韓慶安等

高致病性禽流感對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的危害非常嚴(yán)重，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將高致病性禽流感列為必須報(bào)告的動(dòng)物傳染病和A類傳染病，我國將其列為一類動(dòng)物疫病。為了有效預(yù)防和控制禽流感，減少對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的危害，我國對(duì)高致病性禽流感實(shí)行強(qiáng)制免疫政策。為了解不同廠家禽流感疫苗的免疫效果，為禽流感疫苗的選擇提供參考，2012年5-12月份，對(duì)當(dāng)年中標(biāo)的9個(gè)廠家生產(chǎn)3種不同類型14個(gè)批次禽流感疫苗進(jìn)行免疫效果的比對(duì)試驗(yàn)?，F(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)用疫苗

禽流感滅活疫苗共分三種類型，其中重組禽流感H5N1（Re-4+Re-6株）二價(jià)滅活疫苗7個(gè)批次、重組禽流感H5N1（Re-6株）單價(jià)滅活疫苗5個(gè)批次、H5（Re-6株）+H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗2個(gè)批次。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

保定某規(guī)模蛋雞場，整棟2000只120日齡海蘭褐雞群，按照飼養(yǎng)籠，隨機(jī)分成14個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組試驗(yàn)雞100～200只。該棟雞群分別于10日齡和38日齡注射重組禽流感H5N1（Re-4+Re-6株）二價(jià)滅活疫苗各1次，劑量分別為0.3 mL/只和0.5 mL/只；75日齡注射禽流感H5（Re-6株）+H9二聯(lián)滅活苗1次，劑量為0.5 mL/只，現(xiàn)產(chǎn)蛋率為20%，雞群健康狀況良好。

1.1.3 主要試劑

H5亞型禽流感Re-4株、Re-6株HI標(biāo)準(zhǔn)抗原以及相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，H9亞型禽流感HI標(biāo)準(zhǔn)抗原以及相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清均購于國家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室。

1.2 方法

1.2.1 疫苗樣品的準(zhǔn)備

疫苗樣品從我單位疫苗供應(yīng)科隨機(jī)抽取14個(gè)批次中標(biāo)產(chǎn)品，編號(hào)后進(jìn)行免疫效果試驗(yàn)。其中7個(gè)批次不同廠家重組禽流感H5N1（Re-4+Re-6株）二價(jià)滅活疫苗編號(hào)為A1、B1、C1、D1、E1、F1和G1（批次號(hào)分別為：2012009、2012057、2013036、2012048、2011079、2012039和2012024），5個(gè)批次不同廠家重組禽流感H5N1（Re-6株單價(jià)滅活疫苗編號(hào)為C2、E2、G2、H2和I2（批次號(hào)分別為：2012018、2012034、2012004、2012016和20120403），2個(gè)批次不同廠家禽流感H5（Re-6株）+H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗編號(hào)為B3和F3（批次號(hào)分別為2012014和2012018）。

1.2.2 免疫程序

每實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)選用一種疫苗進(jìn)行免疫，劑量0.5 mL/只。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)方案

在分組前從整個(gè)雞群中隨機(jī)抽取30枚雞蛋進(jìn)行禽流感抗體檢測，了解當(dāng)前抗體水平。免疫后每隔1個(gè)月每組隨機(jī)收集雞蛋20～30枚，進(jìn)行卵黃禽流感抗體檢測，直至群體免疫抗體合格率低于國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)為止。

1.2.4 檢測及結(jié)果判定方法

檢測方法按照國標(biāo)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936-2003）中血凝和血凝抑制試驗(yàn)（HA-HI）進(jìn)行，結(jié)果判定方法按照《蛋禽H5亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測技術(shù)規(guī)程》（DB 13/946-2008）規(guī)定方法進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 母源抗體水平

對(duì)30枚120日齡雞群的雞蛋進(jìn)行禽流感H5N1（Re-4株）、禽流感H5N1（Re-6株）和禽流感H9亞型免疫抗體檢測，結(jié)果抗體水平范圍介于（3～6）lg2之間，其中H5亞型Re-4株禽流感群體免疫抗體合格率為63.33%，H5亞型Re-6株禽流感群體免疫抗體合格率為53.33%，H9亞型禽流感群體免疫抗體合格率為56.66%，均低于國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 疫苗免疫結(jié)果

雙價(jià)疫苗免疫效果見圖1和圖2，單價(jià)疫苗免疫效果見圖3，二聯(lián)疫苗免疫效果見圖4和圖5。

3 小結(jié)與討論

從圖1和圖2可以看出，7個(gè)不同廠家的高致病性禽流感重組二價(jià)疫苗免疫1個(gè)月后抗體效價(jià)基本上均達(dá)到峰值，然后逐步緩慢下降，到5～7個(gè)月后免疫抗體群體合格率低于國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)（70%）?？傮w分析，盡管禽流感H5N1（Re-4株）免疫抗體效價(jià)相對(duì)要高于H5N1（Re-6株），但7個(gè)廠家疫苗中H5N1 Re-4株和Re-6株病毒含量配比還是比較合理的，它們的免疫抗體保護(hù)期均比較一致（只有C1疫苗兩個(gè)不同重組毒株免疫抗體保護(hù)期有所不同，其中H5N1 Re-4株免疫抗體保護(hù)期均為5個(gè)月，而H5N1 Re-6株免疫抗體保護(hù)期為6個(gè)月）。從免疫保護(hù)期長短分析，A1疫苗質(zhì)量最好，兩個(gè)不同重組毒株免疫抗體保護(hù)期均為7個(gè)月，其次是D1和G1，兩個(gè)不同重組毒株免疫抗體保護(hù)期均為6個(gè)月。

圖3結(jié)果顯示，5個(gè)不同廠家的H5N1（Re-6株）免疫抗體值和免疫抗體保護(hù)期均相差不大，同圖2結(jié)果比較可以看出，單苗無論是在免疫抗體值方面，還是在免疫保護(hù)期方面，均好于聯(lián)苗，這可能與疫苗中毒株的有效含量配比有關(guān)。

圖4和圖5的結(jié)果表明，兩個(gè)廠家的H5+H9二聯(lián)滅活疫苗中H9亞型禽流感的免疫效果要好于H5亞型禽流感的免疫效果。

在對(duì)不同廠家不同品種禽流感疫苗免疫效果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的同時(shí)，我們也對(duì)抗體值進(jìn)行離散度分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A1、B1、D1、G1、C2、G2、H2、B3和F3疫苗免疫抗體值整齊度較好，離散度相對(duì)較低，均低于40%；保護(hù)期中段抗體值離散度明顯低于保護(hù)期前段和后端，尤其是后端。當(dāng)群體免疫抗體合格率接近或低于70%時(shí)，其離散度值偏高，有的甚至超過80%。所以，養(yǎng)雞場使用上述免疫抗體保護(hù)期為5個(gè)月的疫苗對(duì)產(chǎn)蛋雞群進(jìn)行免疫時(shí)，我們建議其免疫間隔期為4個(gè)月。

本次比對(duì)試驗(yàn)的開展，摸清了2012年部分禽流感疫苗質(zhì)量，確保了使用這些廠生產(chǎn)的疫苗的養(yǎng)雞場雞群的免疫效果，促進(jìn)了疫苗廠家對(duì)其產(chǎn)品質(zhì)量的重視，同時(shí)為以后的禽流感疫苗的選擇提供了參考。

（編輯：郭遠(yuǎn)）