李善姬

【摘要】自身抗體檢測(cè)時(shí)對(duì)自身免疫性疾病進(jìn)行檢測(cè)的方法，由于自身組織在發(fā)生機(jī)體、自身抗原免疫反應(yīng)而導(dǎo)致的疾病則被稱為自身免疫性疾?。ˋID），主要是采取免疫印跡法、間接免疫熒光法、酶聯(lián)免疫吸附法等多種檢測(cè)方法，對(duì)抗嗜中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）、抗可提取性核抗原體（ENA）、抗核抗體（ANA）等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)。本文對(duì)檢測(cè)的質(zhì)量控制、檢驗(yàn)程序分析等進(jìn)行了闡述，要求檢驗(yàn)人員要嚴(yán)格按照程序要求，全面做好自身抗體的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】自身抗體檢測(cè)；質(zhì)量控制；檢驗(yàn)程序分析

【中圖分類號(hào)】R-0 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1671-8801（2014）04-0343-02

自身組織在機(jī)體對(duì)自身抗原發(fā)生免疫反應(yīng)下發(fā)生損害而引起的疾病，稱之為自身免疫性疾?。ˋID）。臨床上沒有自身免疫性疾病的正常人也可能存在自身抗體，因此，從某種意義上來說，自身抗體的存在與自身免疫性疾病是兩種不同的概念。近年來，隨著現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，自身抗體檢測(cè)在自身免疫性疾病的檢測(cè)和診斷，以及臨床用藥指導(dǎo)等方面都有了長(zhǎng)足發(fā)展，并起到了重要的作用。

一、臨床常見的自身抗體檢測(cè)

自身抗體與疾病具有相關(guān)性，并存在與多數(shù)的自身免疫性疾病患者血清中，通過對(duì)自身抗體的檢測(cè)，可以對(duì)自身免疫性疾病進(jìn)行診斷，以及預(yù)后評(píng)估，具有重要的臨床價(jià)值。隨著自身抗體的深入了解，已經(jīng)逐漸成為臨床免疫檢測(cè)的重要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，臨床中應(yīng)用廣泛。有抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）、抗核抗體（ANA）、類風(fēng)濕因子（RF）、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（CCP）、抗角蛋白抗體（AKA）、抗肝抗原自身抗體、抗可提取性核抗原抗體（ENA）等多種抗體檢測(cè)，下面介紹幾種抗體在臨床中的應(yīng)用。

1.抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）

在DNA脫氧核糖磷酸框架上是抗體與細(xì)胞核的反應(yīng)點(diǎn)，其靶抗原是雙螺旋DNA，又有天然DNA抗體之稱。是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的主要臨床特征，有研究顯示，臨床中有30%-90%系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的抗雙鏈DNA抗體檢測(cè)為陽性?？闺p鏈DNA抗體隨著疾病活動(dòng)的控制呈正相關(guān)，并可以作為系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病的治療效果的監(jiān)測(cè)，以及預(yù)后的評(píng)價(jià)。呈陽性的患者發(fā)生腎炎的機(jī)率非常大，約為呈陰性的患者腎炎發(fā)生率的12倍。

2.抗核抗體（ANA）

自身真核細(xì)胞成分為靶抗原的各種細(xì)胞核的自身抗體統(tǒng)稱為抗核抗體，能夠與各種動(dòng)物的細(xì)胞核發(fā)生反應(yīng)，不具有種屬和器官特異性，其性質(zhì)主要體現(xiàn)為IgG、IgD、IgA和IgM。ANA在診斷自身免疫性疾病中的臨床價(jià)值已經(jīng)在多種疾病中得到證實(shí)，尤其是風(fēng)濕性疾病、多發(fā)性動(dòng)脈炎、重癥肌無力、橋本甲狀腺炎等疾病中診斷中具有重要意義。

3. 抗嗜中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）

ANCA 是系統(tǒng)性血管炎的血清標(biāo)志性抗體，該抗體靶抗原為人嗜中性粒細(xì)胞胞漿成分，主要有細(xì)胞質(zhì)型和核周型兩種類型。該抗體與臨床多種小血管炎性疾病關(guān)系密切，對(duì)于全身性血管炎和Wegener肉芽腫患者，細(xì)胞質(zhì)型呈陽性，且特異性超過97%，初發(fā)非活動(dòng)期患者敏感性為50%，活動(dòng)期敏感性為100%；對(duì)于壞死性新月體型腎小球腎炎、變態(tài)反應(yīng)性肉芽腫性脈管炎和多血管炎患者，核周型在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)較多。

4.抗單鏈DNA抗體（ss-DNA）

該抗體以脫氧核糖或核糖為靶抗原，也有變性DNA抗體之稱。系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的ss-DNA檢出率通常在50%-60%之間，混合性結(jié)締組織疾病、硬皮病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、皮肌炎、藥物誘導(dǎo)所致狼瘡等風(fēng)濕性疾病患者的ss-DNA檢出率在10%-70%之間，另外，也可能在正常的老年人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，但是不具有疾病特異性。

二、常用檢驗(yàn)方法

臨床中應(yīng)用較為廣泛的檢驗(yàn)方法有：間接免疫熒光法（IIF）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、免疫印跡法（WB）、放射免疫法（RIA）、免疫斑點(diǎn)法（IDA）。

三、自身抗體檢測(cè)的質(zhì)量控制和檢驗(yàn)程序

自身抗體檢測(cè)的質(zhì)量控制（QC）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平的一個(gè)重要衡量指標(biāo)，是實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的重要保證。由于自身抗體檢測(cè)多為定性實(shí)驗(yàn)或半定量實(shí)驗(yàn)（以滴度報(bào)告），特別強(qiáng)調(diào)每次實(shí)驗(yàn)中應(yīng)同時(shí)設(shè)置檢測(cè)陽性對(duì)照，陰性對(duì)照，以監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時(shí)，也便于對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部、實(shí)驗(yàn)室之間質(zhì)量控制的可比性、重復(fù)性進(jìn)行評(píng)估。

1.進(jìn)行自身抗體檢測(cè)的要求

（1）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有充分的空間、良好的照明和空調(diào)設(shè)備；設(shè)施和設(shè)備配備合理，能滿足自身抗體檢測(cè)的要求；（2）檢測(cè)用試劑盒必須由具有相關(guān)資質(zhì)的廠家提供，并按規(guī)定保存；（3）熒光顯微鏡的質(zhì)量和熒光光源的強(qiáng)度是保證良好分辨率的基礎(chǔ)；（4）每家開展檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)建立其自身抗體檢測(cè)項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件；（5）相對(duì)固定檢測(cè)人員，并嚴(yán)格按照SOP文件要求進(jìn)行檢測(cè)。陽性結(jié)果最好與該患者過去檢測(cè)檔案進(jìn)行復(fù)核后再發(fā)出結(jié)果；（6）開展自身抗體檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室在保證室內(nèi)質(zhì)控的同時(shí)，應(yīng)參加國(guó)家或國(guó)際權(quán)威組織的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。（7）質(zhì)控品與患者標(biāo)本在同樣條件下進(jìn)行測(cè)定，并要特別注意質(zhì)控品的保存條件和保質(zhì)期，不得使用保存不當(dāng)和超過保質(zhì)期的質(zhì)控品；（8）微量加樣器必須定期進(jìn)行校準(zhǔn)， 從而使其保持有足夠的準(zhǔn)確度和精密度；（9）每家開展檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)對(duì)廠家推薦的熒光標(biāo)記物的稀釋方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，應(yīng)用已知滴度的陽性血清去滴定標(biāo)記物，以建立操作過程中的正確稀釋方法；（10）酶標(biāo)儀應(yīng)定期校準(zhǔn)，制定標(biāo)準(zhǔn)操作程序和嚴(yán)格的維護(hù)保養(yǎng)措施。

2.實(shí)驗(yàn)基質(zhì)的選擇要求

實(shí)驗(yàn)基質(zhì)的選擇實(shí)驗(yàn)基質(zhì)的質(zhì)量在很大程度上取決于間接免疫熒光法對(duì)自身抗體進(jìn)行測(cè)定的效果。自身抗體檢測(cè)中的實(shí)驗(yàn)基質(zhì)，一般用動(dòng)物或人類的細(xì)胞或組織，須經(jīng)一系列方法進(jìn)行處理，如HEP-2 細(xì)胞的培養(yǎng)、吸附和固定，冰凍組織切片的制備、貼片等。越來越多的實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)使用商品化的自身抗體間接免疫熒光檢測(cè)試劑盒。由于生產(chǎn)工藝先進(jìn)，質(zhì)控措施嚴(yán)格，從而保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的可信性。檢測(cè)不同的自身抗體應(yīng)選擇不同來源的實(shí)驗(yàn)基質(zhì)， 如檢測(cè)ANA 一般用人上皮HEP-2 細(xì)胞和靈長(zhǎng)類動(dòng)物肝臟。而器官和組織特異性自身抗體則選用相應(yīng)的抗原器官組織。

熒光標(biāo)記二抗的選擇在自身抗體檢測(cè)中，熒光標(biāo)記二抗的質(zhì)量直接影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。熒光素與第二抗體的偶聯(lián)需要保持一定的摩爾比值（F/P，熒光素/抗體蛋白比值），F(xiàn)/P 值過高將產(chǎn)生明顯的非特異性熒光。

3. 檢驗(yàn)程序

（1）標(biāo)本處理：標(biāo)本的處理首先保證檢測(cè)系統(tǒng)要具有完整性；常溫下進(jìn)行標(biāo)本處理操作；正確貯存試劑，保證日期。如二抗的貯存不合理，自身抗體效價(jià)則下降明顯。建議實(shí)驗(yàn)室各自建立每種玻片的最佳容量并寫入SOP 中；為防止標(biāo)本干燥，孵育過程要在潮濕箱內(nèi)進(jìn)行；加樣要準(zhǔn)確，防止向鄰近區(qū)域溢漏；孵育、洗滌按要求進(jìn)行；讀片后， 玻片置于冰箱， 可保存24 小時(shí)。對(duì)于24小時(shí)以上的保存，需要在零下20℃下密封放置。（2）血清稀釋按試劑說明書要求稀釋血清；結(jié)果為陽性的血清進(jìn)行等比稀釋。（3）陽性和陰性質(zhì)控品的操作與標(biāo)本操作過程相同；對(duì)于重要的熒光圖型，每個(gè)一定間隔， 應(yīng)采用疾病特異的自身抗體陽性質(zhì)控品；具有商品化的陽性質(zhì)控品，實(shí)驗(yàn)室可以自己制備；理想化的是應(yīng)用商品化或CDC的特定質(zhì)控品；根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和指南， 參加獨(dú)立于供應(yīng)商的室間質(zhì)評(píng)。（4）采用顯微鏡判斷熒光強(qiáng)度；應(yīng)重視有絲分裂， 判斷基本圖型； 更換燈泡后， 應(yīng)對(duì)顯微鏡作一定的校準(zhǔn)。

3.結(jié)果的判斷和解釋

檢驗(yàn)報(bào)告中必須描述每個(gè)圖型及其滴度；有的圖型具有疾病相關(guān)性， 也可提示做特異性免疫檢測(cè)。通過自身抗體效價(jià)與滴度消長(zhǎng)，可判斷疾病的活動(dòng)性，觀察治療反應(yīng)，指導(dǎo)臨床治療。檢驗(yàn)報(bào)告中必須描述每個(gè)圖型及其滴度；有的圖型與疾病有相關(guān)性，也可提示做特異性免疫檢測(cè)。

結(jié)合患者年齡、自身抗體水平以及相應(yīng)的熒光模式等方面對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合分析和解釋。對(duì)于意義不明確、圖型不典型的情況，在檢驗(yàn)報(bào)告中添加注解，便于臨床醫(yī)師充分了解患者情況；檢驗(yàn)報(bào)告應(yīng)由資深人員出具；各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考區(qū)間。

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