樣品溶液對測定無干擾，結(jié)果見圖1。

圖1 冰樟桉氟輕松貼膏HPLC圖譜

2.5 線性關(guān)系

精密稱取醋酸氟輕松對照品0.01594g，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為儲備液。分別精密量取儲備液1、2、3、5、10、15、20mL置50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，依次進(jìn)樣，測定。以濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A =38.792 C-10.806(r=0.9999)，結(jié)果表明，醋酸氟輕松濃度在3.19～63.76μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗

取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，RSD為0.15%(n=6)，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣，記錄峰面積，RSD為0.2%，表明該溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗

取同一批樣品(批號：101206)6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測定，計算得醋酸氟輕松的平均含量為0.315mg·100cm-2，RSD為1.9%(n=6)。

2.9 回收試驗

取4cm×6.5cm不含主成分的空白貼膏9塊，分成低、中、高三組，加入一定量的醋酸氟輕松對照品各3份，按“2.3”項下方法配制供試品溶液，測定其含量，并計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 醋酸氟輕松回收試驗結(jié)果 (n=9)

2.10 樣品含量測定

取兩個廠家各3批樣品，每批平行制備2份供試品溶液，按擬定的方法測定，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果 (n=2)

3 討論

[2]，采用醇沉法、浸泡過夜、超聲、丙酮回流、索氏提取五種方法，其中浸泡過夜和超聲均考察了乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙腈、氯仿和石油醚(30～60℃)六種有機(jī)試劑，結(jié)果以索氏提取測得的含量最高。索氏提取能有效地分離基質(zhì)，減少干擾，收集被測組分，利于定量測定，故本品采用索氏提取。

以提取器下端有連續(xù)液滴但不成線的滴速為標(biāo)準(zhǔn)，選擇水浴溫度。當(dāng)石油醚(30～60℃)回流時，45～60℃水溫比較適宜；丙酮回流時，75℃左右的水溫比較適宜。

石油醚(30～60℃)用量考察了100、150、200、250mL，當(dāng)采用150mL時足以洗脫膏脂。丙酮用量考察了50、70、100、150mL，當(dāng)采用100mL經(jīng)2h回流后，足以將被測組分洗脫和溶解完全?？紤]到成本、環(huán)境等因素，本法選擇石油醚(30～60℃)用量為150mL、丙酮用量為100mL。

本研究曾嘗試索氏提取結(jié)束，蒸干丙酮溶液，甲醇溶解后直接測定，但回收率一直在85%～92%之間，試驗發(fā)現(xiàn)，在處理過程中醋酸氟輕松被吸附，會導(dǎo)致其損失?！叭〕鎏崛∑髦械臑V紙筒和背襯膠布，置100mL燒杯中，加丙酮適量，超聲(2～3次)使殘留的醋酸氟輕松溶解，合并所有丙酮溶液”，是比較關(guān)鍵的一步，分析原因可能是濾紙筒和背襯膠布會吸附該組分。經(jīng)過這步，回收率可達(dá)到95%左右。又因為醋酸氟輕松在甲醇中微溶，故將轉(zhuǎn)移至量瓶中的溶液再次超聲，以增加該組分在甲醇中的溶解；并以離心取代濾過，減少濾頭對該組分的吸附。最終，回收率基本穩(wěn)定在95%以上。

按含膏量每100cm2不少于1.35g計算，本品理論上每100cm2至少含醋酸氟輕松0.3375mg?？紤]到現(xiàn)行各生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量狀況、樣品均勻性等因素，以最低理論量的90%計算，可暫定含量限度為：本品含醋酸氟輕松≥0.30mg/100cm2。實(shí)驗結(jié)果表明，僅A廠的3批樣品達(dá)到此含量限度。因此，有必要在原標(biāo)準(zhǔn)中增加醋酸氟輕松的含量測定，以保證藥品的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1127-1128.

[2] 丘明明. HPLC法側(cè)定骨通貼膏中鹽酸麻黃堿的含量及含量均勻度[J].中國藥師, 2010,13(5):695-696.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Determination of fluocinolone Acetonide in Borreol Camphor Euclyptus Oil and Fluocinonide Patches by HPLC

Tang Yang, Zhang Jin, Cheng Huiyue

(Chongqing Institute for Food and Drug Control, Chongqing engineering research center for Pharmaceutical process and quality control,Chongqing 401121，China)

Objective:To establish an HPLC method for determination of fluocinolone acetonide in borreol camphor euclyptus oil and fluocinonide patches.Methods:Diamonsil C18(150mm×4.6mm 5μm)column was used. The mobile phase was methol-acetonitrile-water (60∶10∶30) with a flow rate of 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was set at 240nm. The column temperature was 30℃.Results:The calibration curve of fluocinolone acetonide showed a good linearity at 3.19～63.76 μg·mL-1(r=0.9999), and the average recovery was 96.8%(n=9),RSD=2.0%.Conclusion:This method is specific and accurate for determination of fluocinolone acetonide in borreol camphor euclyptus oil and fluocinonide patches.

HPLC；Borreol Camphor Euclyptus Oil and Fluocinonide Patches；Fluocinolone Acetonide；Determination

2014-05-04

唐楊，女，重慶市食品藥品檢驗所工程師，研究方向為藥品質(zhì)量控制與評價。

R284

A

1673-2197(2014)19-0031-02