盧嫚等

摘要 [目的]探究咪唑類離子液體對(duì)斜紋夜蛾的毒殺作用。[方法]研究了2種新煙堿類殺蟲(chóng)劑和3種咪唑類離子液體對(duì)斜紋夜蛾的室內(nèi)毒力測(cè)定，并研究了2類藥劑混配之后的聯(lián)合毒力。[結(jié)果]吡蟲(chóng)啉48 h的LC50為45.905；啶蟲(chóng)咪48 h的LC50為69.712；溴化1-乙基-3-甲基咪唑48h的LC50為6.968 mg/L；溴化1-丁基-3-甲基咪唑48 h的LC50為9.251 mg/L；1，2-二甲基咪唑48 h的8.043 mg/L。發(fā)現(xiàn)只有吡蟲(chóng)啉+溴化1-丁基-3-甲基咪唑按1∶1比例混配之后具有增效作用，啶蟲(chóng)咪+溴化1-乙基-3-甲基咪唑，按4∶1比例混配后具有拮抗作用，其他比例均為相加作用。[結(jié)論]溴化1-丁基-3-甲基咪唑可使斜紋夜蛾體壁 松軟、縫隙加大、塌陷。

關(guān)鍵詞 斜紋夜蛾；毒力測(cè)定；體壁

中圖分類號(hào) S433 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）03-00765-05

Abstract [Objective] The study aimed to explore the toxic action of imidazole ions on Prodenia litura （Fabricius）. [Method] The toxic action of two kinds of neonicotinoids and three kinds of ionic liquids on P. litura were measured， the virulence of two types of pharmaceutical compounding joint after were studiedl. [Result] The result showed that the LC50 of Imidacloprid and Acetamiprid were 45.905 mg/L and 69.712 mg/L respectively， the LC50 of 1-ethyl-3-methylimidazolium， 1-butyl-3-methylimidazolium and 1，2-dimethylimidazole were 6.968 mg/L， 9.251 mg/L and 8.043 mg/L respectively. The study showed that only imidacloprid + bromide 1-butyl-3-methylimidazolium press after mixed 1∶1 with synergism Acetamiprid + bromide 1-ethyl-3-methyl imidazole， 4∶1 with the proportion of mixed antagonism， other ratios are additive effect. The impact of 1-butyl-3-methylimidazolium on P. litura body wall was studied as well. [Conclusion] The experiments showed that the 1-butyl-3-methylimidazolium lead P. litura body wall to so soft， increase the gap， collapse.

Key words Spodoptera； Virulence； Body wall

斜紋夜蛾[Prodenia litura（Abricius）]又名蓮紋夜蛾，屬鱗翅目，夜蛾科，是一種世界性分布的重要農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)，國(guó)外主要分布于東南亞及南亞， 國(guó)內(nèi)以長(zhǎng)江流域和黃河流域發(fā)生為重[1]。該蟲(chóng)食性廣，寄主植物已知99科290余種，其中喜食的有90種以上。在蔬菜中有甘藍(lán)、白菜、蓮藕、蕹菜、芋艿、豆類、瓜類、茄、辣椒、番茄等，但以十字花科和水生蔬菜為主；作物有甘薯、棉花、大豆、玉米、煙草等[2]。

根據(jù)斜紋夜蛾發(fā)生的世代數(shù)多、發(fā)生量大和易暴發(fā)成災(zāi)等特點(diǎn)，斜紋夜蛾的防治措施仍以化學(xué)防治為主。長(zhǎng)期以來(lái)，由于化學(xué)農(nóng)藥的大量使用，加上操作不規(guī)范，使斜紋

夜蛾普遍產(chǎn)生了抗藥性。國(guó)內(nèi)外已有很多報(bào)道斜紋夜蛾對(duì)有機(jī)氯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯、擬除蟲(chóng)菊酯及蘇云金桿菌等多類殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生了不同程度的抗藥性[3-7]。在臺(tái)灣，斜紋夜蛾對(duì)克百威、速滅磷、氯氰菊酯和氰戊菊酯分別產(chǎn)生了79、63、13和4.1倍的抗性[8]。在有些地區(qū)，對(duì)昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)合成抑制劑如抑太保、卡死克等也產(chǎn)生了不同程度的抗性[9]。即使是防效很好的藥劑溴蟲(chóng)腈，也已有報(bào)道稱海南省?？谑行〔硕攴N群對(duì)溴蟲(chóng)腈的抗性已達(dá)7.98倍[10]。鑒于斜紋夜蛾的危害及其農(nóng)藥的抗性，筆者選取了2種新煙堿類殺蟲(chóng)劑和3種咪唑類離子液體分別單獨(dú)對(duì)斜紋夜蛾進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，還對(duì)2類藥劑混配之后的聯(lián)合毒力進(jìn)行測(cè)定，并通過(guò)電鏡觀察咪唑類離子液體對(duì)蟲(chóng)體體壁的影響，最后測(cè)定了3種咪唑類離子液體對(duì)斜紋夜蛾體內(nèi)乙酰膽堿酯酶（AChE）活性的影響。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)咪、溴化1-乙基-3-甲基咪唑、1，2-二甲基咪唑、溴化1-丁基-3-甲基咪唑均購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司；丙酮、乙醇、戊二醛和乙酸異戊酯、考馬斯亮藍(lán)、MATch、DNTB均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 供試斜紋夜蛾

從湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)購(gòu)置斜紋夜蛾蛹和成蟲(chóng)。養(yǎng)蟲(chóng)溫室9 m2，溫度（26±1）℃，相對(duì)濕度在 60%～70%，晝夜光照時(shí)間為16∶8，以購(gòu)買的飼料喂養(yǎng)。挑選同日產(chǎn)的卵、初孵幼蟲(chóng)，蟲(chóng)體大小一致、健康的4齡幼蟲(chóng)作為毒力測(cè)定的試蟲(chóng)。

1.3 室內(nèi)殺蟲(chóng)活性測(cè)定

采用點(diǎn)滴法。預(yù)試驗(yàn)：先進(jìn)行大范圍濃度系列的初步試驗(yàn)。每個(gè)濃度處理5頭4齡試蟲(chóng)并加入5 g飼料，48 h后以毛筆輕觸試蟲(chóng)，無(wú)反應(yīng)即視為死亡，得出100%致死和全不致死的濃度。正式試驗(yàn)： 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)所得100%致死濃度和全不死的濃度范圍，用丙酮將藥劑稀釋成5個(gè)濃度梯度，每培養(yǎng)皿10頭4齡試蟲(chóng)并加入5 g飼料，以丙酮進(jìn)行對(duì)照。試驗(yàn)時(shí)，用10 μl移液槍將10 μl藥液點(diǎn)于斜紋夜蛾頸部橫紋處，在開(kāi)始試驗(yàn)時(shí)加1次藥，之后均不加藥。分別于12、24、36、48 h觀察死亡數(shù)量。每個(gè)濃度重復(fù)3次。

1.4 聯(lián)合毒力的測(cè)定

新煙堿類殺蟲(chóng)劑與咪唑類離子液體按照吡蟲(chóng)啉+溴化1-乙基-3-甲基咪唑1∶1、1∶2、1∶4；吡蟲(chóng)啉+溴化1-丁基-3-甲基咪唑1∶1、1∶2、1∶4；吡蟲(chóng)啉+1，2-二甲基咪唑1∶1、1∶2、1∶4；啶蟲(chóng)咪+溴化1-乙基-3-甲基咪唑1∶1、1∶2、1∶4；啶蟲(chóng)咪+溴化1-丁基-3-甲基咪唑1∶1、1∶2、1∶4；啶蟲(chóng)咪+1，2-二甲基咪唑1∶1、1∶2、1∶4的比例進(jìn)行混配，殺蟲(chóng)方法采用點(diǎn)滴法，正式試驗(yàn)時(shí)滴于每個(gè)試蟲(chóng)的藥液量是10 μl。

參照孫云沛等方法，將2種新煙堿類殺蟲(chóng)劑分別與3種離子液體按一定比例混合，測(cè)定混配后的藥劑對(duì)斜紋夜蛾的的增效系數(shù)。計(jì)算方法如下：

毒力指數(shù)（TI）=標(biāo)準(zhǔn)劑的LD50或LC50/待測(cè)劑的LD50或LC50×100

混合劑實(shí)際毒力指數(shù)（ATl）=標(biāo)準(zhǔn)劑的LD50或LC50/混合劑的LD50或L50×100

混劑理論毒力指數(shù)（TTI）=[A劑的TI×A劑在混劑中所占的百分?jǐn)?shù)（%）]+[B劑的TI×B劑在混劑中占的百分?jǐn)?shù)（%）]

共毒系數(shù)（CTC）=混劑實(shí)際毒力指數(shù)（ATI）/混劑理論毒力指數(shù)（TTI）/×100

共毒系數(shù)大于120為增效作用，共毒系數(shù)為80～120為相加作用，共毒系數(shù)小于80為拮抗作用。

1.5 體壁電鏡觀察

挑選出蛻皮時(shí)間相差不到1 h的同齡大小一致、健康的4齡幼蟲(chóng)，用10 μl移液槍將10 μl藥液點(diǎn)于斜紋夜蛾背部，同時(shí)設(shè)置對(duì)照組以丙酮為對(duì)照。24 h后用體積分?jǐn)?shù)2.5%戊二醛在4 ℃中固定3 h，然后剪掉頭胸部及腹部末端，再繼續(xù)在2.5%戊二醛在4 ℃中固定12 h。解剖蟲(chóng)體，取其表皮，用0.1 mol/L pH 7.3磷酸緩沖液沖洗2次后，用乙醇梯度脫水（乙醇的體積分?jǐn)?shù)分別為30%、50%、70%、80%、90%、95%）每次5 min，再用無(wú)水乙醇脫水2次，每次5 min。然后置于乙酸異戊酯中置換30 min后放入CO2臨界點(diǎn)干燥儀干燥20 ℃載下干燥25 min后40 ℃再干燥15 min，取出樣品置于Eikon ⅠB-3鍍膜。在S-450型掃描電鏡下觀察體壁，并拍照。