余德照等

摘 要：本文闡述利用鋅元素的特征譜線（鋅原子從基態(tài)到激發(fā)態(tài)在213.8 nm處有最大吸收），創(chuàng)建了原子吸收法測(cè)定桿菌肽鋅預(yù)混劑中鋅的含量，并對(duì)方法進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果表明，該方法在鋅離子濃度為0.25～1.00 μg/mL的范圍內(nèi)，濃度與吸光度之間具有良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=0.401x+0.0437 相關(guān)系數(shù)r=0.9975，且精密度高、平均回收率為100.1% RSD=2.0%。

關(guān)鍵詞：桿菌肽鋅預(yù)混劑；測(cè)定；鋅含量；原子吸收

桿菌肽鋅由鋅與桿菌肽絡(luò)合而成，主要以桿菌肽鋅預(yù)混劑的制劑形式在飼料中使用，有效成分為桿菌肽，其作用主要是抑制革蘭氏陽性菌的生長(zhǎng)。鋅與桿菌肽絡(luò)合，有利于增加桿菌肽的穩(wěn)定性，因此鋅在本品的含量顯得尤為重要。中華人民共和國(guó)獸藥典[1]、歐洲藥典 （EP[2]）及USP藥典 [3]中只有對(duì)桿菌肽鋅原藥中有鋅含量測(cè)定方法。本實(shí)驗(yàn)參照USP藥典35版“桿菌肽鋅”的原子吸收分光光度法，建立了桿菌肽鋅預(yù)混劑的鋅含量原子吸收分光光度測(cè)定法，并對(duì)方法進(jìn)行了驗(yàn)證。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

電子天平（梅特勒-托利多AB135-S型）、攪拌器、原子吸收分光光度計(jì)（北京普析通用 TAS-990型）、乙炔（南平金山氣體有限公司）、空心陰極燈（北京普析通用）。氧化鋅工作基準(zhǔn)物（含量：99.95%～100.05% 天津化學(xué)試劑研究所）；鹽酸（AR. 衡陽市凱信化工試劑有限公司）、15%桿菌肽鋅預(yù)混劑（批號(hào)P120810、P120709、 P120712、P120801綠康生化股份有限公司生產(chǎn)）、10%桿菌肽鋅預(yù)混劑（批號(hào) P120704、P120706 、P120707綠康生化股份有限公司生產(chǎn)）。

1.2 試劑

1 mol/L鹽酸溶液：量取90 mL鹽酸溶液（AR.）至燒杯中加入900 mL超純水?dāng)嚢杈鶆?，待冷卻后移入1 L容量瓶中，少量、多次蕩洗燒杯，洗液需全部移入容量瓶中，最后用超純水定容至刻度，搖勻。

0.01 mol/L鹽酸溶液：取1.00 mL的1 mol/L鹽酸溶液移至1 L容量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻。

0.001 mol/L鹽酸溶液：取1.00 mL的1 mol/L鹽酸溶液移至1000 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻。

鋅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱定氧化鋅工作基準(zhǔn)物3.11 g置于250 mL容量瓶中，加入1 mol/L鹽酸溶液80 mL使溶解，冷卻，用超純水稀釋至刻度，混勻，制成每毫升含10 mg鋅的鋅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

鋅標(biāo)準(zhǔn)中間液：精密吸取鋅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.00 mL移至100 mL容量瓶中，用0.001 mol/L HCL稀釋至刻度，混勻，配制成每毫升含100 μg鋅的鋅標(biāo)準(zhǔn)中間液。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定方法

利用元素在乙炔焰中被轉(zhuǎn)化為基態(tài)原子蒸氣，且在一定的濃度范圍內(nèi)蒸氣對(duì)該元素空心陰極燈發(fā)射的特征譜線的吸收強(qiáng)度與被測(cè)元素含量成正比的原理，在213.8 nm處測(cè)定各鋅溶液的吸光值，用外標(biāo)法定量計(jì)算鋅含量。按照下式計(jì)算：

式中：C為依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的供試品溶液濃度，單位μg/mL；

W為桿菌肽鋅樣品重量，單位mg。

2.2供試品溶液制備

取供試品約100 mg，精密稱定，置于100 mL容量瓶中，加入0.01 mol/L鹽酸溶解并稀釋至刻度，混勻。吸取此溶液1.00 mL移至100 mL容量瓶中，用0.001 mol/L鹽酸稀釋至刻度，混勻，即得。

2.3 鋅標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

分別精密吸取鋅標(biāo)準(zhǔn)中間液0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL、1.00 mL分別移至100 mL容量瓶中，用0.001 mol/L HCL稀釋至刻度，混勻，即得0.25 μg/mL、0.50 μg/mL、0.75 μg/mL、1.00 μg/mL的鋅標(biāo)準(zhǔn)工作液。在乙炔焰中，以0.001 mol/L的HCL為空白進(jìn)行基線校零，在213.8 nm處測(cè)定上述各鋅標(biāo)準(zhǔn)工作液的吸光度，以鋅標(biāo)準(zhǔn)工作液為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線。

結(jié)果見圖1。結(jié)果顯示：鋅標(biāo)準(zhǔn)品工作液濃度為0.25～1.00 μg/mL，線性回歸方程為y=0.401x+0.0437，相關(guān)系數(shù)r=0.9975。

2.4 樣品測(cè)定范圍的確認(rèn)

精密稱定15%桿菌肽鋅預(yù)混劑供試品（批號(hào)P120810）約40 mg、70 mg、100 mg、130 mg、160 mg于100 mL量瓶中，加入0.01 mol/L鹽酸溶解并稀釋到刻度，混勻。分別吸取此溶液1 ml到100 mL量瓶中，用0.001 mol/L鹽酸稀釋至刻度，混勻，制得每毫升含4 μg、7 μg、10 μg、13 μg和16 μg的供試品溶液。在乙炔焰中，以0.001 mol/L HCL為空白進(jìn)行基線校零，測(cè)定供試驗(yàn)品溶液吸光度。以供試品稱量為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)供試品溶液的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制線性曲線。

結(jié)果見圖2。得到供試品稱量范圍在40 ～160 mg，回歸方程為y=0.0023x+0.0479 相關(guān)系數(shù)r=為0.9967。

2.5 精密度試驗(yàn)

兩分析員在不同天測(cè)定，每人每天平行測(cè)定6次。結(jié)果見表1。單人6次測(cè)定結(jié)果的RSD分別為0.7%，0.8%，兩人12次測(cè)定結(jié)果的RSD為1.0%。

2.6 加標(biāo)回收試驗(yàn)

以精密度試驗(yàn)15%桿菌肽鋅預(yù)混劑供試品（批號(hào)P120810）鋅測(cè)定結(jié)果平均值含量6.34%計(jì)，準(zhǔn)確稱取供試品約80 mg置于100 mL容量瓶中，稱取3份，依次加入1000 μg/mL的鋅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL至3份供試品中，按2.2方法操作，制備成3份不同濃度的溶液，每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定3次。計(jì)算9次加樣回收率的RSD。

結(jié)果見表2。平均回收率為100.1%，RSD=2.0%（n=9）， 結(jié)果表明，該方法的回收率良好。

2.7 樣品鋅含量測(cè)定

按2.2方法操作，測(cè)定規(guī)格為10%與15%的桿菌肽鋅預(yù)混劑產(chǎn)品各3批，結(jié)果見表3。

3 討論與結(jié)論

中國(guó)獸藥典中被收錄的桿菌肽鋅預(yù)混劑品種，沒有鋅含量測(cè)定方法，標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)資料中也只有對(duì)桿菌肽鋅原藥中鋅含量有測(cè)定方法，本實(shí)驗(yàn)室參照USP35版，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況經(jīng)過摸索，建立了原子吸收法測(cè)定桿菌肽鋅預(yù)混劑中鋅的含量，并對(duì)方法進(jìn)行了線性、精密度、回收率的驗(yàn)證。

驗(yàn)證結(jié)果表明，該方法在鋅離子濃度為0.25～1.00 μg/mL的范圍內(nèi)，濃度與吸光值之間具有良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=0.401x+0.0437 相關(guān)系數(shù)r=0.9975，且精密度高、重現(xiàn)性好、平均回收率為100.1% RSD=2.0%。使用該方法測(cè)定桿菌肽鋅預(yù)混劑中鋅的含量，可獲得準(zhǔn)確、可靠的結(jié)果。

（編輯：狄慧）

參考文獻(xiàn)：

[1] 中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典[S].2001版一部，2010，103.

[2] European Pharmacopoeia 歐洲藥典 （EP） [S].桿菌肽鋅，2011，1443.

[3] USP35，Volume2，桿菌肽鋅，2012，2297-2298.